張躍博,蒲 蕾,張金山,顏 華,王立剛,侯欣華, 劉 欣,高紅梅,王立賢，張龍超*(.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 0093； .天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津 300384)

隨著我國(guó)生豬養(yǎng)殖集約化的持續(xù)推進(jìn)，養(yǎng)豬業(yè)逐漸進(jìn)入微利時(shí)代，成本控制成為該時(shí)期一個(gè)鮮明特征。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，飼料投入約占總養(yǎng)殖成本的70%，因此，飼料利用效率的微小提升就會(huì)帶來(lái)飼養(yǎng)成本的大幅下降[1-2]。因此，飼料利用效率越來(lái)越受到人們的重視。目前，對(duì)豬的生長(zhǎng)性狀和瘦肉率、產(chǎn)仔數(shù)等繁殖性狀的選擇已經(jīng)取得明顯進(jìn)展，飼料利用效率現(xiàn)已成為豬育種中重要選擇目標(biāo)性狀之一。飼料利用效率評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括飼料增重比(feed/gain ratio, F/G)、增重飼料比(gain/feed ratio, G/F)和剩余采食量(residual feed intake，RFI)。從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度來(lái)說(shuō)，直接利用比值性狀制定選擇指數(shù)是不盡合理的[3]。RFI是畜禽實(shí)際采食量與用于維持和增重所需要的預(yù)測(cè)采食量之差，能夠反映動(dòng)物本身由遺傳背景決定的代謝差異。同時(shí)，多項(xiàng)研究表明，RFI具有中等遺傳力[4-6]，是可遺傳的。因此，RFI更加適合作為飼料利用效率的評(píng)估指標(biāo)用于畜禽遺傳選育。隨著電子飼喂設(shè)備的更新?lián)Q代以及采食量測(cè)定系統(tǒng)的不斷發(fā)展，RFI現(xiàn)已應(yīng)用于一些有關(guān)飼料利用效率的研究中[1,7-9]。

估計(jì)RFI需要大量的平均日采食量數(shù)據(jù)，雖然電子飼喂設(shè)備的更新?lián)Q代以及采食量測(cè)定系統(tǒng)的不斷發(fā)展使得采食量數(shù)據(jù)收集更加便利，但是依然昂貴費(fèi)時(shí)。因此，鑒定與RFI相關(guān)的分子標(biāo)記十分必要。應(yīng)用重測(cè)序技術(shù)，Liu等[10]檢測(cè)出46個(gè)與科寶雞RFI顯著相關(guān)的SNPs。Seabury等[11]利用混合模型進(jìn)行GWAS分析，在安格斯牛中定位到7個(gè)高效QTLs，在海福特牛中鑒定出4個(gè)高效QTLs。目前，科研人員對(duì)豬RFI分子機(jī)理也開(kāi)展了許多工作。Fan等[12]通過(guò)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TO上p.Ala198Ala和TCF7L2上c.646+514A > G與RFI顯著關(guān)聯(lián)。Sanchez等[13]在大白豬SSC6上檢測(cè)到一個(gè)與RFI相關(guān)的QTL。Onteru等[14]通過(guò)GWAS方法在大白豬SSC2、3、5、7、8、9、14和15上檢測(cè)到了與RFI顯著關(guān)聯(lián)的SNPs。Mauch等[9]在SSC1、5、6、14和16上定位到與RFI相關(guān)的QTLs。Bai等[15]以軍牧1號(hào)白豬為研究對(duì)象，利用GWAS方法檢測(cè)到12個(gè)與RFI顯著關(guān)聯(lián)的SNPs。2014年Do等[16]對(duì)杜洛克豬的飼料利用效率開(kāi)展研究，認(rèn)為HLCS是豬RFI性狀的重要候選基因。但目前針對(duì)HLCS的研究較少，在豬中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，其對(duì)豬剩余采食量的影響尚不明確。

