錢丹丹 張楠楠 劉 慧 王 珂 張 昀 劉繡華,2

(河南大學(xué)民生學(xué)院，河南 開封 475000)

茶多酚包括黃烷醇類、黃酮類等多種物質(zhì)，是茶葉中有保健功能的主要成分，其中主要的活性成分為表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)?，F(xiàn)代藥理研究證明其具有抗氧化、清除自由基、抗癌、抗突變及調(diào)節(jié)免疫力等功能〔1～3〕。鋅是人體必需的微量元素，影響多種酶的合成及生物學(xué)活性，對機(jī)體免疫功能也有一定影響，其體內(nèi)含量過高或過低都會產(chǎn)生不良影響〔4〕。而老年人缺鋅是一種常見現(xiàn)象，有研究表明在免疫功能低下時(shí)，適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充鋅能提高免疫力〔5〕。本實(shí)驗(yàn)首次研究EGCG-Zn配合物對老年小鼠免疫功能、空間學(xué)習(xí)及記憶力的影響，為EGCG-Zn配合物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1儀器和試劑 LRH-生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，迷宮系列(北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司)，TISSUE-TEAROR手持式勻漿機(jī)(上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司)，EGCG(南京春秋生物工程有限公司)，所有試劑盒購自南京建成生物工程研究所。EGCG-Zn配合物由河南大學(xué)天然藥物與免疫工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供

1.2動物 昆明種小鼠，雌雄各半，清潔級，18個月齡，體重60～70 g，由河南省動物實(shí)驗(yàn)中心提供〔動物合格證號：SCXK(豫)2015-0004〕。

1.3動物分組與給藥 所有小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為EGCG-Zn組(8.5 mg/kg)、EGCG組(0.102 mg/kg)、Zn(8.4 mg/kg)組和空白組(等量蒸餾水)，每組10只，雌雄各半。每天給藥前測定體重，實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)各測1次體溫，連續(xù)灌胃給藥25 d后處死，進(jìn)行各指標(biāo)測定。

1.4小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的測定 采用Morris水迷宮進(jìn)行定位航行、空間搜索和工作記憶三種實(shí)驗(yàn)，按照張魁華等〔6〕方法操作。

1.5血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性 肝總蛋白、MDA含量，腦總蛋白和過氧化氫(CAT)含量測定均按照試劑盒進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析、q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1體重、體溫檢測結(jié)果 各組實(shí)驗(yàn)前后體重、體溫均無顯著性改變，各組無顯著性差異。見表1。

表1 各組實(shí)驗(yàn)前后體重、體溫值

2.2定位航行實(shí)驗(yàn) 由第3象限入水，各組6 d內(nèi)潛伏期變化不大，EGCG組最為穩(wěn)定，空白組和Zn組變化相對較明顯。EGCG-Zn組潛伏期有降低趨勢，較穩(wěn)定。由第2象限入水，6 d內(nèi)Zn組和空白組潛伏期變化相對不穩(wěn)定，Zn組最后1 d潛伏期突增；EGCG組和EGCG-Zn組趨勢相對較穩(wěn)定，且EGCG-Zn組潛伏期逐漸降低，比空白組潛伏期小。由第4象限入水，各組趨勢都不太穩(wěn)定，且以空白組最不穩(wěn)定；EGCG-Zn組較Zn組和EGCG組潛伏期小，各組潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

2.3工作記憶實(shí)驗(yàn) 無論平臺在第幾象限EGCG-Zn組比其他3組穩(wěn)定性都好，且呈下降趨勢。但與其他各組相比，均無顯著差異(P>0.05)。見圖2。

圖1 各組平臺位于第1象限不同象限入水水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)

圖2 各組不同象限平臺水迷宮工作記憶實(shí)驗(yàn)

2.4空間搜索實(shí)驗(yàn) 3種情況下，EGCG-Zn組和Zn組比其他兩組穿越原平臺次數(shù)多，EGCG-Zn組與EGCG組和空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與Zn組相比無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組抽去平臺不同象限入水水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)次)

