鐘白玉，徐 艷，鄧向芬，張 靜，高 星，宋志強，翟志芳

馬拉色菌為馬拉色菌毛囊炎的病原菌，在臨床檢測中一般用KOH涂片直接鏡檢常因圓形均質的暗綠色反光顆粒的脂肪滴與馬拉色菌菌體極其相似而混淆，難以獲得滿意效果。本研究對100份馬拉色菌毛囊炎患者臨床標本分別采取真菌熒光染色、過碘酸雪夫染色（PAS）和美藍染色進行染色效果及陽性率比較，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 病例來源

收集2017年6月～8月皮膚科門診擬診為馬拉色菌毛囊炎患者100例?；颊吣挲g13～45歲，男72例，女28例。病例納入標準：擬診為馬拉色菌毛囊炎；皮損多發(fā)；無明顯膿皰、糜爛滲出等；同意進行該項檢查者。

1.2 染色液（試劑）

溯康?真菌熒光染色液（南京漢瑞生物科技有限公司生產，重慶林睿康醫(yī)療器械有限公司提供，批準文號：蘇寧械備20160022號）；PAS染色試劑：按王端禮主編《醫(yī)學真菌學-實驗室檢驗指南》的配方配制[1]；美藍染色液：按葉順章和張木有主編的《性傳播疾病實驗診斷手冊》的配方配制[2]。

1.3 取材及染色方法

主要選擇胸背部和面頸部基本一致的紅色丘疹進行取材，取其丘疹內容物或皮屑，每例患者取3份標本分別用于3種染色。以75%乙醇消毒皮損表面，用拔毛鑷或鈍手術刀片刮取病變皮屑或擠出有白色膿頭的丘疹內容物，分別涂布于3張潔凈的載玻片上備用。分別以熒光顯微鏡或普通光學顯微鏡在中低倍鏡下尋找視野中的可疑的染色陽性菌體，再以高倍鏡證實并記錄。

1.3.1 熒光染色法 在涂布標本的載玻片上滴加1滴溯康?真菌熒光染色液，蓋上蓋玻片使染色液與標本充分結合，輕壓蓋玻片并吸去蓋玻片周邊多余染色液，數(shù)秒鐘后于熒光顯微鏡下觀察和記錄。

1.3.2 PAS染色法 已涂布標本載玻片置于95%乙醇中固定1 min，水洗后再將載玻片浸于1%過碘酸溶液中氧化5 min后水洗，把載玻片放于雪夫試劑中染色5 min后水洗，再以偏亞硫酸鈉溶液浸泡1 min后，水洗，自然涼干，滴加1滴香柏油置于普通光學顯微鏡下觀察。

1.3.3 美藍染色法 在涂布標本的載玻片上滴加1滴美藍染色液染1～2 min水洗，自然涼干，滴加1滴香柏油置于普通光學顯微鏡下觀察。

2 結果

經真菌熒光染色后，可見圓形或葫蘆形的酵母孢子呈亮綠色熒光,背景反差較大，圖像清晰，皮屑呈淺藍色,而其他成分（如脂滴、氣泡）不著色；②經PAS染色后，高倍鏡下可見孢子染成深玫瑰紅色，較為清晰，角質細胞呈淡紅色；③經美藍染色后，可見圓形、出芽成葫蘆形的紫紅色酵母孢子，較為清晰，脂滴、氣泡等背景中的雜質不著色，皮屑亦染成深藍色（圖1）。3種染色方法的陽性率比較見表1。

表1 3種染色方法在馬拉色菌毛囊炎診斷中的陽性率比較 [例數(shù)(%)]

3 討論

圖1 不同染色方法檢測馬拉色菌鏡下所見

馬拉色菌為健康人皮膚正常寄生菌群之一，但與馬拉色菌毛囊炎、頭皮屑過多、脂溢性皮炎、銀屑病、痤瘡等有關。臨床中，常規(guī)KOH涂片檢測方法對于馬拉色菌的檢測敏感度并不能很好滿足臨床要求。筆者對目前應用于臨床的真菌熒光染色、PAS染色及美藍染色3種檢測方法進行了比較分析，三者各有其優(yōu)缺點。首先，真菌熒光染色液可用于人體組織或樣本的染色處理，包括皮屑、甲屑、毛發(fā)、尿液、體液及陰道分泌物等，在熒光顯微鏡下定性檢測真菌。主要原理是熒光增白劑與組織中可能存在的真菌細胞壁β-多糖結合，如幾丁質和纖維素等，在紫外光的激活下，可使真菌顯示出熒光。通過250～400 nm濾鏡的熒光顯微鏡下觀察，判斷真菌的存在，即使僅有少量的菌體，也能迅速捕獲，大大節(jié)省了檢測時間，并提高了陽性率。PAS染色為傳統(tǒng)的多糖成分染色法，是利用過碘酸作為氧化劑，將多糖的葡萄糖分子的兩個相鄰帶有羥基的-C-C-鍵打開，生成醛基再與染色劑結合。雪夫試劑中的堿性品紅為一種混合物，經過亞硫酸和二氧化硫的作用，醌式結構的雙鍵被破壞而消失形成無色復紅，再經氧化后醛基與無色復紅液進行結合呈紫紅色，菌體染色成紫紅而清晰可見。美藍作為一種細胞染色劑，其染色方法是利用美藍染料對組織蛋白、菌體（多糖成分）有異染性，在配制時若加微量10% KOH溶液即成堿性美藍染色液，染色過程中使皮屑標本充分溶解，以便菌體與染色液較好結合，菌體染色呈深藍色，而背景僅著淡藍色，增加了對比度，提高了分辨力。

經比較研究表明，3種染色方法對馬拉色菌均具有很高的陽性檢出率，且其檢測陽性率相接近。但三者相比較，真菌熒光染色法簡便快捷，僅需1滴染色液立即壓片即可熒光顯微鏡觀察，而且鏡下背景反差較大，圖像清晰，相比于PAS和美藍染色法更易于觀察，省時省力。但真菌熒光染色法成本相對較高，需要在熒光顯微鏡下觀察，限制了其臨床的廣泛使用。PAS染色法菌體被染成玫瑰紅色，結締組織染成淺紅色，菌體較易于識別，但其操作相對繁鎖、費時，且陽性率略低于另外兩種方法。相對于前二者而言，美藍染色法的菌體染成紫紅色，易與脂滴、細胞間隙相鑒別，而且該方法操作簡便，對于初學者易于常握，適用于臨床廣泛應用。