包銀莉，李高凱，余世勇，胡 彬

（四川海林格生物制藥有限公司，四川 成都 610030）

摘 要：豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus， PEDV)引起的急性、高度接觸性傳染病。其毒株的高度變異性給該病的防控帶來了難度。福建某規(guī)?；B(yǎng)豬場發(fā)生腹瀉疫情，通過膠體金檢測確診為豬流行性腹瀉病毒感染。疫病初期通過返飼與疫苗肌肉注射等方式進(jìn)行防控，疫情未得到有效控制。為快速控制疫情，結(jié)合豬流行性腹瀉病毒的發(fā)病與排毒規(guī)律，從“降低排毒、激發(fā)黏膜免疫、構(gòu)筑免疫屏障、切斷傳染源、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理”等角度，提出“三打兩噴+仔豬噴鼻”的疫情防控方案，方案執(zhí)行1周，腹瀉疫情得到有效控制，發(fā)病率由90%以上降低到8.60%。同時(shí)，該方案在四川地區(qū)24個(gè)規(guī)模豬場得到了有效的驗(yàn)證。

關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉；防控；案例分析

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus， PEDV)引起的急性、高度接觸性傳染病，臨床上主要以嚴(yán)重的腸炎、嘔吐、水樣腹瀉以及脫水為特征，感染仔豬死亡率極高。其發(fā)病時(shí)間急、仔豬死亡率高，主要感染豬小腸上皮細(xì)胞，引起腸絨毛脫落，造成新生仔豬迅速脫水死亡。自2010年暴發(fā)以來，豬流行性腹瀉給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

豬流行性腹瀉病毒分子流行病學(xué)調(diào)查顯示，近年來其流行毒株S基因出現(xiàn)了較大變異，與傳統(tǒng)疫苗毒株相比同源性僅90%左右。大量涌現(xiàn)的變異株給豬流行性腹瀉的防控工作帶來了難度。同時(shí)，隨著對PEDV致病機(jī)理研究的深入，大量的文獻(xiàn)指出與傳統(tǒng)的可通過體液免疫防控的病毒不同，PEDV防控更多的需要黏膜免疫系統(tǒng)的參與。這些防控的難點(diǎn)使PEDV在日常生產(chǎn)中的防控效果并不理想，同時(shí)也使如何有效防控豬流行性腹瀉已經(jīng)成為了行業(yè)的難題。病料返飼、直接將感染仔豬敲死、甚至于飼喂避孕藥延后生產(chǎn)等方式并不能徹底的解決豬流行性腹瀉。在發(fā)病豬場環(huán)境中排毒量巨大、肌肉注射疫苗接種豬群免疫保護(hù)力有限的條件下，唯有“降低排毒、激發(fā)黏膜免疫、構(gòu)筑免疫屏障、切斷傳染源、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理”等綜合防控方案才能迅速控制疫情。

1 流行病學(xué)調(diào)查

福建某規(guī)模豬場，生產(chǎn)母豬500頭左右。2017年11月底開始出現(xiàn)腹瀉癥狀，主要發(fā)生于后備新生仔豬。豬場采用“活苗+死苗+死苗”的免疫方案，于2017年9月份開始普免二聯(lián)活苗，10月份開始注射滅活苗。在計(jì)劃進(jìn)行第三針免疫的時(shí)候，2017年11月底豬場突然暴發(fā)大面積的腹瀉病情，26頭后備母豬陸續(xù)出現(xiàn)腹瀉，新生仔豬死亡率高達(dá)70%。隨后豬場在2017年12月—2018年3月期間嘗試了3種緊急防控方案對腹瀉病情進(jìn)行控制，但都收效甚微。

