孟思妤 孟長(zhǎng)明 陳昌福

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，453700；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，430070）

將稀釋后的藥物加入試管，或加入冷卻至45～55℃ M-H培養(yǎng)基中，立即在無(wú)菌條件下制作系列藥物濃度梯度的藥敏試驗(yàn)試管（圖2）。

圖2 試管內(nèi)藥敏試驗(yàn)的試管內(nèi)藥物添加方法（仿日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)，1975）

用無(wú)菌生理鹽水或M-H肉湯培養(yǎng)基，將菌液配置成106個(gè)/mL濃度的菌懸液。在配制好的含藥濃度梯度液體培養(yǎng)基試管中加入上述供試致病菌的菌懸液。制備好的藥物敏感測(cè)試試管放置于培養(yǎng)溫度為28℃條件下（注意根據(jù)致病菌的特性選擇培養(yǎng)適宜溫度），培養(yǎng)一定的時(shí)間后，再觀察試驗(yàn)結(jié)果。

液體培養(yǎng)基稀釋法獲得的是供試藥物對(duì)致病菌的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）和最小殺菌濃度（minimal bactericidal concentration，MBC）。MIC的判讀即為肉眼觀察無(wú)致病菌生長(zhǎng)試管中的最低藥物濃度，為該該供試藥物的MIC。MBC的判讀即為供試藥物殺滅99.9%或以上受試致病菌所需的最低濃度。具體做法是將高于MIC 1～3個(gè)稀釋度的試管中的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基平皿上，在28℃恒溫條件下培養(yǎng)18～24小時(shí)，與無(wú)致病菌生長(zhǎng)的平皿對(duì)應(yīng)的藥敏試管中的藥物濃度，即判為殺滅99.9%或以上受試菌所需的MBC。

如果選用的抗菌素對(duì)某種致病菌沒(méi)有抑制作用，使用后就不可能獲得對(duì)疾病的治療效果。然而，即使某種抗菌素能抑制某種致病菌，不同的致病菌對(duì)同一種抗菌素的感受性也是存在差異的。因此，為了達(dá)到藥到病除或者獲得對(duì)疾病比較好的治療效果，篩選病原菌敏感的抗菌素作為治療養(yǎng)殖魚類疾病的藥物是很有必要的。現(xiàn)在，研究者們采用在養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)分離到的養(yǎng)殖魚類致病菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)時(shí)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有些菌株對(duì)某些抗菌素失去了敏感性，或者感受性已經(jīng)下降了，這就是因?yàn)椴≡鷮?duì)這些抗生素產(chǎn)生了抗藥性。

病原菌對(duì)藥物的感受性一般都是采用最小抑菌濃度（MIC）表示。即每升（L）培養(yǎng)基中的抗菌藥物以毫克（mg）表示，作成倍比稀釋系列，當(dāng)接種在培養(yǎng)基中的病原菌被完全抑制的最低藥物濃度，即為表示藥物對(duì)致病菌菌株的最小抑菌濃度。

測(cè)定從患病養(yǎng)殖魚類中分離病原菌對(duì)各種抗菌藥物的敏感性，是保證藥物治療效果的關(guān)鍵。但是，開(kāi)展這個(gè)工作要求有一定的試驗(yàn)條件，而且要求操作者具備一定的專業(yè)知識(shí)和試驗(yàn)技能，因此，尚不具備這種試驗(yàn)條件的養(yǎng)殖單位和個(gè)人可以委托有條件的研究單位協(xié)助完成這項(xiàng)工作。

3 抗菌素的作用方式

在藥物療法中使用的各種抗菌藥物都是能對(duì)細(xì)菌的細(xì)胞產(chǎn)生作用，而對(duì)養(yǎng)殖魚類和人體的細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生危害的，這是因?yàn)樗幬锞哂羞x擇性毒性的緣故。在選擇抗菌素類藥物作為養(yǎng)殖魚類疾病的藥物時(shí)，首先要了解這種藥物的作用原理。除了要明確該藥物的作用原理外，還應(yīng)該弄清楚藥物對(duì)病原菌究竟是抑菌作用還是殺菌作用，這些問(wèn)題對(duì)于確定藥物的投予量和投予方法都是非常重要的。

藥物對(duì)病原菌的抑菌和殺菌作用的機(jī)制有所不同。使用具有抑菌作用的藥物后，病原菌的數(shù)量不會(huì)減少，藥物在養(yǎng)殖魚類體內(nèi)以有效的藥物濃度并保持一定的時(shí)間，因?yàn)樗幬镏荒芤种撇≡脑鲋常罱K還要依靠機(jī)體的免疫防御機(jī)能的作用使疾病痊愈。而具有殺菌作用的藥物則是通過(guò)直接殺死養(yǎng)殖魚類體內(nèi)的致病菌而產(chǎn)生治療效果的，當(dāng)然，最后清除死亡的致病菌也是需要免疫系統(tǒng)參與的。

由于抑菌和殺菌藥物的作用機(jī)制不同，使用具有抑菌作用的藥物就必須要使藥物的有效濃度在養(yǎng)殖魚類體內(nèi)維持一定的時(shí)間，需要準(zhǔn)確計(jì)算初次用藥量和再次使用的維持量。使用殺菌作用的藥物，則不需要考慮藥物在養(yǎng)殖魚類體內(nèi)維持一定時(shí)間的殺菌濃度。

在抗菌類藥物中，通常將磺胺類和抗生素類藥物定為具有抑菌作用的藥物，而將呋喃類藥物定為具有殺菌作用的藥物。不過(guò)，當(dāng)大劑量的使用抑菌性藥物時(shí)，其藥物也會(huì)顯示出殺菌效果。所以，藥物的抑菌和殺菌作用只是使用劑量的差異，而不存在本質(zhì)的不同。

（未完待續(xù)）