HLCS基因位于人21號(hào)染色體長(zhǎng)臂22區(qū)，全長(zhǎng)HLCS蛋白包含726個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為81 ku。豬HLCS基因位于13號(hào)染色體上，包含12個(gè)外顯子。全羧化酶合成酶能夠催化生物素與羧化酶及組蛋白結(jié)合[17-19]，生物素化的羧化酶在糖原異生、脂肪酸合成、氨基酸等代謝途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用[20]，生物素化的組蛋白可抑制基因轉(zhuǎn)錄[21]。本研究以豬HLCS基因?yàn)檠芯繉?duì)象，檢測(cè)其組織表達(dá)情況，篩選多態(tài)性，并探討多態(tài)位點(diǎn)與RFI性狀之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用豬為美系杜洛克，均來(lái)自河南省雛鷹農(nóng)牧集團(tuán)股份有限公司尉氏分公司，3頭杜洛克豬在100 kg左右時(shí)進(jìn)行屠宰，迅速收集心、肝、脾、腎、脂肪、肌肉、小腸和胃底組織于凍存管中，并盡快置于液氮罐中，用于組織表達(dá)分析。利用美國(guó)奧斯本自動(dòng)喂料系統(tǒng)測(cè)定1 292頭美系杜洛克豬的每日采食量和每日體重，并采集所有試驗(yàn)中涉及個(gè)體的耳組織。90日齡開(kāi)始測(cè)定，體重達(dá)100 kg時(shí)結(jié)束，并在此時(shí)用Aquila Vet獸用B超儀測(cè)定豬的背膘厚及眼肌面積。試驗(yàn)中RFI計(jì)算參考前人方法[22]：

RFI=ADFI-(b1×(OnBW-30)+b2×(OffBW-100)+b3×MetamidBW+b4×ADGA+b5×OffBFA)，式中，ADFI指平均日采食量；OnBW指初測(cè)體重；OffBW指結(jié)測(cè)體重；MetamidBW指中間代謝體重，計(jì)算公式為((OnBW+OffBW)/2)0.75；ADGA代表90～180天之間的平均日增重校正值；OffBFA指測(cè)試結(jié)束時(shí)10～11肋背膘厚校正到100kg體重時(shí)的值。100kg背膘厚和30～100kg ADGA的校正公式來(lái)源于加拿大遺傳改良計(jì)劃。

1.2 主要試劑

TaqDNA聚合酶、dNTP混合物、動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒均購(gòu)自天根生化科技有限公司(北京)；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMRT Reagent Kit)和熒光定量染料(SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ)均購(gòu)于TaKaRa公司(大連)。

1.3 DNA和RNA的提取

用酚-仿法從耳組織樣品中提取基因組DNA，利用Nano Drop 2000核酸定量?jī)x測(cè)定每頭豬耳樣DNA的濃度，A260 nm/A280 nm比值為1.7～2.2為合格樣品。使用動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒提取總RNA，提取過(guò)程全按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。提取的RNA經(jīng)IMPLEN超微量分光光度計(jì)檢測(cè)合格方可用于后續(xù)試驗(yàn)。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。

1.4 引物設(shè)計(jì)

參考HLCS基因mRNA序列(GenBank登錄號(hào)為XM_021070965.1)，使用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的Primer-BLAST設(shè)計(jì)普通PCR和熒光定量PCR引物，GAPDH作為內(nèi)參基因，引物信息見(jiàn)表1。引物均由英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司合成。

