高建鋒，李討討，陳燦燦，趙興緒,馬友記*(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 70070；2.甘肅省肉羊繁育生物技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，民勤 700；.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州 70070)

乳房炎是目前畜牧養(yǎng)殖業(yè)中最為常見的多發(fā)性疾病之一，會(huì)導(dǎo)致泌乳動(dòng)物產(chǎn)奶量下降和乳成分及其理化性質(zhì)等發(fā)生變化，從而降低乳制品的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-4]。按泌乳動(dòng)物有無乳房炎及病變的類型進(jìn)行分類，將分為正常型、隱性乳房炎和臨床型乳房炎。正常型和隱性乳房炎在宏觀上用肉眼觀察，乳房與乳汁均無明顯異常，但在體細(xì)胞(somatic cell count, SCC)計(jì)數(shù)、細(xì)菌學(xué)檢測、乳汁導(dǎo)電率和pH上，二者結(jié)果明顯不同。臨床型乳房炎患者相比較前二者，在宏觀上，乳房和乳汁卻有著十分明顯的變化。其主要表現(xiàn)：1) 乳房紅腫、發(fā)癢、觸碰時(shí)有疼痛反應(yīng)；2) 乳汁中含有絮狀物或呈水樣。乳房炎患者若不能得到及時(shí)治療，不僅會(huì)導(dǎo)致泌乳動(dòng)物產(chǎn)奶量和奶品質(zhì)顯著降低，而且還會(huì)影響正常生理功能，延長產(chǎn)后發(fā)情時(shí)間。因此，若能從這些病變的乳房炎患者中尋找更多的相關(guān)分子致病機(jī)理，將對(duì)早期診斷與治療具有重要意義。目前國內(nèi)外學(xué)者和專家針對(duì)泌乳動(dòng)物乳房炎病因、發(fā)病機(jī)理及致病原理等進(jìn)行了大量的研究，但仍未找到安全有效的防治途徑。究其根源是由于正常乳腺組織產(chǎn)生炎癥反應(yīng)會(huì)轉(zhuǎn)化為乳房炎，涉及多個(gè)致病基因、抑制基因、細(xì)胞黏附因子、生長因子及其多基因變異積累與相互作用。

本課題組前期結(jié)合二維電泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)和質(zhì)譜鑒定技術(shù)從正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中篩選與鑒定出差異性表達(dá)蛋白30種，其中ANXA2與ERp29蛋白在臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中分別被鑒定為下調(diào)蛋白和上調(diào)蛋白。ANXA2蛋白是一類受Ca2+所依賴的膜磷脂連接蛋白超家族成員之一[5-8]，在生物膜的形成、胞吞和胞吐、成骨細(xì)胞的形成和骨的重吸收、DNA合成、細(xì)胞增殖、凋亡及分化等方面起著重要調(diào)節(jié)作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29(ERp29)是一種新型的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白，它不同于傳統(tǒng)的分子伴侶，既不與ATP結(jié)合也不與Ca2+結(jié)合[9-10]，但其主要發(fā)揮類似分子伴侶的功能，在新生蛋白的分泌和成熟中發(fā)揮著重要的作用。本研究以正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織為研究對(duì)象，應(yīng)用qRT-PCR、Western blot和免疫組織化學(xué)法檢測ANXA2、ERp29 的mRNA和蛋白在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的表達(dá)與定位，旨在為進(jìn)一步從分子水平上探討ANXA2與ERp29在綿羊乳房炎中的作用提供新的研究素材。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集

