徐洪濱 李四山 宗衛(wèi)陽(yáng)

（1.如皋市家畜改良站，江蘇如皋 226500;2.如皋市畜牧獸醫(yī)站，江蘇如皋 226500）

1 豬藍(lán)耳病介紹

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種急性高致死性疫病。發(fā)病主要特征為懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎等，母豬流產(chǎn)率可達(dá)30%以上；仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸道癥狀，感染率可達(dá)100 %，死亡率在50%以上。

豬藍(lán)耳病誘因復(fù)雜，主因?yàn)樗{(lán)耳病病毒的感染。受此影響多數(shù)免疫缺失，加重其他病菌和病毒的感染概率，比如：豬瘟、豬狂犬病、附紅細(xì)胞體病、豬巴氏桿菌、豬弓形體等等，而形成較高的致死率。除此之外，其他的一些不良應(yīng)激。比如：接種防疫工作不到位，同樣為不可忽視的關(guān)鍵因素。此外，處于惡劣的養(yǎng)殖環(huán)境、舍內(nèi)養(yǎng)殖密度過(guò)大、長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼喂?fàn)I養(yǎng)不全、飼料管理不善等等，都將加重此病的易感性。豬藍(lán)耳病造成的危害極大，主要是體現(xiàn)在：其一，大量母豬流產(chǎn)，死胎率高升，大量仔豬死亡，影響豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。其二，可造成豬體的免疫抑制，導(dǎo)致其他疫苗接種的失敗，易混合感染豬瘟、附紅細(xì)胞體病、豬肺疫、豬傳染性胸膜肺炎等等，而加重致死率。

在豬藍(lán)耳病防控管理過(guò)程中，接種防疫疫苗為最佳的選擇。目前我國(guó)使用的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗均為活疫苗，據(jù)報(bào)道活疫苗免疫后可在動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制并持續(xù)存在。為摸清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后在豬體內(nèi)的存在時(shí)間，探究高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后病毒血癥和抗體消長(zhǎng)規(guī)律的情況，對(duì)規(guī)范接種防疫管理工作大有裨益。

2 天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后病毒血癥和抗體消長(zhǎng)規(guī)律的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1 試驗(yàn)對(duì)象

如皋市某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)，選擇日齡在20～25之間未經(jīng)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的仔豬15頭，經(jīng)熒光RT-PCR檢測(cè)，待試驗(yàn)的豬只健康無(wú)感染豬瘟、豬藍(lán)耳病、II型圓環(huán)病毒感染的情況，上述病毒檢測(cè)均顯陽(yáng)性。

2.1.2 試驗(yàn)用疫苗

天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，由政府統(tǒng)一采購(gòu)發(fā)放。

2.1.3 RT-PCR試劑

鑒別檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）高致病性強(qiáng)毒和致弱TJM-F92株疫苗毒的RT-PC R引物，由華威特生物科技有限公司提供，擴(kuò)增片段位于NSP2基因；dNTP，M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，RNA酶抑制劑、Ex Taq聚合酶等，購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司。

2.1.4 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒

購(gòu)自北京天之泰生物科技有限公司，法國(guó)LSI公司生產(chǎn)。

2.1.5 核酸提取試劑

[42]央廣網(wǎng)：《對(duì)接“一帶一路”倡議，柬埔寨文化旅游發(fā)展迎來(lái)新契機(jī)》，http://dl.cnr.cn/tnhb/20171031/t20171031_524007040.shtml，2017年10月26日。

核酸提取試劑盒（磁珠法），購(gòu)自西安天隆生物科技有限公司。

2.1.6 試驗(yàn)器材

eppendorf微量移液器，PC R儀，電泳儀，凝膠成像系統(tǒng)，西安天隆生物科技有限公司NP968核酸提取儀，伯樂(lè)iMark酶標(biāo)儀。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 注射疫苗

根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)規(guī)定的劑量接種，規(guī)范接種操作，選擇安全有效的防疫疫苗。

2.2.2 過(guò)程比較

生豬在接種試驗(yàn)前，需采血1次。疫苗注射后，每周采血1次，連續(xù)采血10周。之后，間隔2周采血1次，連續(xù)采血4次。

2.2.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測(cè)

用RT-PCR方法檢測(cè)。

2.2.4 接種后抗體檢測(cè)

根據(jù)抗體檢測(cè)試劑盒要求，按照步驟依次進(jìn)行檢測(cè)。判定標(biāo)準(zhǔn)，阻斷率（IRPC）在20%以上的，確定為抗體陽(yáng)性。而且，阻斷率越大的，抗體水平同樣越高。

