王 沖，侯 娟，芮 菁

(天津市藥品檢驗研究院，天津 300070)

KEYWORDSCompound Hongjingtian Tablet, anti- anoxia effects, anti-fatigue effects

現(xiàn)代人生活節(jié)奏快，工作壓力大，易導致疲憊不堪、心力交瘁等癥狀。短期癥狀經休整可得到有效緩解，如癥狀長期積累，則不易消除，輕者造成注意力不集中、抵抗力下降等，重者可致腦細胞缺氧和神經系統(tǒng)功能紊亂，嚴重危及人體健康[1]。因此，開發(fā)具備緩解疲勞、提高耐缺氧能力的營養(yǎng)保健性食品，具有非常廣闊的應用前景。傳統(tǒng)中藥憑借其療效確切、毒副作用小等獨特優(yōu)勢與潛力，正逐漸成為耐缺氧、抗疲勞領域的研究熱點[2]。大量文獻研究表明，紅景天[3]、銀杏葉[4]、天麻[5]、松花粉[6]及北五味子[7]等單味中藥對于缺氧及疲勞癥狀均具有積極的緩解作用。復方紅景天片是根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，以紅景天、雪靈芝、北五味子等多味中藥合理配伍，結合現(xiàn)代制劑方法，制成的用于緩解疲勞及缺氧癥狀的中藥復方片劑，安全性試驗已證明其無毒性作用，本實驗報道復方紅景天片的抗缺氧及抗疲勞效果。

1 材料與方法

1.1動物 SPF級KM小鼠，雌雄各半，購入時體重為15～17 g，由北京維通利華實驗動物公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK(京) 2016- 0011。大、小鼠維持飼料，北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，許可證號SCXK(京) 2014- 0010。動物飼養(yǎng)室溫度20～25 ℃，相對濕度40%～70%，實驗動物使用許可證號SYXK(津) 2016- 0006。人工照明，12 h明/12 h暗。實驗動物于環(huán)境中適應3 d后用于實驗。

1.2試藥 復方紅景天片，為紅棕色片劑，規(guī)格為0.5 g/片，每片相當于生藥1.96 g，天津市現(xiàn)代醫(yī)藥開發(fā)研究所提供；亞硝酸鈉，500 g/瓶，天津市贏達稀貴化學試劑廠生產；鈉石灰，500 g/瓶，上海新誠精細化工有限公司生產；醫(yī)用凡士林，500 g/瓶，天津市華東試劑廠生產。血乳酸(LD)、血尿素氮(BUN)、肝/肌糖原(HG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒均為南京建成生物工程研究所提供。

1.3儀器 酶標儀，型號SpectiaMax M2，Molecular Devices公司生產；電子天平，型號BA-310S，沙多利斯公司生產；電子天平，型號NVL2101B/2，江蘇奧豪斯電子有限公司生產；恒溫水浴，型號WNB22，MEMMERT公司生產；離心機，型號B600B，白洋離心機廠生產。另有主要器械包括：剪刀、秒表、250 ml磨口瓶。

1.4方法

1.4.1動物分組及給藥 將280只小鼠隨機分為陰性對照組及受試物低、中、高劑量組，每組動物70只?！?.4.2”及“1.4.3”項下各實驗中每組均取10只動物用于實驗測定。復方紅景天片服用方法為2次/d，3片/次，按體質量60 kg計，成人每日劑量為0.05 g/kg，相當于0.196 g原生藥/kg。將人體推薦劑量的10倍設為低劑量，中、高劑量分別為人體推薦劑量的15倍及22.5倍，即低、中、高3種劑量分別為1.96、2.94、4.41 g原生藥/kg。受試物每日臨用前新鮮配制，灌胃前搖勻，按0.02 ml/g體積，1次/d，連續(xù)30 d，陰性對照組給予等體積純化水。

1.4.2耐缺氧實驗

1.4.2.1常壓耐缺氧實驗 于末次灌胃給予受試物后1 h，將各組動物分別放入盛有5 g鈉石灰的250 ml磨口瓶內,每瓶1只，用預先涂有凡士林的瓶塞封瓶口，蓋嚴，使之不漏氣，立即計時，以呼吸停止為指標，記錄小鼠因缺氧而死亡的時間[8]。

1.4.2.2亞硝酸鈉中毒存活實驗 于末次灌胃給予受試物后1 h，將各組動物按220 mg/kg劑量腹腔注射亞硝酸鈉(注射量0.01 ml/g)，立即計時，記錄動物存活時間[8]。

1.4.2.3急性腦缺血性缺氧實驗 于末次灌胃給予受試物后1 h，各組動物自頸部逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間[8]。

1.4.3抗疲勞實驗

1.4.3.1力竭游泳實驗 于末次灌胃給予受試物后1 h，稱量小鼠體重，將其自身體重5%的鉛皮捆綁于尾根部后，置小鼠于水深30 cm，水溫25 ℃的游泳箱中，強迫游泳至力竭。以小鼠全身沒于水面以下，8 s內不能浮出水面判定為力竭，記錄小鼠開始游泳至力竭時間[9]。

1.4.3.2血尿素氮測定 置小鼠于深30 cm，水溫25 ℃的游泳箱中不負重游泳90 min，休息60 min后摘眼球采取全血，置4 ℃冰箱約3 h，血凝固后2 000 r/min離心15 min，取血清按照試劑盒的方法測定血尿素氮濃度[10]。