正常與臨床型乳房炎綿羊(Ovisaries，各3只)乳腺組織樣品來源于甘肅省臨洮縣平長現(xiàn)代農(nóng)牧業(yè)有限公司種羊場。其中患臨床型乳房炎綿羊可結(jié)合以下特征進(jìn)行診斷:1)當(dāng)肉眼觀測時(shí)發(fā)現(xiàn)綿羊乳房紅腫且觸摸時(shí)伴有堅(jiān)硬疼痛、發(fā)熱等癥狀；2)擠掉初乳，再擠出乳汁置于滅菌的廣口瓶內(nèi)，然后觀測綿羊乳汁的變化，當(dāng)乳汁呈現(xiàn)絮狀和凝乳塊并且伴有一定酸臭味時(shí)，則最終判定為臨床型乳房炎。以正常綿羊?yàn)閷?duì)照組。正常綿羊可通過pH法測定，當(dāng)乳汁呈弱酸性時(shí)，則判定為正常。試驗(yàn)羊經(jīng)頸靜脈放血處死后，沿腹部正中線切開皮膚至恥骨后緣，剝離皮膚，用生理鹽水將避開脂肪組織的乳腺組織沖洗干凈，取約0.1 m3乳腺組織塊，剪成小塊，分裝于1.5 mL凍存管中后迅速投入液氮進(jìn)行保存，之后轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱保存待用。將另一部分的乳腺組織固定在4%的多聚甲醛溶液中。

1.2 主要試劑

Trans Zol UP RNA提取試劑盒、Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Ki、焦碳酸二乙酯(Diethyl pyrocarbonate, DEPC)水、Tran Start TipGreen qPCR Super Mix和Passive Reference Dye(北京全式金生物公司)；一抗(Rabbit Anti-ANXA2 antibody、Rabbit Anti-ERp29 antibody、Anti-beta-Actin)、免疫組化試劑盒(SP-0022)、二抗(Goat Anti-rabbit IgG/HRP)、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine, DAB)顯色試劑盒(北京的博奧森生物公司)；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 方法

1.3.1 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄 將充分研磨好的綿羊乳腺組織根據(jù)Trans Zol UP RNA提取試劑盒的使用說明提取總RNA。選擇完整性較好的RNA樣品將其濃度調(diào)至500 ng·μL-1，按反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明中的兩步法進(jìn)行cDNA第一鏈的合成，將產(chǎn)物置于-20 ℃保存。

1.3.2 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)NCBI上已公布羊源膜聯(lián)蛋白 A2(ANXA2，NM_001093788.1)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29(ERp29，EU596595.1)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH，NM_001190390.1)的序列，應(yīng)用Oligo7軟件來實(shí)現(xiàn)對(duì)引物的設(shè)計(jì)，之后通過NCBI上的BLAST去檢測引物特異性，送上海生工生物公司合成。引物序列見表1。

表1qRT-PCR引物

Table1PrimersofqRT-PCR

基因Gene引物序列(5′→3′)Primersequence產(chǎn)物長度/bpProductslengthANXA2F：CAAGCCCCTGTATTTCGCTGA，R：CTTTCTGGTAGTCGCCCTT194ERp29F：CCTTCCCCTGGATACAATCACT，R：AGTTTTCAGCCAGACGCTTG125GAPDHF：GAAGGTCGGAGTGAACGGAT，R：GATGACGAGCTTCCCGTTCT196

1.3.3 qRT-PCR 以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，按照Trans Start?Tip Green qPCR Super Mix試劑盒建議的體系，對(duì)ANXA2、ERp29與GAPDH基因進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系(20 μL)：上下游引物(10 mol·L-1)各0.4 μL、cDNA 1 μL、2×Tran Start TipGreen qPCR Super Mix 10 μL、Passive Reference Dye(50×)0.4 μL、dd H2O 7.8 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃ 30 s；94 ℃ 5 s，56 ℃ 15 s，72 ℃ 10 s，共 40個(gè)循環(huán)。所有樣品都做3次重復(fù)，待反應(yīng)完成后，分別觀測熔解曲線和擴(kuò)增曲線。

