張建偉，白中紅，楊紅霞

解放軍第九十一中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作454003

垂體腺瘤是臨床上常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)良性腫瘤，其發(fā)生于垂體前葉細(xì)胞，在顱內(nèi)腫瘤中，其發(fā)生率僅次于腦膜瘤和腦膠質(zhì)瘤[1-2]。部分垂體腺瘤具有向周?chē)M織浸潤(rùn)生長(zhǎng)的特點(diǎn)，其侵襲性生長(zhǎng)時(shí)會(huì)突破垂體基底膜，累及海綿竇、下丘腦等部位，對(duì)患者的鞍周結(jié)構(gòu)進(jìn)行破壞[3-4]，臨床上稱之為侵襲性垂體腺瘤。侵襲性垂體腺瘤的治療效果較差，復(fù)發(fā)率較高，有效治療侵襲性垂體腺瘤是神經(jīng)外科治療的一大難題，是臨床上亟待解決的問(wèn)題[5]。闡明垂體腺瘤侵襲性生長(zhǎng)的生物學(xué)機(jī)制對(duì)侵襲性垂體腺瘤的治療大有裨益。細(xì)胞因子與垂體腺瘤的侵襲性生長(zhǎng)密切相關(guān)，本研究旨在探討侵襲性垂體腺瘤組織中磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源（phosphates and tensin homologuedeleted on chromosometen，PTEN）基因的表達(dá)情況，并對(duì)三者的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2014年3月至2017年3月解放軍第九十一中心醫(yī)院收治的61例垂體腺瘤患者。61例垂體腺瘤患者中，男28例，女33例；年齡16～86歲，平均（39.8±44.7）歲。根據(jù)腺瘤侵襲情況將患者分為侵襲組（n=33）和非侵襲組（n=28）。腫瘤直徑：＜1 cm的微腺瘤患者22例，1～4 cm的大腺瘤患者28例，＞4 cm的巨大腺瘤患者11例。61例垂體腺瘤患者中，有33例侵襲性垂體腺瘤患者行MRI檢查可見(jiàn)海綿竇和下丘腦等鄰近結(jié)構(gòu)遭到破壞，術(shù)中可見(jiàn)鄰近硬腦膜以及鞍底骨質(zhì)受侵襲遭到破壞，腫瘤侵入鞍旁血管神經(jīng)或突入蝶竇腔。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有腫瘤患者均經(jīng)臨床診斷及病理檢查證實(shí)，均符合Knosp分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：服用生長(zhǎng)激素抑制劑等藥物及接受過(guò)放療和化療的患者。

1.2 試劑和方法

TNF-α鼠抗人多克隆抗體以及PTEN兔抗人多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)CST生物技術(shù)公司，PI3K兔抗人多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。山羊抗兔IgG免疫二抗和山羊抗鼠IgG免疫二抗均購(gòu)自美國(guó)Bioworld Technology生物公司。SP試劑盒購(gòu)自北京諾博萊德科技有限公司，DAB顯色劑購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。取樣后，使用0.5 ml的4%多聚甲醛（多聚甲醛使用0.01 mol/L的PBS配制，配制過(guò)程中加入氫氧化鈉輔助溶解，最后使用鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.0～7.6）固定細(xì)胞，固定后使用濃度梯度的乙醇進(jìn)行脫水，再浸入二甲苯以及石蠟溶液中，浸泡結(jié)束后進(jìn)行包埋，包埋后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片，切片厚度為5 μm，使用48℃的溫水進(jìn)行展片，撈片后在60℃恒溫箱中連續(xù)烘烤3～5 h。經(jīng)過(guò)二甲苯以及濃度梯度的乙醇進(jìn)行脫蠟和水化，使用3%濃度的甲醇雙氧水滅活組織內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶，PBS沖洗3次后使用檸檬酸抗原修復(fù)液進(jìn)行熱修復(fù)。山羊血清封閉后加入一抗（1∶50），4℃孵育過(guò)夜，次日使用PBS沖洗3次后孵育二抗（1∶1000），37℃下使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液孵育20 min，PBS沖洗后DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，再進(jìn)行封片。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)MRI檢測(cè)海綿竇是否被侵犯，依照Knosp分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)[6-7]：腫瘤局限在鞍內(nèi)及頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)側(cè)壁連線內(nèi)，海綿竇未受侵為0級(jí)；腫瘤位于頸內(nèi)動(dòng)脈連線之內(nèi)為1級(jí)；腫瘤位于頸內(nèi)動(dòng)脈外側(cè)壁連線內(nèi)側(cè)，靜脈叢被浸潤(rùn)已消失為2級(jí)；腫瘤生長(zhǎng)至頸內(nèi)動(dòng)脈外側(cè)壁連線外側(cè)，浸至海綿竇外，海綿竇內(nèi)各靜脈叢以及海綿竇外側(cè)腔消失為3級(jí)；腫瘤包裹海綿竇內(nèi)頸內(nèi)動(dòng)脈，靜脈叢消失為4級(jí)。當(dāng)腫瘤包繞頸內(nèi)動(dòng)脈2/3時(shí)，侵襲海綿竇即可確診為侵襲性垂體瘤。0～2級(jí)屬于非侵襲性，3～4級(jí)屬于侵襲性。

