□ 盧艷婷 東莞出入境檢驗(yàn)檢疫局

枸杞子是常用的藥食兩用材料，具有滋補(bǔ)肝腎、益精明目的功效，枸杞子在植物分類中定義為茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實(shí)。甜菜堿是一種枸杞特征性的生物堿，為其主要活性物質(zhì)，其生物活性提供甲基供體，起到抗氧化的作用。本文通過研究實(shí)踐，建立了HPLC方法測定甜菜堿的含量[1]，該方法與中國藥典標(biāo)準(zhǔn)方法薄層色譜法（2015年版第一部P249頁）相比更加準(zhǔn)確、簡便可靠。

1 藥典法定測定法

《中國藥典》2015 年版枸杞子甜菜堿含量測定采用薄層色譜法，具體操作方法為：取枸杞子約2g，用剪刀剪碎，精密稱定，加80%甲醇50mL做溶劑，加熱回流，用該溶劑30mL分次洗滌殘?jiān)蜑V器，將洗液與濾液合并后濃縮至10mL，調(diào)節(jié)pH值至1，加入活性炭1g脫色，加入新配制的2.5% 硫氰酸鉻銨溶液20mL，攪勻，低溫靜置3 h，過濾。加丙酮定量至5mL，作為供試品溶液[2]。另取甜菜堿對照品20mg，精密稱定，加鹽酸甲醇溶液（鹽酸∶甲醇=0.5∶99.5） 定容至5mL作為對照品溶液。按“薄層色譜法（TLC）操作規(guī)程”試驗(yàn)，精密吸取對照品溶液3μL與6μL，供試品溶液5μL硅膠G層析板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸（v∶v ∶v=10∶6∶1 ）為展開劑，噴顯色劑改良碘化鉍鉀試液，按“薄層色譜法操作規(guī)程”進(jìn)行掃描，波長：λs =515nm，λR = 590nm，測量，計(jì)算，即得。

筆者經(jīng)實(shí)際操作發(fā)現(xiàn)，該方法干擾因素多，而且溫度和濕度對顯色影響較大，重現(xiàn)性差[3]。

2 HPLC方法的建立

2.1 儀器與試藥

安捷倫1260高效液相色譜儀、枸杞子、磷酸二氫鉀（分析純）、甜菜堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號136941-201703）。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 溶液配制

對照品溶液：準(zhǔn)確稱取甜菜堿對照品 0.060g，加純化水溶解并定容至刻度，制備成 0.600mg/m L的儲備液。

流動相：準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鉀0.408g，加純化水溶解并定容至1000mL，配制成 0.003mol/L KH2PO4溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)參數(shù)

色譜條件：SCX 陽離子交換柱（4.6mm×250mm，5μm），0.003mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相，柱溫 40℃，檢 測 波 長 192nm， 流 速 1.0mL/min，進(jìn)樣量：20μL。

樣品處理方法：同上述薄層色譜法前處理[4]。

圖1 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 制備對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精確量取 0.600mg/mL的甜菜堿對照品儲備液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL加純化水定容至10mL，搖勻。以甜菜堿峰面積的積分值為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=2323413X+29.21，r=0.9999（圖1）。結(jié)果表明，甜菜堿在0-0.300mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

取濃度為 0.120mg/mL的甜菜堿對照品溶液，于高效液相色譜連續(xù)進(jìn)樣 5次，根據(jù)峰面積值測定結(jié)果（見表1），計(jì)算其 RSD值為 0.95%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取上述枸杞子5 份，制成樣品溶液，用高效液相色譜測定樣品峰面積值，計(jì)算樣品中甜菜堿的含量（見表2）。結(jié)果可得所測甜菜堿的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.82%，RSD為 1.29%。

2.3.4 回收率試驗(yàn)

取上述枸杞子，準(zhǔn)確稱取100mg，平行6份，分別加入5mL濃度為0.120mg/mL甜菜堿對照品溶液，加純化水定容至50mL，制成樣品溶液，用高效液相色譜測定峰面積值，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為 97.17%，RSD為1.05%，見表3。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表 2 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

枸杞作為常用的藥食兩用材料，在食品和藥品的標(biāo)準(zhǔn)體系中均有收載。食品標(biāo)準(zhǔn)無需檢測甜菜堿的含量，藥品標(biāo)準(zhǔn)作為最嚴(yán)格的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，對其有效成分甜菜堿有進(jìn)行檢測，用薄層色譜法，但是該方法溫度和濕度對顯色影響較大，重現(xiàn)性差。本文建立高效液相色譜方法測定枸杞子甜菜堿的方法操作準(zhǔn)確簡單快速、重復(fù)性好，可用于枸杞子藥材及其制劑的質(zhì)量控制。