第1種：全場一刀切二聯(lián)活疫苗一次，之后母豬產(chǎn)前15 d免疫1次，出生仔豬肌注0.5頭份，結(jié)果：小豬出生3～5 d開始大面積發(fā)生腹瀉，死亡率仍然高達(dá)70%。之后，豬場采用“全場一刀切變異毒株滅活疫苗1次，產(chǎn)前45 d母豬注射1次，20 d注射一次”的第2套方案，結(jié)果發(fā)病率70%，死亡率80%。于是，豬場自制了一批自家苗，全群母豬一刀切免疫1次，后續(xù)跟胎使用產(chǎn)前25 d注射一次，10 d注射1次。結(jié)果在接種自家苗后豬場腹瀉情況有所好轉(zhuǎn)，發(fā)病率降至20%～30%之間，死亡率30%。但是至今年3月6日豬場腹瀉病情再次反彈，新生仔豬死亡率超過60%。

3 月中旬公司技術(shù)團(tuán)隊(duì)進(jìn)駐該場，協(xié)助該場進(jìn)行腹瀉病情的防控。

2 臨床癥狀及剖檢變化

圖1 腹瀉仔豬剖檢圖

該場發(fā)病仔豬表現(xiàn)為水樣腹瀉、嘔吐、體溫略升高、精神沉郁。發(fā)病初期主要以4～6日齡仔豬為主，也有9～14日齡仔豬，傳播迅速，數(shù)日內(nèi)蔓延到全群。隨病程發(fā)展，豬出現(xiàn)消瘦、脫水以及大量哺乳仔豬死亡。雖然該場的飼養(yǎng)員通過補(bǔ)液的方式挽回了一些仔豬，但60%左右的仔豬最終死亡。

剖檢死亡小豬可見小腸腸管擴(kuò)張，腸壁變薄缺乏彈性，切開腸壁可見內(nèi)容物稀薄呈黃色泡沫狀，腸黏膜絨毛嚴(yán)重萎縮。切開胃壁可見黃色內(nèi)容物及乳白色凝塊，胃底黏膜充血（圖 1）。

圖2 膠體金快速檢測結(jié)果圖

3 膠體金快速診斷

現(xiàn)場采集腹瀉仔豬糞便，用安捷公司PEDV 膠體金檢測試劑盒和TGEV膠體金檢測試劑盒進(jìn)行快速檢測，結(jié)果顯示PEDV抗原陽性，TGEV抗原陰性（圖2），確診為由PEDV感染導(dǎo)致的腹瀉疫情。

4 防控方案

在確定了病原體后，采取了“三打兩噴+仔豬噴鼻”的疫苗控制措施進(jìn)行腹瀉病情的防控。具體操作如下。

4.1 產(chǎn)前9～14 d的母豬防控方案

方案開始當(dāng)天，對24頭母豬進(jìn)行肌肉注射1次，4 mL/頭；2 d后，再次肌肉注射1次，4 mL/頭，同時(shí)保定噴鼻1次，4 mL/頭，每個(gè)鼻孔各2 mL；3 d后，再次進(jìn)行再次肌肉注射一次和保定噴鼻，劑量同前。

4.2 所產(chǎn)仔豬防控方案

后備母豬生產(chǎn)仔豬共滴鼻6次，出生滴鼻1 mL/頭仔豬，0.5 mL/鼻孔。間隔8 h再滴鼻1次，1 mL/頭仔豬，0.5 mL/鼻孔，連續(xù)操作3 d。

老母豬生產(chǎn)仔豬共滴鼻4次，出生滴鼻1 mL/頭仔豬，0.5 mL/鼻孔。間隔8 h再滴鼻一次，1 mL/頭仔豬，0.5 mL/鼻孔，連續(xù)操作2 d。

5 效果

該方案中一共生產(chǎn)23窩仔豬，總頭數(shù)221頭（不包括1頭母豬出現(xiàn)難產(chǎn)子宮脫落生產(chǎn)2頭的）。經(jīng)上述防控方案后，僅有兩窩19頭仔豬出現(xiàn)輕微拉稀癥狀，糞便呈現(xiàn)糊狀，發(fā)病率為8.60%。對這19頭仔豬口服給藥后快速恢復(fù)。

從出生到斷奶階段，總共死亡14頭，死亡率6.33%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于使用”三打兩噴+仔豬噴鼻“方案之前的70%的死亡率。且14頭仔豬死亡原因均由其他因素導(dǎo)致，非腹瀉問題。