1.3.4 綿羊乳腺組織中ANXA2與ERp29蛋白表達(dá)水平的檢測 將苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride, PMSF)和裂解液加入到充分研磨的乳腺組織中，以此來提取乳腺組織中總蛋白，置于冰上充分裂解30 min，經(jīng)4 ℃ 12 000 r·min-1離心10 min，吸取上清，采用聚氰基丙烯酸正丁酯(bicin choninic acid, BCA)試劑盒測定總蛋白的濃度，定量后按一定比例將4×SDS上樣緩沖液加入其中，并煮沸10 min，使蛋白變性，于-20 ℃保存。12%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis, SDS-PAGE)，將蛋白從凝膠轉(zhuǎn)至聚偏二氟(polyvinylidenefluoride, PVDF)膜上，在室溫環(huán)境下使用濃度為5%的脫脂奶粉封閉存放2 h，分別向其中加入兔源ANXA2、ERp29一抗(1∶500)和鼠源β-actin一抗(1∶1 500)，并在4 ℃下孵育過夜。用含1%吐溫-20的pH 7.2的磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline, PBS)洗膜5次，將山羊抗兔二抗按照1∶5 000的比例加入其中。最后通過底物化學(xué)發(fā)光(electrochemi-luminescence, ECL)試劑盒完成顯影曝光，并記錄試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.5 乳腺組織免疫組織化學(xué)檢測 取石蠟切片，60 ℃烤片2.5 h。經(jīng)常規(guī)方法脫蠟后按照免疫組化試劑盒的使用說明進(jìn)行。滴加DAB顯色劑后觀測切片顯色反應(yīng)，當(dāng)顯色反應(yīng)合適時(shí)，終止顯色。按照蘇木精二次染色、分化、脫水、透明、封片的順序進(jìn)行后期處理并進(jìn)行鏡檢照相。

2 結(jié) 果

2.1 綿羊乳腺組織中ANXA2與ERp29 mRNA的表達(dá)

應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，用內(nèi)參基因GAPDH對(duì)正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的ANXA2與ERp29 mRNA表達(dá)量進(jìn)行校正，結(jié)果表明：ANXA2與ERp29基因在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中均表達(dá)，且臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中ANXA2與ERp29 mRNA的表達(dá)量均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)(圖1)。

**.正常型 vs 臨床型 P<0.01。下同**.Normal vs Clinical P<0.01.The same as below

圖1 乳腺組織中ANXA2與ERp29 mRNA的相對(duì)表達(dá)量(n=6)Fig.1 The expression of ANXA2 and ERp29 mRNA in mammary gland tissue(n=6)

2.2 綿羊乳腺組織中ANXA2與ERp29蛋白的表達(dá)

運(yùn)用Western blot檢測ANXA2、ERp29蛋白在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的表達(dá)，用內(nèi)參β-actin對(duì)目的蛋白進(jìn)行校正，結(jié)果顯示：ANXA2、ERp29蛋白在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中均有表達(dá)(圖2A)。在臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中，ANXA2蛋白表達(dá)量極顯著低于正常型(P<0.01)，ERp29蛋白表達(dá)量極顯著高于正常型(P<0.01)(圖2B,C)。

圖2 Western bolt檢測綿羊乳腺組織中ANXA2和ERp29蛋白表達(dá)(A)和相對(duì)表達(dá)量(B,C)Fig.2 The expression (A)and relative expression level(B,C)of ANXA2 and ERp29 proteins detected in mammary gland tissue of sheep by Western bolt

2.3 綿羊乳腺組織中ANXA2、ERp29蛋白表達(dá)與定位

免疫組織化學(xué)染色陽性產(chǎn)物呈黃褐色，表示有該蛋白的分布。從免疫組織的化學(xué)染色結(jié)果可以看出，ANXA2和ERp29在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中均有陽性反應(yīng)，且主要定位于乳腺上皮細(xì)胞(圖3)。