表1普通PCR和熒光定量PCR引物

Table1PrimersforPCRamplificationsandreal-timePCRforporcineHLCS

引物用途Purpose引物名稱Primer引物序列(5′→3′)Primersequence退火溫度/℃Annealingtemperature產(chǎn)物長(zhǎng)度/bpProductsize多態(tài)性檢測(cè)PolymorphismdetectionHLCS＿1FATGGCCCTTCCCTCTTTTGTT58．9467HLCS＿1RGACACCCACACTACGACACATHLCS＿2FTCCTTCGGGAATGGTGCTG63．81407HLCS＿2RATCCTCTACCCCAGCAAAAAGACHLCS＿3FATACAGCAAGGGGGTCAGGT63．8385HLCS＿3RCCCTCAACTGAATGAGTCCCCHLCS＿4FTTCATGGCAGATGGTGGTCAA61．0817HLCS＿4RCTGGTTCAAGGGAACGGTCAAHLCS＿5FTTCCATCGCTCTCACCACAG61．0730HLCS＿5RAAGAGGCGGTGATCTTTGCTHLCS＿6FTCCCTTGGCACAACATGGAT62．0672HLCS＿6RTTACAAAGAGCAGGTGGAGGCHLCS＿7FAGTGATGAGCCGTCCGAAAA62．0343HLCS＿7RCACTCCCCTCAATGTAGCCAHLCS＿8FTCGGTGGCGTTCTGGTTA59．0816HLCS＿8RGCTGAAGTGCCTGTGGAGHLCS＿9FTGGTGCTTACCAAACGATGC62．01179HLCS＿9RCAAATCCTCCTTTGCGTGTGG熒光定量PCRReal?timePCRH168FACTTGAACAAATGGGCGCTCT60．0168H168RTGCAAGCTAACGGCAAACAA

1.5 熒光定量PCR檢測(cè)

利用ABI QuantStudioTM7 Flex實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)HLCS在心、肝、脾、腎、脂肪、肌肉、小腸和胃底組織中的表達(dá)量。反應(yīng)總體積為20 μL：2×SYBR?Premix ExTaqII 10 μL，上下游引物(10 μmol ·L-1)各0.4 μL，50×ROX Reference Dye II 0.4 μL，模板2 μL，ddH2O 6.8 μL。PCR程序：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃ 34 s，40個(gè)循環(huán)；反應(yīng)結(jié)束后分析熔解曲線。采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。使用SAS9.2軟件中的ANOVA程序進(jìn)行方差分析。

1.6 PCR擴(kuò)增

HLCS基因擴(kuò)增反應(yīng)體系為25 μL：10×Taq Buffer 2.5 μL，dNTP(10 mmol·L-1) 0.5 μL，ddH2O 18.5 μL，模板2 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各0.5 μL，DNA聚合酶(2.5 U·μL-1) 0.5 μL。 PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。反應(yīng)產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶明亮且長(zhǎng)度符合預(yù)期的產(chǎn)物交由北京諾賽基因組研究中心有限公司進(jìn)行Sanger測(cè)序。運(yùn)用SeqMan軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

計(jì)算各變異位點(diǎn)等位基因頻率、基因型頻率、多態(tài)信息含量、群體雜合度及Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。 使用SAS9.2軟件中的GLM程序，配合下列模型進(jìn)行最小二乘方差分析，比較RFI在各基因型之間的差異。使用的模型：

Yijkl=μ+Gi+Sj+Bk+Pl+eijkl

其中，Yijkl為性狀測(cè)定值；μ為群體均值；Gi為基因型效應(yīng)；Sj為性別效應(yīng)；Bk為測(cè)定批次效應(yīng)；Pl為胎次效應(yīng)；eijkl為隨機(jī)誤差。

2 結(jié) 果

2.1 豬HLCS基因組織表達(dá)譜分析

熒光定量PCR檢測(cè)HLCS基因mRNA在杜洛克豬多種組織中的表達(dá)情況如圖1所示。HLCS基因在所檢測(cè)的8種組織中均有表達(dá)，其中，在脂肪組織中表達(dá)量最高，肝次之，在心和肌肉中痕量表達(dá)。方差分析顯示，HLCS在脂肪組織中表達(dá)量顯著高于除肝以外的其它組織(P<0.05)，在肝中的表達(dá)顯著高于除脂肪和脾以外的其它組織(P<0.05)，在心和肌肉中的表達(dá)則顯著低于除胃底以外的其它所有組織(P<0.05)。

