李 楣

（重慶市第十三人民醫(yī)院，重慶 400053）

組織病理檢查是臨床上常用的診斷方法，其應(yīng)用的范圍較廣。免疫組織化學(xué)技術(shù)又被稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是指用標(biāo)記后的通用性抗原或抗體，在組織細(xì)胞的原位通過抗原或抗體的免疫反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)的抗原或抗體進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)方法。免疫組織化學(xué)技術(shù)是制作病理組織切片中常用的技術(shù)。在使用免疫組織化學(xué)技術(shù)制作病理組織切片的過程中，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都會(huì)影響到病理組織切片的整體制片效果，從而影響后期的病理檢驗(yàn)結(jié)果。為了進(jìn)一步提高制作病理組織切片的有效率，筆者對(duì)30片乳腺組織標(biāo)本及30片肝組織標(biāo)本在免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控制管理下制作病理組織切片，取得了很好的效果。

1 資料與方法

1.1 一般材料

本次研究的對(duì)象為30片乳腺組織標(biāo)本和30片肝組織標(biāo)本。這60片組織標(biāo)本均來自于重慶市第十三人民醫(yī)院的手術(shù)室或病理活檢室。將這60片組織標(biāo)本隨機(jī)分為參照組和研究組，每組各有30片組織標(biāo)本。兩組組織標(biāo)本的狀態(tài)相比，P＞0.05，可進(jìn)行對(duì)比。

1.2 研究方法

本次研究使用的試劑為甲醛、蘇木精、二甲苯、無水乙醇、硫酸鋁、碘酸鈉、石蠟及相關(guān)的免疫組化試劑。本次研究使用的儀器有徠卡RM2235輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)、全自動(dòng)組織脫水機(jī)、包埋機(jī)及生物組織攤烤片機(jī)等，使用的干燥箱是由天津市泰斯特儀器生產(chǎn)的202-1AB型恒溫干燥箱，使用的圖像分析儀是由日本進(jìn)口的OLYMPUS BX41+Image pro plus圖像分析儀。本次研究制作病理組織切片的標(biāo)準(zhǔn)面積為1.5 cm×1.5 cm。為參照組組織標(biāo)本使用傳統(tǒng)方法制作病理組織切片。具體的方法是：1）對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行固定。在組織標(biāo)本離體后的30 min內(nèi)，將其放入固定液中或進(jìn)行低溫保存。然后，將組織標(biāo)本放入濃度為10%的中性緩沖甲醛溶液中進(jìn)行8～24 h的固定處理，固定液量為組織塊體積的4～10倍。2）對(duì)固定后的組織標(biāo)本進(jìn)行抗原修復(fù)。使用熱修復(fù)法對(duì)固定后的組織標(biāo)本進(jìn)行抗原修復(fù)，通過熱效應(yīng)引導(dǎo)抗原。進(jìn)行抗原修復(fù)的溫度應(yīng)≥100℃，進(jìn)行抗原修復(fù)的時(shí)間為3～15 min，修復(fù)液的pH值為7.5～8.5。3）嚴(yán)格按照操作步驟對(duì)修復(fù)后的組織標(biāo)本進(jìn)行切片。具體要求是：⑴脫蠟要充足。⑵增加試劑時(shí)要均勻、足量，試劑的面積要比切片組織的界限寬出0.05～0.35 cm，以防止發(fā)生邊緣效應(yīng)。⑶合理地控制組織標(biāo)本在浸液時(shí)的溫度及烘烤切片時(shí)的溫度。為研究組組織標(biāo)本在免疫組化病理技術(shù)質(zhì)量控制管理下制作病理組織切片。具體的方法是：1）在室溫下對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)的脫蠟切片后，將其放入濃度為3%的雙氧水中浸泡20 min，用PBS（磷酸鹽緩沖液）沖洗切片3次，5 min/次，持續(xù)15 min。2）將700 ml pH值為6.0的檸檬酸緩沖液融入1000 ml的燒杯中，將溶液加熱至沸騰后放入標(biāo)記有CK19抗體、Ki-67抗體、HBcAg抗體、HBsAg抗體的切片，再加熱15 min，然后在每一個(gè)切片上滴加一抗后，將其放在40℃的冰箱內(nèi)過夜孵育。3）用pH值為7.4的PBS沖洗切片3次，5 min/次，持續(xù)沖洗15 min。4）在室溫下，在每個(gè)切片上滴加二抗孵育15 min，再用pH值為7.4的PBS沖洗切片3次，5 min/次，持續(xù)15 min。5）將切片放入DAB（顯色劑）中顯色5～10 min，再使用蘇木精對(duì)切片進(jìn)行襯染、水洗，最后用脫水透明中型樹膠對(duì)切片進(jìn)行封固處理。