6 討論

在這個(gè)案例中，腹瀉發(fā)生之時(shí)，豬場先后采用了3套方法來防控豬流行性腹瀉病毒導(dǎo)致的腹瀉病情。先期的活疫苗肌注免疫、中期的滅活疫苗肌注免疫，均沒有獲得比較好的防控效果；后期的返飼操作，雖獲得了一定的防控效果，但是之后又出現(xiàn)豬場腹瀉病情反復(fù)的情況。返飼是一把雙刃劍，其對專業(yè)要求較高。返飼病料必須經(jīng)過專業(yè)化檢測，明確是否存在其他疫病，病毒含量是否足夠（膠體金檢測即可），以實(shí)現(xiàn)防控的效果，但同時(shí)返飼也是豬場的潛在的風(fēng)險(xiǎn)因素，返飼后所有動(dòng)物都在排毒，環(huán)境中的病毒含量極高，如果此時(shí)環(huán)境中的返飼病毒進(jìn)入產(chǎn)房，仔豬則完全無力抵抗。

大量的研究表明，PED的防控主要依賴機(jī)體黏膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的特異性sIgA。本案例中采用的“三打兩噴+仔豬噴鼻”方案中的“兩噴”操作，可以有效的激發(fā)動(dòng)物機(jī)體的黏膜免疫系統(tǒng)，促使母豬的乳腺黏膜產(chǎn)生特異性SlgA。該類型抗體隨乳汁進(jìn)入到仔豬的腸道而不被吸收，停留在腸道表面直接中和外來病毒。同時(shí)，“仔豬噴鼻”的操作也在一定程度上誘導(dǎo)仔豬的黏膜免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用。這是該方案獲得較好防控效果的原因之一。

其次，肌肉注射可以誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫，通過細(xì)胞免疫和ADCC作用高效抑制病毒的復(fù)制，從而降低病毒在腸道的復(fù)制，顯著降低病毒的排出。在日常采用PED 膠體金對腹瀉仔豬進(jìn)行病原鑒定的時(shí)候，我們常常發(fā)現(xiàn)對于由PEDV引發(fā)腹瀉的仔豬而言，用棉簽蘸取少量糞便稀釋成1 mL 進(jìn)行檢測，試紙條即可顯示明顯的陽性條帶。PED 膠體金試紙條的檢測敏感性通常為105.5TCID50，這就說明每克糞便中病毒含量高于106.5TCID50。由此可見在發(fā)病豬場環(huán)境中病毒含量是非常高的。而目前我國常用腹瀉疫苗效力評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：疫苗免疫無PED 抗體的母豬或仔豬，免疫后對仔豬進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，以103個(gè)MID 的組織毒攻擊（導(dǎo)致無PEDV 抗體仔豬發(fā)病的最低感染劑量為10-7稀釋，即選用10-4稀釋構(gòu)建效檢攻毒模型），對照組4/5 以上發(fā)病，免疫組4/5 以上保護(hù)，即判定該疫苗有效。實(shí)驗(yàn)室替代檢驗(yàn)方案為：免疫豬群的中和抗體高于1∶32 即判定為有效。因此，只有多次肌肉注射優(yōu)質(zhì)的疫苗（三打），才可以不斷地提升機(jī)體的系統(tǒng)免疫，降低病毒的外排，保障后期免疫仔豬的效果。

為了進(jìn)一步確定“三打兩噴”免疫方案的可行性，2017年至今，在川渝地區(qū)28個(gè)腹瀉疫情不同的豬場進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示其中24個(gè)發(fā)病豬場效果明顯，死亡率從60%～90%降至10%以下，并最終完全達(dá)到康復(fù)。其中所有豬場均在7 d內(nèi)控制住了疫情，平均控制時(shí)長為6.5 d，有效率高達(dá)92%。

由此可見，作為從“降低排毒、激發(fā)黏膜免疫、構(gòu)筑免疫屏障、切斷傳染源、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理”等防控思路出發(fā)設(shè)計(jì)的方案，“三打兩噴”的免疫方案雖然是一種新興的操作方式，但是其在防控豬流行性腹瀉方面有著非常顯著的效果。