2.3 調(diào)查結(jié)果

2.3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化情況

上表為血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測(cè)結(jié)果，從統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)來(lái)看，在沒(méi)有接種防疫之前，所有生豬體內(nèi)都沒(méi)有檢測(cè)出疫苗毒核酸。而在接種后1周開(kāi)始，陸陸續(xù)續(xù)在生豬體內(nèi)檢測(cè)出TJM-F92株疫苗病毒核酸顯陽(yáng)性。第一周4頭，第二周2頭，第三周7頭，第四周3頭，第五周0頭，第六周1頭。自第六周開(kāi)始，被檢測(cè)的15頭生豬檢測(cè)毒血癥均顯陰性。為此，可以判斷血清中TJM-F92株疫苗病毒持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)也就6周，之后會(huì)逐漸減弱消失。

表1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

表2 接種后抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3.2 天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)規(guī)律

從統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來(lái)看，免疫之前豬體受母源抗體的保護(hù)，被檢測(cè)抗體顯陽(yáng)性的為13頭，抗體陽(yáng)性率為87%。開(kāi)始接種免疫疫苗后，豬群中檢測(cè)出來(lái)的抗體陽(yáng)性率逐漸下降，第二周降低到最低值有33%。而后，抗體檢測(cè)陽(yáng)性率開(kāi)始慢慢回升，第3周47%；第4周 53%，到第五周，所有豬只都檢測(cè)均顯陽(yáng)性。這種狀態(tài)一直持續(xù)到第十二周，抗體陽(yáng)性檢測(cè)率維持在100%。從十四周開(kāi)始，陽(yáng)性檢測(cè)率略有下降，始終維持在93%。從抗體平均阻斷率來(lái)看，接種防疫之前，同樣維持在較高水平，72%。接種后開(kāi)始緩慢的下降，第1周26%，第2周降低到最低為18%。從第二周開(kāi)始，抗體平均阻斷率開(kāi)始回升。一直到第六周到達(dá)最高值為78%。而后，又開(kāi)始緩慢的下降。

3 討論分析

3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化情況

從表1統(tǒng)計(jì)的接種活疫苗后病毒存在時(shí)間的變化規(guī)律來(lái)看，不同的生豬在接種后毒血癥存在的時(shí)間長(zhǎng)短不一?？梢哉f(shuō)，有的不出現(xiàn)毒血癥，而有的存在幾天，有的存在1周。甚至，最長(zhǎng)的可持續(xù)到接種后第六周。從此可以看出來(lái)，天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后毒血癥持續(xù)最長(zhǎng)的時(shí)間應(yīng)該是在6周。

3.2 （TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)

從表2抗體檢測(cè)結(jié)果的消長(zhǎng)規(guī)律來(lái)看，早期接種防疫疫苗后，由于體內(nèi)有母源抗體的存在，勢(shì)必會(huì)影響到接種后疫苗的效力。早期抗體陽(yáng)性率會(huì)降低，降低到臨界合格值附近。這種低抗體的水平會(huì)一直維持到免疫后第四周。從第五周開(kāi)始，抗體水平逐漸回升?；旧系降诹?，抗體水平得到最高水平，而且會(huì)維持這一水平一直到第16周。實(shí)際上，同樣有類似的試驗(yàn)報(bào)道，即沒(méi)有母源抗體的作用，接種防疫后同樣需要4個(gè)周左右的時(shí)間恢復(fù)到較高水平的抗體。為此，自這一方面來(lái)看，從免疫后第一周到第四周這段時(shí)間，抗體水平是最低的，同樣是最危險(xiǎn)的時(shí)期。

3.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化與活疫苗免疫后抗體消長(zhǎng)情況的關(guān)系

將表1與表2 的數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性聯(lián)系，豬體內(nèi)毒血癥的嚴(yán)重化程度與抗體水平的變化呈明顯的負(fù)相關(guān)聯(lián)系。即，當(dāng)體內(nèi)毒血癥水平較高時(shí)，往往生豬體內(nèi)的抗體水平較低。而隨著生豬抗體水平的逐漸高升，毒血癥的跡象反而慢慢變得削弱。從這樣的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性比較分析，疫苗本身的毒性與抗體是相互斗爭(zhēng)的關(guān)系。在疫苗接種后，能刺激機(jī)體不斷生產(chǎn)抗體。產(chǎn)生抗體的同時(shí)，會(huì)不斷中和疫苗。后期，隨著免疫時(shí)間的延長(zhǎng)，抗體免疫效力的進(jìn)一步提升，疫苗毒性被逐漸被中和，而達(dá)到難以被檢測(cè)的現(xiàn)象。