不同組織間，不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母表示不顯著(P>0.05)The different letters indicate significant difference (P<0.05), the same letter indicate no significant difference (P>0.05) among different tissues

圖1 HLCS在杜洛克豬各組織中的表達(dá)水平Fig.1 Relative mRNA abundance of the porcine HLCS in 8 tissues of Duroc pigs

2.2 豬HLCS基因編碼區(qū)遺傳多態(tài)性檢測(cè)

在1 292頭美系杜洛克中挑選RFI具有明顯差異的個(gè)體各10頭組成高、低組。高組個(gè)體RFI均值為(0.528±0.077) kg，低組個(gè)體RFI均值為(-0.545±0.059) kg。利用PCR擴(kuò)增和測(cè)序技術(shù)，在HLCS編碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)5個(gè)SNPs(圖2)，其中，c.1173C>T和c.1408G>C位于外顯子4，c.1976A>G位于外顯子6，c.2160G>A位于外顯子7，c.2325G>A位于外顯子8。其中，c.1408G>C和c.1976A>G為非同義突變位點(diǎn)，前者使得丙氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼?，后者?dǎo)致天冬氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦拾彼帷?/p>

圖2 豬HLCS基因SNPs位點(diǎn)示意圖Fig.2 Schematic representation of SNPs in porcine HLCS

2.3 豬HLCS基因多態(tài)位點(diǎn)基因型和等位基因頻率及群體遺傳特性

用288頭杜洛克個(gè)體針對(duì)c.1408G>C和c.1976A>G位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，分別成功分型226頭和241頭，各位點(diǎn)的基因型頻率、等位基因頻率及群體遺傳特性見(jiàn)表2。從表2可以看出，2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的雜合度均接近0.5，說(shuō)明它們的純合度和雜合度基本相同。PIC值顯示，這2個(gè)位點(diǎn)在此杜洛克群體中的多態(tài)性較高，遺傳變異比較大。c.1408G>C和c.1976A>G的優(yōu)勢(shì)等位基因均為G，基因頻率分別為0.513和0.575；優(yōu)勢(shì)等位基因型均為雜合基因型?？ǚ綑z驗(yàn)顯示，c.1408G>C在所選擇的杜洛克豬群中未達(dá)到Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)，而c.1976A>G處于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。

表2HLCS基因多態(tài)位點(diǎn)c.1408G>C和c.1976A>G的基因型和等位基因頻率及群體遺傳特性

Table2Thegenotypeandallelefrequencyandthepopulationgeneticcharacteristicsofc.1408G>Candc.1976A>GinHLCS

位點(diǎn)SNP個(gè)體數(shù)Number基因型頻率Genotypefrequency等位基因頻率Allelefrequency雜合度He多態(tài)信息含量PICχ2c．1408G>C226GGGCCCGC0．5000．3756．4520．2210．5840．1950．5130．487c．1976A>G241AAAGGGAG0．4890．3693．0200．1530．5440．3030．4250．575

2.4 豬HLCS基因多態(tài)性與RFI的關(guān)聯(lián)分析

通過(guò)對(duì)c.1408G>C和c.1976A>G多態(tài)位點(diǎn)與RFI性狀進(jìn)行群體關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，前者基因型間的RFI沒(méi)有顯著差異(P>0.05)，但表現(xiàn)出GG基因型個(gè)體的RFI比CC基因型個(gè)體低的趨勢(shì)；后者與RFI顯著關(guān)聯(lián)(P<0.5)，AA基因型個(gè)體的RFI顯著高于GG基因型個(gè)體(表3)。2個(gè)位點(diǎn)上的有利等位基因型比不利等位基因型分別低0.018 1 和0.063 4 kg。

