李 娟，張一唱，崔光紅，馬曉晶，陳科力，黃璐琦,*

(1中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 博士后科研流動(dòng)站 北京 100700 ；2中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心 北京 100700；3湖北中醫(yī)藥大學(xué) 武漢430065)

九香蟲為半翅目蝽科九香蟲亞科昆蟲九香蟲Aspongopuschinensis的干燥體，別名黑兜蟲、瓜黑蝽、臭屁蟲、屁巴蟲等，為中國(guó)特有種.《中國(guó)藥典》(2015年版)記載九香蟲具有理氣止痛，溫中助陽的功效，用于胃寒脹痛，肝胃氣痛，腎虛陽痿，腰膝酸痛.它始載于《本草綱目》：“咸溫?zé)o毒，用于膈脘滯氣，脾腎虧損，壯元陽”.《本草新編》中記載：“蟲中之至佳者，亦興陽之物，以扶衰弱最宜”. 九香蟲的壯陽功效雖屢有記載[1,2]，但未見其壯陽功效的實(shí)驗(yàn)報(bào)道.為此，本文結(jié)合壯陽行為與機(jī)體疲勞密切的相關(guān)性，擬評(píng)價(jià)九香蟲提取物的抗疲勞和補(bǔ)腎壯陽作用.

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑和儀器

氫化可的松(成都艾科達(dá)化學(xué)試劑, 純度98%，批號(hào)201608122)，大株紅景天膠囊(江蘇康緣藥業(yè)，批號(hào)150314)，金匱腎氣丸(北京同仁堂，批號(hào)15032476)，補(bǔ)佳樂(戊酸雌二醇，拜耳醫(yī)藥，批號(hào)283A)，生理鹽水(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)，批號(hào)1603300901)，乳酸測(cè)試盒(南京建成，批號(hào)20160603)，尿素氮試劑盒(南京建成，批號(hào)20160923)，超純水(Water purifier實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)).

電子分析天平(XB220A，瑞士Precisa)，冷凍離心機(jī)(Centrifuge 5804 R，德國(guó)Eppendorf)，酶標(biāo)儀(Synergy 2，美國(guó)Bio-Tek).

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，6～8周齡，體重18～22 g，購自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心， SPF級(jí)，行政許可證編號(hào)：SYXK(鄂)2012-0068，生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK(鄂)2015-0018，合格證編號(hào)：42000400004612，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員上崗證號(hào)：W20150346，W20170310.實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d.

1.3 藥材樣品

昆蟲九香蟲購自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)陳科力教授鑒定為正品.將九香蟲打成粗粉，取6倍量石油醚回流提取2次，每次30 min，傾去石油醚，藥渣用8倍量水回流提取2次，合并濾液，濃縮至2 g·mL-1備用.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 血乳酸測(cè)定

參照衛(wèi)生部《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》(2003 年版)中《抗疲勞作用檢驗(yàn)方法》進(jìn)行.昆明種雄性小鼠，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為九香蟲提取物低劑量組(1.4 g·kg-1，按原藥材計(jì))、高劑量組(7.0 g·kg-1)、陽性藥組(大株紅景天膠囊，590 mg·kg-1)、空白對(duì)照組(生理鹽水).給藥時(shí)間為15 d，末次給藥30 min后采血20 μL，不負(fù)重在30 ℃的水中游泳10 min后和休息20 min后各采血20 μL.用毛細(xì)管從眼眶內(nèi)眥采血，上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各采血20 μL，EDTA抗凝，離心取上清液，按照乳酸測(cè)定試劑盒檢測(cè)乳酸含量.血乳酸曲線下面積計(jì)算方法：血乳酸曲線下面積= 5× (游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)

2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

劑量分組和給藥時(shí)間同2.1(血乳酸測(cè)定).末次給藥30 min后，按小鼠體重5%負(fù)重鐵絲，將其放入水溫(25±1) ℃的水槽中使其游泳，開始計(jì)時(shí)，直至小鼠沉入水底8 s不再浮起，為力竭游泳結(jié)束，記錄游泳時(shí)間.

2.3 血清尿素測(cè)定

劑量分組及給藥時(shí)間同2.1.末次給藥30 min后，在30 ℃的水中不負(fù)重游泳90 min，休息60 min后采血.采血約0.5 mL置4℃冰箱約3 h，血凝固后離心取血清，用尿素檢測(cè)試劑盒檢測(cè)尿素含量[3].

2.4 對(duì)腎陽虛小鼠交配能力的影響

雄性小鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組，模型組，陽性對(duì)照組(金匱腎氣丸，1.4 g·kg-1)，九香蟲提取物低、高劑量組(1.4,7.0 g·kg-1).正常對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水20 mL·kg-1，其余各組分別灌胃相應(yīng)藥物20 mL·kg-1，每日1次，連續(xù)30 d，從給藥第4 d開始，除正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水5 mL·kg-1外，其余各組均注射氫化可的松25 mg·kg-1，每日1次，連續(xù)7 d，造模同時(shí)連續(xù)給藥.雌性小鼠于交配前48 h和3 d按照20 mL·kg-1灌胃補(bǔ)佳樂混懸液(戊酸雌二醇，0.4 mg·kg-1)，使之發(fā)情時(shí)間同步于交配時(shí)間.給藥后第30 d給藥30 min后觀察30 min內(nèi)交配能力實(shí)驗(yàn)(捕捉潛伏期、捕捉率、交配潛伏期、交配率等).脫頸椎處死小鼠，迅速分離胸腺、脾、腎上腺、睪丸、附睪，剖取精囊腺、包皮腺稱濕重，計(jì)算臟器系數(shù)[4-6].

