陳春瑩 劉小樂(lè) 付艷霞

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EM)為臨床生常見的婦科疾病之一, 也是造成育年齡婦女不孕的主要原因之一［1-2］。

患子宮內(nèi)膜異位癥患者, 臨床多產(chǎn)生痛經(jīng)、下腹痛、性交痛等癥狀, 影響婦女身心健康。研究在子宮內(nèi)膜異位癥組織中PD-1的表達(dá)及其臨床意義, 為臨床治療子宮內(nèi)膜異位癥提供新決策, 發(fā)揮積極影響［3-5］。作者對(duì)2017年2～7月本院收治的20例子宮內(nèi)膜異位癥患者進(jìn)行回顧分析?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年2～7月醫(yī)院收治的20例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為研究組, 患者均符合臨床子宮內(nèi)膜異位癥手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)［6］。另選同期20例無(wú)子宮內(nèi)膜異位癥且需行子宮切除術(shù)的患者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者手術(shù)耐受性好,生育年齡女性, 無(wú)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者有嚴(yán)重肝功能損害疾病。研究組年齡23～88歲, 平均年齡(32.0±0.3)歲。對(duì)照組年齡22～89歲, 平均年齡(35.0±0.7)歲。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 研究組在術(shù)中獲得異位內(nèi)膜標(biāo)本, 對(duì)照組在術(shù)中獲得子宮內(nèi)膜標(biāo)本, 兩組標(biāo)本均應(yīng)用多聚甲醛固定, 并在低溫環(huán)境保存。制備組織切片：切片前用石蠟包埋標(biāo)本組織快, 放在-20℃環(huán)境下預(yù)冷20 min, 使用切片機(jī)制備組織切片,烘干后置于玻片盒內(nèi)。染色后, 做鏡下觀察, 記錄兩組PD-1化學(xué)染色評(píng)分。

采用蛋白印跡法(western blotting)檢測(cè)兩組子宮內(nèi)膜組織內(nèi)PD-1表達(dá)。用低溫磷酸緩沖鹽溶液(PBS)反復(fù)沖洗內(nèi)膜組織。配制蛋白裂解液, 將子宮內(nèi)膜組織放入1.5 ml離心管內(nèi), 加入100：1濃度的裂解液, 反復(fù)震蕩裂解。將裂解后的子宮內(nèi)膜組織裂解混合液進(jìn)行離心操作, 收集組織蛋白上清液, 監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜組織內(nèi)PD-1表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)比兩組患者的內(nèi)膜組織PD-1化學(xué)染色評(píng)分與PD-1表達(dá)水平。其中, 化學(xué)染色評(píng)分的分值越高, 病情越差。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分為(7.10±3.60)分,PD-1表達(dá)為(1.20±0.40)KD；對(duì)照組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分為(4.20±2.60)分, PD-1表達(dá)為(0.40±0.31)KD；研究組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分、PD-1表達(dá)均高于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者子宮內(nèi)膜組織中的PD-1表達(dá)對(duì)比

表1 兩組患者子宮內(nèi)膜組織中的PD-1表達(dá)對(duì)比

注：與對(duì)照組比較, aP＜0.05

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3 討論

近年來(lái), 子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病率不斷升高, 發(fā)病人群亦趨于年輕化, 為育齡期婦女身體健康帶來(lái)不良影響。臨床中, 針對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥疾病, 在發(fā)病機(jī)制方面還不甚了解,研究顯示, 子宮內(nèi)膜異位癥與患者體內(nèi)局部微環(huán)境以及內(nèi)膜組織的免疫細(xì)胞功能異常有關(guān)［7-9］。同樣, 子宮內(nèi)膜異位癥患者臨床也多伴有局部、全身免疫功能異常, 而PD-1信號(hào)通路, 在機(jī)體內(nèi)可協(xié)同T細(xì)胞免疫反應(yīng), 調(diào)節(jié)患者機(jī)體的免疫過(guò)程。

醫(yī)學(xué)中, PD-1位于CD28家族, 是I型跨膜蛋白, 由268個(gè)氨基酸組成, 可定位于PDCD1基因上。PD-1作為T細(xì)胞增值負(fù)調(diào)節(jié)分析, 能夠在T細(xì)胞靜息狀態(tài)下低表達(dá), 激活時(shí)高表達(dá)。而在機(jī)體外周的淋巴器官內(nèi), PD-1能與B7-H1受體結(jié)合, 共同激活初始T細(xì)胞, 引起免疫耐受, 導(dǎo)致機(jī)體T細(xì)胞失能。但在正常的機(jī)體組織內(nèi), 如在子宮、腎、皮膚等組織內(nèi)PD-1沒(méi)有表達(dá), 而在病變的乳腺癌、肺癌、宮頸癌等腫瘤組織內(nèi), 則可檢測(cè)出子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)的PD-1異常表達(dá), 且PD-1表達(dá)水平與患者疾病及預(yù)后有關(guān)系, 而這多與腫瘤免疫逃逸相關(guān)［10,11］。在子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)PD-1表達(dá)水平升高, 也與患者自身免疫狀態(tài)的改變有關(guān),由于PD-1可表達(dá)與T淋巴細(xì)胞, 并根據(jù)T細(xì)胞活化程度影響多種因子作用, 使T細(xì)胞功能紊亂、枯竭, 引發(fā)免疫缺失,加重子宮內(nèi)膜異位癥患者病情。而子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生也與細(xì)胞免疫密切相關(guān)。通過(guò)免疫組織化學(xué)法以及蛋白印跡法檢測(cè)PD-1在子宮內(nèi)膜異位癥患者組織內(nèi)的表達(dá), 有助于了解該病中PD-1信號(hào)通路的表達(dá)情況。本次研究中, 通過(guò)檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者PD-1的表達(dá)水平, 證實(shí)相較于正?；颊咦訉m內(nèi)膜的PD-1表達(dá)升高。

PD-1信號(hào)通路對(duì)異位內(nèi)膜產(chǎn)生影響, 可降低局部微環(huán)境免疫效能, 促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位, 臨床中加強(qiáng)臨床PD-1檢測(cè)有助于根據(jù)PD-1表達(dá)改善治療方案, 提升子宮內(nèi)膜異位疾病治療方法。本次研究中, 研究組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分為(7.10±3.60)分, PD-1表達(dá)為(1.20±0.40)KD；對(duì)照組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分為(4.20±2.60)分, PD-1表達(dá)為(0.40±0.31)KD；研究組患者的PD-1化學(xué)染色評(píng)分、PD-1表達(dá)均高于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。趙鳳杰［12］等研究針對(duì)PD-1作用機(jī)制, 為應(yīng)用抗PD-1免疫治療子宮內(nèi)膜異位癥開辟了新領(lǐng)域, 發(fā)揮臨床意義, 與本次研究結(jié)果一致。在臨床治療子宮內(nèi)膜異位癥中, 可根據(jù)PD-1在組織內(nèi)表達(dá)水平的變化, 進(jìn)一步了解PD-1參與子宮內(nèi)膜異位癥的免疫機(jī)制, 制定臨床治療決策, 有助于改進(jìn)臨床治療PD-1蛋白表達(dá)子宮內(nèi)膜異位癥的方法, 發(fā)揮重要意義［13］。

綜上所述, 在子宮內(nèi)膜異位癥患者中, PD-1在組織中的表達(dá)水平相較于正常者過(guò)高, 可根據(jù)PD-1表達(dá)變化, 為進(jìn)一步優(yōu)化臨床子宮內(nèi)膜異位癥治療思路提供策略, 發(fā)揮臨床研究意義。