表3HLCS多態(tài)位點(diǎn)基因型與RFI的關(guān)聯(lián)分析

Table3AssociationofgenotypesatthetwopolymorphismsiteswithRFI

多態(tài)位點(diǎn)Site個(gè)體數(shù)Number基因型GenotypeRFI均值/kgMean最小二乘均值/kgLSMc．1408G>C50GG0．03250．0154±0．0279132GC0．06540．0498±0．019544CC0．03090．0335±0．0291c．1976A>G37AA0．07110．0676±0．0267a131AG0．04310．0319±0．0174ab73GG-0．03140．0042±0．0227b

不同基因型間，所標(biāo)字母相異表示差異顯著(P<0.05)，所標(biāo)字母相同表示差異不顯著(P>0.05)

The different letters (within same column) show statistically significant difference (P< 0.05), the same letter(within same column) show statistically no significant difference(P>0.05) among different genotypes

3 討 論

生物素是生物體新陳代謝不可或缺的物質(zhì)，它是生物素依賴性羧化酶的輔助因子。生物素依賴性羧化酶主要有丙酰輔酶A羧化酶、丙酮酸羧化酶、甲基巴豆酰輔酶A羧化酶和2種乙酰輔酶A羧化酶，這些羧化酶在糖異生、脂肪酸合成及氨基酸分解代謝中催化關(guān)鍵反應(yīng)[23]。新合成的生物素依賴性羧化酶不具有酶活性，需在HLCS催化下與生物素以共價(jià)鍵結(jié)合后才具有活性[24]。目前，針對(duì)HLCS的研究主要集中在人的羧化酶缺乏癥上。羧化酶缺乏癥主要分為兩種，一種是生物素酶缺乏(BTD)所致，一種是全羧化酶合成酶缺乏(HLCSD)所致。HLCS活性下降，導(dǎo)致生物素?zé)o法與生物素依賴的羧化酶結(jié)合，從而影響羧化酶活性，使脂肪酸合成、糖異生及氨基酸的分解代謝發(fā)生障礙，這些過(guò)程與機(jī)體新陳代謝密切相關(guān)[25]。臨床上，羧化酶缺乏的兒童會(huì)表現(xiàn)出發(fā)育遲緩的癥狀[26]。研究表明，代謝通路(metabolic pathways)與豬RFI性狀顯著關(guān)聯(lián)，并且代謝過(guò)程中各因子的變異會(huì)引起RFI的變化[27]；而HLCS基因就位于代謝通路中。鑒于HLCS在新陳代謝中的重要作用及Do等[16]的研究結(jié)果，本研究分析了豬HLCS基因的多態(tài)性，并進(jìn)一步分析了豬HLCS基因與RFI的關(guān)系。

本研究首先檢測(cè)了豬HLCS基因在多種組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其在脂肪組織和肝中表達(dá)量較高。在人類各相應(yīng)組織中(不包括肌肉)，HLCS也均表達(dá)，只是腎中表達(dá)量最高，肝次之，心最低，脂肪與肝接近[28]。這些結(jié)果預(yù)示著HLCS可能在脂質(zhì)合成代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Lkhagvador等[29]利用RFI高、低組在豬的脂肪組織和肝中鑒定出大量差異表達(dá)基因，表明脂質(zhì)合成代謝與RFI存在密切關(guān)系；但Lkhagvador等[29]鑒定出的差異表達(dá)基因并不包含HLCS。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)RFI高、低組杜洛克垂體組織RNA-seq數(shù)據(jù)的差異表達(dá)分析中，也未捕獲到HLCS基因。由此推測(cè)，HLCS并不是通過(guò)表達(dá)量的改變影響RFI，而可能通過(guò)改變蛋白結(jié)構(gòu)或功能來(lái)影響RFI。