Ⅰ第2象限；Ⅱ第3象限；Ⅲ第4象限；與EGCG-Zn組比較：1)P<0.05；與Zn組比較：2)P<0.05

2.5各組血清MDA、SOD，肝臟MDA，腦CAT活性檢測 血清MDA含量，空白組、EGCG組、Zn組、EGCG-Zn組依次降低，EGCG-Zn組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，EGCG組和Zn組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？瞻捉M血清SOD值最小，EGCG組、Zn組、EGCG-Zn組與空白組比較差異顯著(P<0.05)，但這三組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝臟MDA含量空白組明顯高于其他3組，Zn組、EGCG組、EGCG-Zn組依次降低，EGCG-Zn組與空白組比較有極顯著性差異(P<0.01)，EGCG組和Zn組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05)。EGCG組、EGCG-Zn組腦CAT活性比空白組、Zn組腦CAT活性大，其中EGCG-Zn組CAT活性最大，是空白組的近3倍。EGCG-Zn組與空白組比較有極顯著性差異(P<0.01)，EGCG組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05)，Zn組與空白組比較無顯著性差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組血清MDA、SOD，肝臟MDA，腦CAT活性比較

與空白組比較：1)P<0.01,2)P<0.05

3 討 論

現(xiàn)代研究已證明茶多酚具備較強(qiáng)的抗氧化性和多種生理活性，人體中的SOD可以消除體內(nèi)過量的自由基，提高人體免疫力，延緩衰老。SOD活性越大證明相關(guān)免疫功能越好；MDA含量越低，說明相關(guān)免疫功能越好。并且，CAT與SOD通過協(xié)同清除自由基發(fā)揮抗氧化損傷作用，此時(shí)CAT活性相應(yīng)提高，以抵抗SOD所產(chǎn)生的H2O2〔7〕。本文結(jié)果表明，Zn、EGCG、EGCG-Zn配合物對老年小鼠免疫功能低下具有增強(qiáng)作用，EGCG-Zn配合物的效果要優(yōu)于單獨(dú)使用Zn和EGCG。但對于老年小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶力的影響則不顯著。EGCG-Zn和Zn均對小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶有一定的促進(jìn)作用，但主要因素可能與Zn相關(guān)，與EGCG-Zn配合物關(guān)系不大。EGCG、Zn、EGCG-Zn均對老年小鼠的血清MDA活性有一定的降低效應(yīng)，能延緩小鼠衰老，且EGCG-Zn作用效果最強(qiáng)。EGCG、Zn、EGCG-Zn均對老年小鼠的血清SOD有提高作用，三者之間無明顯區(qū)別。EGCG-Zn能顯著降低老年小鼠肝臟中MDA含量，且比Zn、EGCG單獨(dú)作用效果要好。EGCG-Zn，EGCG均能有效提高老年小鼠腦CAT活性，且EGCG-Zn效果更好，而Zn單獨(dú)作用不能提高老年小鼠腦CAT活性。因此，EGCG-Zn配合物有望開發(fā)為一種新的免疫增強(qiáng)制劑。

4 參考文獻(xiàn)

1周寧寧，金 策.茶多酚影響老年小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.海峽藥學(xué)，2012;24(5)：21-2.

2葛 建，林 芳，李明揆，等.表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)生物活性研究進(jìn)展〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011;38(2)：156-63.

3金 亮，李小白，丁華僑，等.不同種類茶葉抗氧化活性及茶湯顏色參數(shù)比較〔J〕.中國食品學(xué)報(bào)，2016;16(2)：242-50.

4聞思婉，楊 凡.免疫功能與血清鋅、硒濃度的相關(guān)性〔J〕.內(nèi)科急危重癥雜志，2013;19(5)：308-11.

5吳學(xué)敏，金艷書.微量元素鋅影響老年小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008;35(1)：191-2.

6張魁華，賴世隆，王 奇，等.補(bǔ)腎益智方對老年性癡呆模型動物定位航行學(xué)習(xí)記憶功能的改善作用〔J〕.中草藥，2002;33(10)：917-20.

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