1.3 病理組織切片質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

在顯微鏡下觀察兩組病理組織切片的質(zhì)量。將病理組織切片分為優(yōu)質(zhì)片、良質(zhì)片和差質(zhì)片三個(gè)等級(jí)。1）優(yōu)質(zhì)片：編號(hào)清晰，薄厚適宜，色彩鮮亮，對(duì)比明確，易于觀察。2）良質(zhì)片：編號(hào)清晰，有較少的褶皺，無污染及活氣泡，色彩較為鮮亮，比較容易觀察[1]。3）差質(zhì)片：編號(hào)不清晰，有較多的褶皺或氣泡，顏色不清晰，對(duì)比不明顯，不易于觀察。有效制片率=（優(yōu)質(zhì)片數(shù)+良制片數(shù)）/總片數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將本次研究的數(shù)據(jù)錄入到SPSS20.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與參照組病理組織切片相比，研究組病理組織切片的有效制片率更高（P＜0.05）。詳見表1。

表1 兩組組織標(biāo)本有效制片率的比較

3 討論

免疫組織化學(xué)技術(shù)是進(jìn)行病理學(xué)檢查的常用技術(shù)[2]。嚴(yán)格控制病理組織切片的制作質(zhì)量，是提高臨床病理學(xué)檢查準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。本次研究的結(jié)果顯示，與參照組病理組織切片相比，研究組病理組織切片的有效制片率更高。這說明，在制作病理組織切片的過程中實(shí)施免疫組化病理技術(shù)質(zhì)量控制管理的效果顯著，可有效地提高病理組織切片的有效制片率，為進(jìn)行病理檢驗(yàn)的可效性和準(zhǔn)確性提供保證。筆者對(duì)本次研究的結(jié)果總結(jié)如下：1）取材是制作病理組織切片的基礎(chǔ)。在取材時(shí)常見的問題有：⑴選擇病變組織的體積不當(dāng)（如病變組織變形、壞死等）[3]。⑵對(duì)病變組織的位置記錄或描述不當(dāng)。因此，在取材時(shí)應(yīng)注意以下事項(xiàng)：⑴在選擇病變組織標(biāo)本時(shí)，要科學(xué)地確定取材的體積。⑵在取材后，要及時(shí)處理組織標(biāo)本。⑶在記錄時(shí)，要清晰地描述組織標(biāo)本的具體情況。⑷在取材時(shí)，要避免污染組織標(biāo)本。2）新鮮的組織標(biāo)本僅在適當(dāng)固定的前提下，能夠保持其原有的細(xì)胞固有形態(tài)。但是，由于細(xì)胞中含有多種水解酶，在細(xì)胞缺氧時(shí)，水解酶會(huì)分解、破壞組織細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，使組織發(fā)生自溶的現(xiàn)象[4]。因此，在制作病理組織切片時(shí)需注意以下事項(xiàng)：⑴在切下組織標(biāo)本后，需快速地將離體的組織放入固定液中，以便對(duì)標(biāo)本進(jìn)行全面的固定。⑵在對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行脫水、浸蠟，包埋及切片的過程中，需按照實(shí)際情況選擇相應(yīng)的試劑，以增強(qiáng)對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行處理的效果，確保病理組織制片的質(zhì)量。3）在進(jìn)行免疫組化染色的過程中，需注意染色的工作路徑，以保證病理組織切片的染色效果，避免出現(xiàn)無色片或假陽(yáng)性片等情況[5]。因此，在制作病理組織切片時(shí)需注意以下事項(xiàng)：⑴在進(jìn)行抗原高壓修復(fù)的過程中，需選擇良好的染色劑，以保證染色的效果和著色的質(zhì)量，從而提升病理組織切片的著色能力。⑵在進(jìn)行免疫組化抗原陰性與陽(yáng)性對(duì)比試驗(yàn)期間，需要注意對(duì)病理組織切片進(jìn)行染色的時(shí)間。⑶在進(jìn)行染色的過程中，需嚴(yán)格按照規(guī)范性流程進(jìn)行操作，避免污染病理組織切片，以保證病理組織切片的制片質(zhì)量。

綜上所述，在制作病理組織切片的過程中實(shí)施免疫組化病理技術(shù)質(zhì)量控制管理的效果顯著，可有效地提高病理組織切片的有效制片率，為臨床病理檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度達(dá)標(biāo)奠定良好的基礎(chǔ)。