在人類的全羧化酶缺乏癥(holocarboxylase synthetase deficiency，HCSD)研究中均在患者的HLCS基因上檢測(cè)到錯(cuò)義突變[25, 30-33]。R508W和V550M發(fā)生在生物素結(jié)合區(qū)域，是HCSD患者HLCS基因上常見(jiàn)突變，可導(dǎo)致HLCS與生物素結(jié)合能力下降[25]。Esaki等[34]利用定點(diǎn)突變的方法在HLCS基因上引入Q699R變異，發(fā)現(xiàn)重組HLCS蛋白與生物素的親和力顯著下降。這些研究結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了上述猜測(cè)。豬HLCS基因上也存在諸多變異，截止到2017年12月2日，NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)[35]共收錄了177個(gè)位于豬HLCS基因cDNA序列上的突變位點(diǎn)，其中166個(gè)為SNPs，11個(gè)為Indels，但是這些變異的生物學(xué)意義還未得到詮釋。本研究中共發(fā)現(xiàn)5個(gè)SNPs，除c.1173C>T外均已存在于NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)中，其中c.1408G>C和c.1976A>G可導(dǎo)致錯(cuò)義突變。對(duì)c.1408G>C和c.1976A>G錯(cuò)義突變?cè)诙怕蹇巳后w中分型，兩者的優(yōu)勢(shì)等位基因均為G。根據(jù)Botstein等[36]提出的衡量多態(tài)信息含量標(biāo)準(zhǔn)，本研究中的2個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)多態(tài)信息含量(PIC)均為中度多態(tài)，表明2個(gè)位點(diǎn)具有作為育種標(biāo)記的潛力，適合進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。通過(guò)對(duì)c.1408G>C和c.1976A>G多態(tài)位點(diǎn)與RFI性狀進(jìn)行群體關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，c.1408G>C基因型間的RFI沒(méi)有顯著差異(P>0.05)，而c.1976A>G與RFI顯著關(guān)聯(lián)(P<0.05)，GG基因型更有利。使用SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)分析豬HLCS氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)c.1976A>G位于BPL_N結(jié)構(gòu)域上。雖然該結(jié)構(gòu)域功能未知，但其氨基酸序列變化更易改變蛋白結(jié)構(gòu)及功能，進(jìn)而影響豬RFI。本研究不僅為開(kāi)展RFI性狀分子選育提供了有價(jià)值的育種標(biāo)記，同時(shí)也為進(jìn)一步探究HLCS基因影響豬RFI的分子調(diào)控機(jī)理奠定了研究基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

本研究表明，HLCS基因在豬的多種組織中均表達(dá)，且在與新陳代謝密切相關(guān)的肝、脂肪等組織中高表達(dá)。在豬HLCS基因編碼區(qū)共檢測(cè)到5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，包括2個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)c.1408G>C和c.1976A>G。對(duì)2個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)在杜洛克群體進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)c.1976A>G與杜洛克豬RFI存在顯著關(guān)聯(lián)。這些結(jié)果表明，豬HLCS基因上錯(cuò)義突變位點(diǎn)c.1976A>G可作為豬飼料利用效率性狀選育的潛在分子標(biāo)記。

[1] 蒲 蕾,岳慧潔,張龍超,等.豬飼料利用效率的研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,21(4):77-85.

PU L,YUE H J,ZHANG L C,et al.Current progress in feed utilization efficiency of pig[J].JournalofChinaAgriculturalUniversity,2016,21(4):77-85. (in Chinese)

[2] 鄧昌彥.影響?zhàn)B豬生產(chǎn)成本的主要因素及其控制對(duì)策[J].農(nóng)業(yè)新技術(shù)(今日養(yǎng)豬業(yè)),2005(3):48-50.

DENG C Y.The main factors tha affect the cost of pig production and its control countermeasures[J].NewAgriculturalTechnology(PigsToday),2005(3):48-50. (in Chinese)

[3] 楊運(yùn)清,王忠新,尹炳北.比值性狀的指數(shù)選擇方法探討[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2000,31(3):198-202.