1.4.3.3血乳酸、MDA及SOD測定 置小鼠于深30 cm，水溫25 ℃的水中，不負重游泳10 min，分別在游泳前、游泳后以及休息20 min后采血進行乳酸測定，計算小鼠血乳酸曲線下面積，計算方法為：血乳酸曲線下面積=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min血乳酸值+2×游泳后休息20 min血乳酸值) 。剪取小鼠腿部內側腓腸肌，去除多余脂肪，制備10%組織勻漿，以試劑盒方法測定脂質過氧化水平MDA及SOD含量[10]。

1.4.3.4肝糖原及肌糖原測定 以安死術處死小鼠后，取肝臟及股四頭肌以生理鹽水漂洗，用濾紙吸干后分別精確稱取約50 mg，放入試管中，加堿液，沸水浴20 min，按照試劑盒的方法測定組織中的糖原的含量[9]。

2 結果

2.1對耐缺氧作用的影響 CHT連續(xù)灌胃給予30 d，可延長常壓缺氧小鼠的存活時間，且呈明顯的量效關系。CHT高劑量組可延長小鼠亞硝酸鈉中毒后的存活時間，3個劑量組均可延長小鼠斷頭后的呼吸時間，與陰性對照組比較，差異具極顯著性(P<0.01)，見表1。

表1 CHT對小鼠耐缺氧作用的影響

與陰性對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2對小鼠力竭游泳時間的影響 CHT中、高劑量組可延長小鼠力竭游泳時間，延長率分別達到25.4%及29.2%，且具有明顯的劑量依賴性，見表2。

表2 CHT對小鼠力竭游泳時間的影響

2.3對疲勞小鼠血清尿素氮及乳酸的影響 CHT中、高劑量組可降低小鼠運動后血清尿素氮水平，高劑量組可降低血中乳酸堆積，與陰性對照組比較，差異具顯著性(P<0.05)，見表3。

表3 CHT對疲勞小鼠血清尿素氮及乳酸的影響

2.4對疲勞小鼠組織MDA及SOD的影響 CHT中、高劑量組可降低小鼠運動后肌肉組織內MDA含量，與陰性對照組比較，差異具顯著性(P<0.05)。CHT對運動后小鼠肌肉組織中SOD含量無明顯影響，見表4。

表4 CHT對疲勞小鼠組織MDA及SOD的影響

2.5對小鼠肝糖原及肌糖原含量的影響 CHT高劑量組可提高小鼠肝糖原及肌糖原含量，與陰性對照組比較，差異具極顯著性(P<0.01)，見表5。

表5 CHT對小鼠肝糖原及肌糖原含量的影響

3 討論

常壓耐缺氧實驗模擬的是小鼠全身性缺氧，小鼠的存活時間可直接反應藥物對肌體抗缺氧能力的影響；亞硝酸鈉中毒存活實驗模擬的是急性中毒性缺氧，亞硝酸鈉可迅速破壞血紅蛋白的攜氧能力，造成組織缺氧死亡；而急性腦缺血性缺氧模擬臨床腦缺氧所產生的神經退行性疾病[11]。依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范(2003版)》判斷標準，上述3項耐缺氧動物實驗中任意2項實驗結果為陽性，就說明該產品具有提高缺氧耐受性的保健功能[12]。復方紅景天片3項實驗結果均為陽性，提示其耐缺氧功效顯著。

缺氧和疲勞密切相關，疲勞的過程中往往伴隨有組織缺氧現(xiàn)象，若肌體攜氧、利用氧的能力強，可顯著緩解甚至消除疲勞，因而，具備耐缺氧能力的藥物往往同時具備抗疲勞的效果[13]。小鼠游泳力竭時間是反映動物運動耐力的常用指標，也是反映肌體疲勞程度最直觀的指標。復方紅景天片顯著延長游泳存活時間，增加小鼠的耐力，表明其對肌體疲勞具有顯著的改善作用。

運動中體內蓄積的大量乳酸及血尿素氮等致疲勞物質，是導致肌體疲勞的直接因子。乳酸為葡萄糖無氧酵解產物，尿素氮為蛋白質和氨基酸的分解代謝產物[8]。復方紅景天片可減低乳酸及血尿素氮的積累，提示加速乳酸及血尿素氮等疲勞因子的清除代謝，或為其發(fā)揮延緩疲勞作用的機制之一。肌體的持續(xù)運動能力，取決于體內能源物質的儲備量及供氧量是否充足，在有氧狀態(tài)下，肌體首先消耗糖原為能源物質，維持正常的血糖水平。體內肌糖原和肝糖原儲備越是充足，提供運動所需的能量就越多，疲勞就會延遲出現(xiàn)[14]。復方紅景天片可增加糖原儲備，維持運動時間，延緩疲勞發(fā)生。肌體在運動時會有大量氧自由基生成，紅細胞膜上不飽和脂肪酸因受到自由基的攻擊，而產生對細胞有毒性的脂質過氧化物所引發(fā)的氧化應激反應亦是產生運動疲勞的原因之一[10]。CHT對SOD無明顯影響，但可有效抑制小鼠長時間疲勞性運動后骨骼中MDA的產生，提示CHT可有效阻止細胞膜的脂質過氧化，減緩組織氧化損傷。

綜上所述，動物連續(xù)給予復方紅景天片30 d后，可通過延長小鼠耐缺氧時間和游泳時間，降低運動后血清尿素氮以及乳酸增量，增加小鼠肌糖原及肝糖原儲備，降低運動后組織的氧化損傷，起到良好的抗疲勞及抗缺氧作用，在職業(yè)疲勞人群和老年人群中必將具有廣闊的市場前景。

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