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 血乳酸測(cè)定

九香蟲提取物對(duì)小鼠乳酸含量的影響結(jié)果見表1.由表1可知：九香蟲提取物低、高劑量組游泳前、游泳后10 min、休息后20 min血乳酸含量均稍低于空白對(duì)照組，各劑量組小鼠游泳前后3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血乳酸曲線下面積均下降，其中九香蟲提取物高劑量組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05).

表1 九香蟲提取物對(duì)小鼠乳酸含量的影響 Tab.1 Effect of extract from Aspongopus chinensis on lactic acid content of mice

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05

3.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

九香蟲提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響結(jié)果見圖1.由圖1可知：陽性對(duì)照組、九香蟲提取物低、高劑量組的力竭游泳時(shí)間明顯高于空白對(duì)照組，均具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)；九香蟲提取物高劑量組對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響最為顯著(P<0.01).

與空白組比較，*P<0.05，** P<0.01圖1 九香蟲提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響Fig.1 Effect of extract from Aspongopus chinensis on the loaded swimming time of mice

3.3 血清尿素含量測(cè)定

九香蟲提取物對(duì)小鼠尿素含量的影響結(jié)果見圖2.

與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01圖2 九香蟲提取物對(duì)小鼠尿素含量的影響Fig.2 Effect of extract from Aspongopus chinensis on the urea content of mice

由圖2可知：陽性對(duì)照組、九香蟲提取物低、高劑量組的尿素含量均明顯低于空白對(duì)照組，具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01).

3.4 對(duì)腎陽虛小鼠交配能力的影響

3.4.1 臟器系數(shù)

九香蟲提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響結(jié)果見表2和表3.

表2 九香蟲提取物對(duì)小鼠胸腺、脾臟和腎上腺臟器系數(shù)的影響Tab.2 Effect of extract from Aspongopus chinensis on mice organ coefficient of thymus, spleen, and adrenal gland

注：與正常組比較,△P<0.05，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

表3 九香蟲提取物對(duì)小鼠性腺臟器系數(shù)的影響

注：與正常組比較,△P<0.05，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

由表2，3可知：模型組注射氫化可的松造成小鼠腎上腺、胸腺、脾臟、睪丸和附性器官(精囊腺和包皮腺除附睪)等重量較正常組顯著降低(P<0.05)，說明腎陽虛造模成功.灌胃給藥九香蟲提取物30 d后，相對(duì)于模型組而言，九香蟲提取物高、低劑量組均可不同程度相對(duì)增加小鼠免疫器官、睪丸和附性器官的重量(P<0.05或P<0.01).

3.4.2 交配能力

九香蟲提取物對(duì)小鼠交配能力的影響結(jié)果見表4.由表4可知：注射氫化可的松造成小鼠腎陽虛模型，模型組交配潛伏期和交配次數(shù)較正常組均有顯著性差異(P<0.05)，說明造模成功.相對(duì)于模型組而言，給藥后九香蟲提取物高劑量組小鼠的撲捉潛伏期和撲捉次數(shù)(以30 min計(jì))、交配潛伏期和交配次數(shù)均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01).由撲捉率和交配率可見，九香蟲提取物高劑量組能明顯提高撲捉和交配百分?jǐn)?shù)，而低劑量組對(duì)小鼠交配能力的影響不顯著.

表4 九香蟲提取物對(duì)小鼠交配能力的影響

注：與正常組比較,△P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

4 討論

九香蟲含有脂肪、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、尿嘧啶、黃嘌呤、以及多種微量元素等[2]，臭氣類成分主要為醛酮類，十三烷等低極性成分[7,8].程永現(xiàn)教授從九香蟲中發(fā)現(xiàn)了結(jié)構(gòu)新穎的多巴胺三聚體(±)-Aspongamide A，該化合物可防治慢性腎病[9]；蟲類藥物中微量元素鋅、錳、鈣等可為中藥補(bǔ)腎的物質(zhì)基礎(chǔ).

本文結(jié)合中藥傳統(tǒng)水煎煮的用藥方法，先用石油醚除去九香蟲中極性較低的油脂類成分，再用水提取得到九香蟲水提取物.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：九香蟲提取物高劑量組能顯著降低血清乳酸含量，延長(zhǎng)力竭游泳時(shí)間，降低血清尿素含量，具有明顯的抗疲勞作用，某種程度上較陽性藥金匱腎氣丸效果更佳；高劑量組還能顯著增加氫化可的松導(dǎo)致的腎陽虛小鼠的免疫器官、睪丸和附性器官的臟器系數(shù)，提高交配能力，具有明顯的補(bǔ)腎壯陽作用，并且功效相對(duì)強(qiáng)于金匱腎氣丸.同時(shí)，九香蟲提取物低劑量組也有一定的抗疲勞作用.以上結(jié)果說明：九香蟲水提取具有顯著的抗疲勞和補(bǔ)腎壯陽作用，并呈現(xiàn)一定劑量相關(guān)性，本研究為九香蟲的藥用和功能食品開發(fā)提供了研究基礎(chǔ).

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 郭玉紅，張慶林. 藥食昆蟲九香蟲的生物學(xué)及開發(fā)利用研究進(jìn)展[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26(3)：692-693.

[2] 宋政偉，尹衛(wèi)平，劉 普，等. 常見蝽類昆蟲的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào), 2011，48(3):753-756.

[3] 林新麗，方祝元，朱萱萱，等.復(fù)方一把針顆粒對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠早期腎損傷的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，35(2)：125-129.

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