3 討 論

膜聯(lián)蛋白超家族(annexins, ANX)是一類受鈣離子依賴、帶負(fù)電荷的膜磷脂結(jié)合的蛋白[11]。其中ANXA2屬于膜聯(lián)蛋白家族一員，廣泛存在于人體內(nèi)多種細(xì)胞內(nèi)[12]，具有多種生物學(xué)功能，如參與離子轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移、合成與結(jié)合等多個(gè)生物學(xué)過程[13-15]。目前有研究發(fā)現(xiàn)，ANXA2與多數(shù)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)[16-17]，且在不同腫瘤病變組織中差異性表達(dá)。如李鑫靜等[18]通過實(shí)時(shí)熒光PCR、Western blot技術(shù)及免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)，ANXA2在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織；于洋等[19]通過免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)ANXA2在口腔鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組；Zhang等[20]通過實(shí)時(shí)熒光PCR、Western blot技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色及ELISA方法也發(fā)現(xiàn)ANXA2在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，Li等[21]通過二維凝膠電泳和質(zhì)譜鑒定技術(shù)發(fā)現(xiàn)ANXA2蛋白在食管鱗細(xì)胞癌中為下調(diào)蛋白。同樣本研究也探討ANXA2在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的表達(dá)，結(jié)果表明，臨床型乳房炎乳腺組織中該基因mRNA的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而該蛋白的表達(dá)卻明顯低于對(duì)照組，暗示ANXA2在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的轉(zhuǎn)錄與蛋白水平上的表達(dá)并不一致，其原因可能是由于基因表達(dá)在轉(zhuǎn)錄和翻譯階段存在時(shí)空間隔，這期間可能在mRNA達(dá)到峰值時(shí)蛋白還在增加，或蛋白達(dá)到峰值mRNA已經(jīng)開始降解。但總體表明ANXA2在不同病變樣本組織中的表達(dá)模式不相同，這可能與研究對(duì)象，樣本量多少、不同治病機(jī)理與基因本身功能相關(guān)。

A1、A2.臨床型乳房炎與正常乳腺組織中ANXA2表達(dá)；B1、B2.臨床型乳房炎與正常乳腺組織中ERp29表達(dá)；C1、C2.臨床型乳房炎與正常乳腺組織的陰性對(duì)照；☆.乳腺上皮細(xì)胞A1,A2.Expression of ANXA2 in mammary gland tissues of normal and clinical mastitis; B1,B2. Expression of ERp29 in mammary gland tissues of normal and clinical mastitis; C1,C2.Negative control of mammary gland tissues of normal and clinical mastitis ; ☆.Mammary epithelial cells

圖3 免疫組織化學(xué)檢測乳腺組織中ANXA2與ERp29蛋白的表達(dá)Fig.3 The expression of ANXA2 and ERp29 proteins in mammary gland tissue by immunohistochemistry

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum, ER)存在于除哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞以外的各種真核細(xì)胞中，其主要功能是蛋白質(zhì)的合成、修飾、加工和新生肽鏈的折疊、組裝與運(yùn)輸，此外還具有合成脂質(zhì)和排毒等功能。ERp29作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的一種蛋白，最初克隆于大鼠肝及牙釉質(zhì)細(xì)胞[22-23]，廣泛表達(dá)于各種組織如甲狀腺、唾液腺、腎上腺、乳腺、前列腺、胰腺和肝等組織，但在心肌和骨骼肌中表達(dá)很少[24]。目前有研究表明，ERp29基因在組織或細(xì)胞中的差異性表達(dá)與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[25]，如桑旭[26]通過免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemistry, IHC)方法檢測ERp29在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該蛋白在胃癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織； Cheretis 等[27]通過免疫組織化學(xué)法也檢測ERp29在104例皮膚基底細(xì)胞癌患者(包括50個(gè)結(jié)節(jié)，29個(gè)浸潤，15個(gè)淺表，7個(gè)硬化，2個(gè)纖維上皮和1個(gè)色素細(xì)胞癌)中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該蛋白在浸潤型癌中的表達(dá)較強(qiáng)，淺表癌中表達(dá)較弱；韓娉怡[28]也檢測ERp29在原發(fā)性肝癌與正常肝組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERp29在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)明顯低于正常組。同樣本研究通過qRT-PCR、Western blot技術(shù)也檢測ERp29在正常與臨床型乳房炎乳腺組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，該基因在臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的mRNA與蛋白表達(dá)均明顯高于正常型。說明ERp29基因在不同病變組織中的表達(dá)具有差異性，暗示該蛋白與多種疾病發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)