YANG Y Q,WANG Z X,YIN B B.Study on the index selection method for ratio trait[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica,2000,31(3):198-202. (in Chinese)

[4] GILBERT H,BIDANEL J P,GRUAND J,et al.Genetic parameters for residual feed intake in growing pigs,with emphasis on genetic relationships with carcass and meat quality traits[J].JAnimSci,2007,85(12):3182-3188.

[5] HOQUE M A,KADOWAKI H,SHIBATA T,et al.Genetic parameters for measures of residual feed intake and growth traits in seven generations of Duroc pigs[J].LivestSci,2009,121(1):45-49.

[6] MAUCH E,SER O N,YOUNG J,et al.Diet by genotype interaction in yorkshire pigs divergently selected for feed efficiency[R].IOWA State University,2017.

[7] GILBERT H,BILLON Y,BROSSARD L,et al.Divergent selection for residual feed intake in the growing pig[J].Animal,2017,11(9):1427-1439.

[8] WILLIAMS K,WEIGEL K,COBLENTZ W,et al.0321 effect of diet energy level and genomic residual feed intake on dairy heifer performance[J].JAnimSci,2016,94(S5):154.

[9] MAUCH E D,SERO N V,YOUNG J M,et al.0391 genomic regions associated with residual feed intake of divergently selected lines of Yorkshire pigs when fed a low-energy,high-fiber diet[J].JAnimSci,2016,94(S5):189.

[10] LIU J,LIU R,WANG J,et al.Exploring genomic variants related to residual feed intake in local and commercial chickens by whole genomic resequencing[J].Genes(Basel),2018,9(2):E57.

[11] SEABURY C M,OLDESCHULTE D L,SAATCHI M,et al.Genome-wide association study for feed efficiency and growth traits in U.S. beef cattle[J].BMCGenomics,2017,18:386.

[12] FAN B,LKHAGVADORJ S,CAI W,et al.Identification of genetic markers associated with residual feed intake and meat quality traits in the pig[J].MeatSci,2010,84(4):645-650.

[13] SANCHEZ M P,TRIBOUT T,IANNUCCELLI N,et al.A genome-wide association study of production traits in a commercial population of Large White pigs:Evidence of haplotypes affecting meat quality[J].GenetSelEvol,2014,46:12.

[14] ONTERU S K,GORBACH D M,YOUNG J M,et al.Whole genome association studies of residual feed intake and related traits in the pig[J].PLoSOne,2013,8(6):e61756.

[15] BAI C,PAN Y,WANG D,et al.Genome-wide association analysis of residual feed intake in Junmu No.1 White pigs[J].AnimGenet,2017,48(6):686-690.

[16] DO D N,OSTERSEN T,STRATHE A B,et al.Genome-wide association and systems genetic analyses of residual feed intake,daily feed consumption,backfat and weight gain in pigs[J].BMCGenet,2014,15:27.

[17] WOLF B.Disorders of biotin metabolism[M]//SCRIVER C R,BEAUDET A L,SLY W S,et al.The metabolic and molecular basis of inherited disease.New York:McGraw-Hill,2001:3935-3956.

[18] STANLEY J S,GRIFFIN J B,ZEMPLENI J.Biotinylation of histones in human cells:Effects of cell proliferation[J].FEBSJ,2001,268(20):5424-5429.

[19] KOBZA K,CAMPOREALE G,RUECKERT B,et al.K4,K9 and K18 in human histone H3 are targets for biotinylation by biotinidase[J].FEBSJ,2005,272(16):4249-4259.

[20] ZEMPLENI J,WIJERATNE S S K,HASSAN Y I.Biotin[J].BioFactors,2009,35(1):36-46.

[21] PESTINGER V,WIJERATNE S S K,RODRIGUEZ-MELENDEZ R,et al.Novel histone biotinylation marks are enriched in repeat regions and participate in repression of transcriptionally competent genes[J].JNutrBiochem,2011,22(4):328-333.