1.4 免疫組織化學(xué)染色及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的判斷主要根據(jù)高倍鏡視野下陽(yáng)性細(xì)胞在不同組織中所占的比例以及陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度。①陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞所占比例在0～10%者1分，11%～50%者2分，51%～80%者3分，＞80%者4分；②陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色0分，淺棕黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。上述兩項(xiàng)評(píng)分相乘后，0分為陰性（－），1～3分為弱陽(yáng)性（+），4～8分為陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。以4分為界點(diǎn)，＜4分為陰性，≥4分為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用非參數(shù)Spearman等級(jí)相關(guān)性分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PI 3 K、TNF- α和PTEN陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

侵襲組患者PI3K和TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)率高于非侵襲組患者，PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率低于非侵襲組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 兩組患者PI 3 K、TNF- α和PTEN陽(yáng)性表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 侵襲性垂體腺瘤組織中PI 3 K、TNF- α和PTEN表達(dá)情況的相關(guān)性分析

侵襲性垂體腺瘤組織中，PTEN和PI3K、TNF-α的表達(dá)不一致比例分別為84.85%（28/33）和75.76%（25/33）。經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PTEN與PI3K、TNF-α的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.495，P=0.031；r=-0.883，P=0.024），PI3K與TNF-α的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.641，P=0.000）。（表2）

表2 侵襲性垂體腺瘤組織中PI 3 K、TNF-α 與PTEN表達(dá)情況的相關(guān)性分析

2.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)PI 3 K、TNF- α和PTEN的表達(dá)情況

免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，PI3K在侵襲性垂體腺瘤組織中呈棕褐色，而在非侵襲性垂體腺瘤組織中呈棕黃色；TNF-α在侵襲性垂體腺瘤組織中呈棕褐色，而在非侵襲性垂體腺瘤組織中呈棕黃色；PTEN在侵襲性垂體腺瘤組織中呈棕黃色，而在非侵襲性垂體腺瘤組織中呈淺棕黃色。（圖1）

圖1 PI 3 K、TNF-α 、PTEN在侵襲組和非侵襲組中的表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)染色，×400）

3 討論

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，已發(fā)現(xiàn)很多細(xì)胞因子可以調(diào)控細(xì)胞周期，并與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究顯示，細(xì)胞因子參與侵襲性垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展，對(duì)患者的神經(jīng)產(chǎn)生重要的影響，這為侵襲性垂體腺瘤的靶向治療以及神經(jīng)功能的改善提供了新的靶標(biāo)[8]。

PI3K、TNF-α和PTEN在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中表達(dá)異常，且三者相互作用?，F(xiàn)有研究結(jié)果顯示，PI3K參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其表達(dá)含量的多少與神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生重要的影響[3]。PTEN作為一種抑癌基因，其具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶的雙重活性，在PI3K細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，PI3K被激活，激活后生成PIP3，進(jìn)而促進(jìn)TNF-α的激活，而PTEN基因編碼生成的蛋白則可以特異地使PIP3脫磷酸，TNF-α的活性受到抑制，導(dǎo)致PI3K/TNF-α細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被阻斷，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的增殖具有重要作用[9]。同時(shí)，PTEN可以引發(fā)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的活性降低，使細(xì)胞阻滯于細(xì)胞周期的G1期，細(xì)胞增殖明顯受到抑制。PTEN也可以通過(guò)FAK通路影響細(xì)胞功能，促進(jìn)FAK脫磷酸，抑制整合素介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程以及細(xì)胞侵襲和骨架蛋白的組裝[9]。TNF-α具有與岡田酸相似的功能，但功效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于岡田酸，可以有效刺激成纖維細(xì)胞熱休克蛋白27以及波形蛋白的磷酸化，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生，其在作用過(guò)程中可以對(duì)一氧化氮合成酶產(chǎn)生作用，促進(jìn)一氧化氮的合成，加速對(duì)DNA的損傷，從而發(fā)生基因突變，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[9-11]。垂體腺瘤一般為良性，可是當(dāng)垂體腺瘤具備侵襲性時(shí)，瘤體逐漸變大，存在局部浸潤(rùn)情況，瘤體對(duì)周?chē)M織進(jìn)行浸潤(rùn)，對(duì)患者神經(jīng)系統(tǒng)的功能產(chǎn)生影響，從而對(duì)患者的性功能也會(huì)產(chǎn)生一定的影響。手術(shù)治療難以對(duì)侵襲性垂體腺瘤徹底切除，患者存在復(fù)發(fā)的可能，患者的預(yù)后也較差，使用科學(xué)的方法盡早發(fā)現(xiàn)垂體腺瘤是否具有侵襲性傾向，有利于幫助垂體腺瘤患者早期治療和有效恢復(fù)[12]。本研究結(jié)果顯示，侵襲組患者PI3K和TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)率高于非侵襲組患者，PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率低于非侵襲組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。侵襲組中PTEN與PI3K、TNF-α的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，PI3K與TNF-α的表達(dá)呈正相關(guān)，表明PTEN與PI3K以及TNF-α是呈相互拮抗存在的。綜上所述，PI3K、TNF-α和PTEN對(duì)侵襲性垂體腺瘤的早期診斷及治療具有重要的參考價(jià)值，為治療侵襲性垂體腺瘤提供了新的治療靶標(biāo)。

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