可見，ANXA2、ERp29均在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的表達(dá)具有差異性，由此表明二者均參于泌乳動(dòng)物乳房炎的發(fā)生與發(fā)展，但其作用機(jī)制不同，這可能與基因本身的功能相關(guān)。

4 結(jié) 論

ANXA2、ERp29 mRNA與其蛋白在正常與臨床型綿羊乳腺組織中均表達(dá)且表達(dá)趨勢存在差異。其中ANXA2在臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的mRNA表達(dá)明顯高于正常型，而該蛋白表達(dá)卻明顯低于正常型；ERp29 mRNA與蛋白在臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中的表達(dá)均明顯高于正常型；ANXA2和ERp29蛋白在正常與臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中均有陽性反應(yīng)且主要定位于乳腺上皮細(xì)胞。綜上表明，ANXA2與ERp29均參與綿羊乳房炎的發(fā)生與發(fā)展，但二者是否可以作為判斷乳房炎預(yù)后重要依據(jù)，還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

參考文獻(xiàn)(References)：

[1] HALASA T,NIELEN M,DE ROOS A P W,et al.Production loss due to new subclinical mastitis in Dutch dairy cows estimated with a test-day model[J].JDairySci,2009,92(2):599-606.

[2] HAGNESTAM-NIELSEN C,EMANUELSON U,BERGLUND B,et al.Relationship between somatic cell count and milk yield in different stages of lactation[J].JDairySci,2009,92(7):3124-3133.

[3] MA Y,RYAN C,BARBANO D M,et al.Effects of somatic cell count on quality and shelf-life of pasteurized fluid milk[J].JDairySci,2000,83(2):264-274.

[4] SADEGHI-SEFIDMAZGI A,MORADI-SHAHRBABAK M,NEJATI-JAVAREMI A,et al.Estimation of economic values and financial losses associated with clinical mastitis and somatic cell score in Holstein dairy cattle[J].Animal,2011,5(1):33-42.

[5] GERKE V,MOSS S E.Annexins:From structure to function[J].PhysiolRev,2002,82(2):331-371.

[6] CLARK G B,MORGAN R O,FERNANDEZ M P,et al.Evolutionary adaptation of plant annexins has diversified their molecular structures,interactions and functional roles[J].NewPhytol,2012,196(3):695-712.

[7] ROSENBAUM S,KREFT S,ETICH J,et al.Identification of novel binding partners (annexins) for the cell death signal phosphatidylserine and definition of their recognition motif[J].JBiolChem,2011,286(7):5708-5716.

[8] MONASTYRSKAYA K,BABIYCHUK E B,HOSTETTLER A,et al.Annexins as intracellular calcium sensors[J].CellCalcium,2007,41(3):207-219.

[9] MKRTCHIAN S,SANDALOVA T.ERp29,an unusual redox-inactive member of the thioredoxin family[J].AntioxidRedoxSignal,2006,8(3-4):325-337.

[10] 謝作斌,王友群.ERp29——一種新的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白[J].醫(yī)學(xué)綜述,2009,15(3):374-377.

XIE Z B,WANG Y Q.ERp29-a new endoplasmic reticulum protein[J].MedicalRecapitulate,2009,15(3):374-377. (in Chinese)

[11] RESCHER U,GERKE V.Annexins-unique membrane binding proteins with diverse functions[J].JCellSci,2004,117(Pt 13):2631-2639.

[12] CHIANG Y,SCHNEIDERMAN M H,VISHWANATHA J K.Annexin II expression is regulated during mammalian cell cycle[J].CancerRes,1993,53(24):6017-6021.