[22] GORBACH D,CAI W,DEKKERS J C M,et al.Large-scale SNP association analyses of residual feed intake and its component traits in pigs[C]//Proceedings of the 9th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production.Leipzig,Germany:German Society for Animal Science,2010:265.

[24] MOCK D M.Biotin:From nutrition to therapeutics[J].JNutr,2017,147(8):1487-1492.

[25] 鄭 宏,盧婷婷,陸相朋,等.全羧化酶合成酶缺乏癥1例臨床及基因分析[J].臨床兒科雜志,2017,35(8):605-608.

ZHENG H,LU T T,LU X P,et al.The clinical and genetic features of holocarboxylase synthetase deficiency in a male patient[J].JournalofClinicalPediatrics,2017,35(8):605-608. (in Chinese)

[26] ELREFAI S,WOLF B.Disorders of biotin metabolism[M]//ROSENBERG R N,PASCUAL J N.Rosenberg’s Molecular and Genetic Basis of Neurological and Psychiatric Disease.5th ed.San Diego,CA:Elsevier,2015:531-539.

[27] DO D N,STRATHE A B,OSTERSEN T,et al.Genome-wide association and pathway analysis of feed efficiency in pigs reveal candidate genes and pathways for residual feed intake[J].FrontGenet,2014,5:307.

[28] FAGERBERG L,HALLSTR?M B M,OKSVOLD P,et al.Analysis of the human tissue-specific expression by genome-wide integration of transcriptomics and antibody-based proteomics[J].MolCellProteomics,2014,13(2):397-406.

[29] LKHAGVADOR J S,QU L,CAI W,et al.Gene expression profiling of the short-term adaptive response to acute caloric restriction in liver and adipose tissues of pigs differing in feed efficiency[J].AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol,2010,298(2):R494-R507.

[30] 李 端,劉 麗,李秀珍,等.中國(guó)人多種羧化酶缺陷癥患兒4例及其父母基因突變分析[J].中華兒科雜志,2006,44(11):865-868.

LI D,LIU L,LI X Z,et al.Gene mutation analysis in four Chinese patients with multiple carboxylase deficiency[J].ChineseJournalofPediatrics,2006,44(11):865-868. (in Chinese)

[31] 張豪正,王廣新.HLCS基因突變致全羧化酶合成酶缺乏癥一例的臨床和遺傳學(xué)特點(diǎn)[J].中華肥胖與代謝病電子雜志,2017,3(2):82-85.

ZHANG H Z,WANG G X.Clinical and genetic characteristics of holocarboxylase synthetase deficiency in a case[J].ChineseJournalofObesityandMetabolicDiseases(ElectronicEdition),2017,3(2):82-85. (in Chinese)

[32] HUI J,LAW E,CHUNG C,et al.The first reported HLCS gene mutation causing holocarboxylase synthetase deficiency in a Vietnamese patient[J].WorldJPediatr,2012,8(3):278-280.

[33] 劉 舒,劉 暢,曾玉坤,等.一個(gè)罕見(jiàn)的羧化全酶合成酶缺乏癥家系的臨床分析與基因診斷[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(10):35-37,45.

LIU S,LIU C,ZENG Y K,et al.Clinical and gene mutation analysis in a family of holocarboxylase synthetase deficiency[J].ChineseJournalofBirthHealth&Heredity,2015,23(10):35-37,45. (in Chinese)

[34] ESAKI S,MALKARAM S A,ZEMPLENI J.Effects of single-nucleotide polymorphisms in the humanholocarboxylasesynthetasegene on enzyme catalysis[J].EurJHumGenet,2012,20(4):428-433.

[35] SHERRY S T,WARD M H,KHOLODOV M,et al.dbSNP:The NCBI database of genetic variation[J].NucleicAcidsRes,2001,29(1):308-311.

[36] BOTSTEIN D,WHITE R L,SKOLNICK M,et al.Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J].AmJHumGenet,1980,32(3):314-331.