□ 張國瑩 遼寧通正檢測有限公司 張麗艷 遼寧食安檢驗檢測有限公司 韓 斯 遼寧通正檢測有限公司

國內(nèi)常用的食品中色素檢測有相對成熟的方法，并已經(jīng)形成食品安全國家標準。在本標準中對食品中合成色素采用高效液相色譜法（HPLC）進行檢測。在工作中筆者總結(jié)了一些經(jīng)驗，和大家一起學(xué)習(xí)探討。

1 液相色譜儀簡介

高效液相色譜系統(tǒng)由流動相、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成。高效液相色譜分析方法始于20世紀初，經(jīng)過100多年的發(fā)展，如今已經(jīng)成為應(yīng)用最多的色譜分析方法。隨著工業(yè)制造水平的提高和新型材料的應(yīng)用，HPLC的輸液泵輸液量能夠保持恒定平穩(wěn)；進樣系統(tǒng)切換更加便利嚴密；色譜柱柱效能好，分離效果更加優(yōu)異；工作站更加人性化，便于操作。因此在定量定性分析的各個領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。

2 高效液相色譜法的特點

HPLC有以下主要特點：①高柱壓，壓力可達150～300Bar；②高流速，每分鐘最快可以達到10.0mL；③高效能，理論塔板數(shù)可達5000以上，同一根色譜柱中分離上百種成份；④高靈敏度，以最常用的紫外檢測器為例，靈敏度可達0.01ng。

HPLC還有以下優(yōu)點：①分析速度快，大部分樣品均可在15～30min分析完成；②分辨率高，大部分成分選擇通用色譜柱，特殊樣品或成分選擇專用色譜柱都達到滿意的分離效果；③靈敏度高，紫外檢測器可達0.01ng，能夠滿足目前食品檢測的要求。

3 高效液相色譜法測定食品中的合成著色劑[1]

食品中的合成著色劑的提取方式有兩種：聚酰胺吸附法和液-液分配法。提取后制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和峰面積比較進行定量。

實驗過程按照標準要求進行（6種著色劑譜圖如圖1所示）。

圖1 6種著色劑譜圖

4 實驗注意事項

4.1 樣品處理注意事項

（1）聚酰胺粉的用量：經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，1克聚酰胺粉能夠完全吸附樣品溶液中的色素?？梢酝ㄟ^觀察燒杯底部是否有未吸附色素的白色顆粒物來判斷色素是否吸附完全。如果聚酰胺粉的用量過大，會影響之后雜質(zhì)的洗脫和色素的解吸速度。

（2）甲醇-甲酸混合溶液洗滌是為了洗脫被聚酰胺粉吸附的天然色素。

（3）樣品溶液應(yīng)用檸檬酸調(diào)節(jié)pH值至4，在這樣的酸性條件下，色素容易被聚酰胺粉完全吸附。

（4）如果色素的解吸液呈堿性，直接進行分析會損壞色譜柱，必須除去解吸液中的氨水，使pH接近中性；由于這些色素均為水溶性，殘渣用水溶解過濾膜定容后進樣。

4.2 流動相梯度的選擇

開始時甲醇比例較?。ㄈ绻状急壤^大，檸檬黃峰與雜質(zhì)峰無法分開，或者檸檬黃、莧菜紅和胭脂紅相互干擾的情況），逐漸增大甲醇的比例（如果甲醇比例不變，赤蘚紅在1h內(nèi)可能不出峰），最后甲醇比例回到初始濃度，保持數(shù)分鐘準備下一次進樣。

4.3 波長的選擇

通過二極管陣列檢測器3D圖可以看出，在254nm處各色素均有吸收，除亮藍外吸收均較強，且此處干擾物質(zhì)吸收較弱，因此選擇254nm為最佳測定波長。

4.4 高效液相色譜技術(shù)參數(shù)

按照方法中的樣品處理和儀器條件，分別對樣品進行6次重復(fù)測定，相對偏差均＜10%，加標回收率在80%～100%。

5 結(jié)語

本文通過介紹液相色譜儀的相關(guān)內(nèi)容，高效液相色譜法的原理以及特點，并查閱了相關(guān)的參考文獻，通過筆者實驗經(jīng)驗總結(jié)，對食品色素的檢測具有重要的指導(dǎo)意義和參考價值。