[13] C,DAIGELER A L,SEIFERT W,et al.Annexin A2 mediates apical trafficking of renal Na+-K+-2Cl-cotransporter[J].JBiolChem,2014,289(14):9983-9997.

[14] MADUREIRA P A,HILL R,MILLER V A,et al.Annexin A2 is a novel cellular redox regulatory protein involved in tumorigenesis[J].Oncotarget,2011,2(12):1075-1093.

[15] LIANG Q L,CHEN G Q,LI Z Y,et al.Function and histopathology of a cell adhesion molecule TSLC1 in cancer[J].CancerInvestig,2011,29(2):107-112.

[16] ZHANG X H,LIU S Q,GUO C M,et al.The association of annexin A2 and cancers[J].ClinTranslOncol,2012,14(9):634-640.

[17] LOKMAN N A,WEEN M P,OEHLER M K,et al.The role of annexin A2 in tumorigenesis and cancer progression[J].CancerMicroenviron,2011,4(2):199-208.

[18] 李鑫靜,林賢東,陳 剛,等.Anxa2基因在胃癌組織中的表達(dá)及意義[J].診斷病理學(xué)雜志,2016,23(10):779-783.

LI X J,LIN X D,CHEN G,et al.Clinicopathological significance of Anxa2 expression in gastric cancer[J].ChineseJournalofDiagnosticPathology,2016,23(10):779-783. (in Chinese)

[19] 于 洋,顧玉州,劉 俊,等.Anxa2,Stat3在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2016,16(17):3249-3252.

YU Y,GU Y Z,LIU J,et al.Expression and significance of Anxa2 and Stat3 protein in oral squamous cell carcinoma tissue[J].ProgressinModernBiomedicine,2016,16(17):3249-3252. (in Chinese)

[20] ZHANG H J,YAO D F,YAO M,et al.Expression characteristics and diagnostic value of annexin A2 in hepatocellular carcinoma[J].WorldJGastroenterol,2012,18(41):5897-5904.

[21] LI X L,ZHENG S T,LIU Q,et al.Under-expression of annexin A2 is associated with Kazakh’s esophageal squamous cell carcinoma[J].MolCarcinog,2015,54(9):779-788.

[22] DEMMER J,ZHOU C M,HUBBARD M J.Molecular cloning of ERp29,a novel and widely expressed resident of the endoplasmic reticulum[J].FEBSLett,1997,402(2-3):145-150.

[23] MKRTCHIAN S,FANG C,HELLMAN U,et al.A stress-inducible rat liver endoplasmic reticulum protein,ERp29[J].FEBSJ,1998,251(1-2):304-313.

[24] SARGSYAN E,BARYSHEV M,BACKLUND M,et al.Genomic organization and promoter characterization of the gene encoding a putative endoplasmic reticulum chaperone,ERp29[J].Gene,2002,285(1-2):127-139.

[25] ZHANG D H,RICHARDSON D R.Endoplasmic reticulum protein 29 (ERp29):An emerging role in cancer[J].IntJBiochemCellBiol,2011,43(1):33-36.

[26] 桑 旭.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶29(ERp29)在胃癌中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義研究[D].蚌埠:蚌埠醫(yī)學(xué)院,2013.

SANG X.Endoplasmic reticulum molecular chaperons29 (ERp29) expression characteirstics and clinical significance of gastric[D].Bengbu:Bengbu Medical College,2013. (in Chinese)

[27] CHERETIS C,DIETRICH F,CHATZISTAMOU I,et al.Expression of ERp29,an endoplasmic reticulum secretion factor in basal-cell carcinoma[J].AmJDermatopathol,2006,28(5):410-412.

[28] 韓娉怡.ERp29與Arp3在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和意義[D].長沙:中南大學(xué),2012.

HAN P Y.The expression of ERp29 and Arp3 in hepatic carcinoma and their significances[D].Changsha:Central South University,2012. (in Chinese)