（上海交通大學(xué)藥學(xué)院 上海 200240）

胡小雪 郭圣榮（通訊作者）

1.儀器與試藥

Waters 2695 HPLC system/ Empower 3 software；

甲醇、乙腈、磷酸氫二鉀均為色譜純，磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、過(guò)氧化氫均為分析純；

富馬酸喹硫平系統(tǒng)適應(yīng)性對(duì)照品；富馬酸喹硫平對(duì)照品；富馬酸喹硫平API；富馬酸喹硫平緩釋片。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Inertsil ODS-2 C8-3（4.6mm×150mm，5μm）；以甲醇-乙腈（33∶67）為流動(dòng)相A，以0.01mol·L-1磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.5）-流動(dòng)相A（90∶10）為流動(dòng)相B，流速為1.0mL·min-1，線性梯度洗脫程序見(jiàn)表1；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；柱溫為40℃；進(jìn)樣體積為20μL。

表1 HPLC法測(cè)定富馬酸喹硫平緩釋片有關(guān)物質(zhì)線性洗脫程序

2.2 溶液的制備

2.2.1 稀釋液：流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（50∶50）。

2.2.2 供試品溶液：精密稱取富馬酸喹硫平緩釋片研磨的細(xì)粉適量（相當(dāng)于喹硫平25mg）于100mL量瓶，加入稀釋液超聲10分鐘，再加入稀釋液至刻度，混勻后過(guò)濾即可。

2.2.3 對(duì)照品溶液：精密稱取富馬酸喹硫平對(duì)照品適量（相當(dāng)于喹硫平25mg）于100mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取5.0mL于100mL量瓶中，加稀釋液至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取該儲(chǔ)備液2.0mL于50mL量瓶中，加稀釋液至刻度，搖勻即可。

2.2.4 系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取富馬酸喹硫平系統(tǒng)適用性對(duì)照品約10mg于50mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)與方法專屬性考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取稀釋液、空白輔料溶液、系統(tǒng)適用性溶液、對(duì)照品溶液及樣品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，稀釋液和空白輔料溶液在喹硫平及已知雜質(zhì)保留時(shí)間處無(wú)色譜峰檢出，系統(tǒng)適應(yīng)性溶液中喹硫平峰的拖尾因子小于1.5，喹硫平與相鄰雜質(zhì)的分離度為大于2，系統(tǒng)適應(yīng)性符合要求。

2.3.2 強(qiáng)制破壞試驗(yàn) 取富馬酸喹硫平緩釋片、制備該片劑的原料藥及其空白輔料，分別進(jìn)行如下處理：（1）加入稀釋液適量，超聲，加入1N鹽酸溶液5mL，于80℃條件下放置24小時(shí)，堿中和；（2）加入稀釋液適量，超聲，加入2N氫氧化鈉溶液5mL，于80℃條件下放置24小時(shí)，酸中和；（3）加入5mL3% H2O2溶液，于室溫下放置0.5小時(shí)；（4）高溫破壞（105℃，24小時(shí)）；（5）高濕破壞（92.5%RH，10天）；（6）光照破壞（4500±500 Lux，10天）。按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的配制方法配制溶液并進(jìn)行測(cè)定。

結(jié)果顯示，空白輔料經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、高濕及光照破壞后均未產(chǎn)生對(duì)主成分及其雜質(zhì)測(cè)定有影響的色譜峰；原料藥及制劑破壞實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致，經(jīng)堿、高濕和光照破壞后未產(chǎn)生雜質(zhì)，但經(jīng)酸、氧化及高溫破壞后，均產(chǎn)生少量降解產(chǎn)物，說(shuō)明本品對(duì)酸、氧化及高溫均不穩(wěn)定，對(duì)堿、高濕和光照穩(wěn)定。降解后的產(chǎn)物與主成分峰均能達(dá)到有效分離，且各雜質(zhì)之間分離情況良好，主峰純度均達(dá)到1.000。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，該色譜條件專屬性強(qiáng)，適合本品有關(guān)物質(zhì)的檢查。

2.4 方法精密度

取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于喹硫平25mg），照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，平行制備6份。精密量取10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算6份樣品中喹硫平的含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

結(jié)果6份樣品中喹硫平含量的RSD為2.7%，由此表明該方法精密度良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性

將富馬酸喹硫平對(duì)照品溶液和樣品溶液在室溫條件下放置，并在第0d、1d、2d、4d分別取樣進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

表2 樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表3 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由上述結(jié)果可見(jiàn)，對(duì)照品溶液和樣品溶液在放置4天內(nèi)測(cè)得的主峰峰面積無(wú)明顯變化，樣品溶液中最大單雜及總雜量也無(wú)明顯變化，表明該對(duì)照品溶液和樣品溶液穩(wěn)定性良好。

3.討論

對(duì)USP monograph[3]的流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)整，將有機(jī)相的乙腈換為乙腈與甲醇的混合，這樣可降低流體的粘度，減輕柱壓對(duì)柱子的損耗，同時(shí)調(diào)整了緩沖鹽的pH值，優(yōu)化梯度，最終使各雜質(zhì)均達(dá)到了理想的分離效果。

4.結(jié)論

富馬酸喹硫平緩釋片在新版藥典（2015版）中無(wú)有關(guān)物質(zhì)檢查方法，經(jīng)驗(yàn)證，本測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可用于富馬酸喹硫平緩釋片中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

[1]戴婕,李芳芳.富馬酸喹硫平片人體生物等效性研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2013,30（6）：641.

[2]中國(guó)藥典2015年版.正文：富馬酸喹硫平.