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        胃萎清對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜超微結(jié)構(gòu)的影響

        2018-07-03 12:02:12莊昆海李海文劉鳳斌
        新中醫(yī) 2018年7期
        關(guān)鍵詞:樣變胞漿超微結(jié)構(gòu)

        莊昆海,李海文,劉鳳斌

        1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,廣東 廣州 510405;2.深圳市中醫(yī)院,廣東 深圳 518000

        慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)是一種以胃黏膜固有腺體數(shù)量減少或消失為主要病理特點(diǎn)的消化系統(tǒng)疾病[1]。CAG伴有中、重度腸上皮化生和(或)異型增生是胃癌前狀態(tài),在胃黏膜癌前疾病中占較大比例[2]。

        CAG的病理組織學(xué)表現(xiàn)是黏膜固有腺體萎縮和常伴有腸上皮化生,其超微結(jié)構(gòu)具體表現(xiàn)在主細(xì)胞、壁細(xì)胞、其內(nèi)的一些細(xì)胞器損傷、上皮細(xì)胞間隙增寬和胞質(zhì)內(nèi)活動(dòng)性炎細(xì)胞浸潤(rùn),且以主細(xì)胞和壁細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)損傷最具特征性。壁細(xì)胞及主細(xì)胞是胃黏膜的主要分泌細(xì)胞,壁細(xì)胞分泌胃酸,細(xì)胞漿中分布有大量線粒體結(jié)構(gòu);主細(xì)胞分泌胃蛋白酶,細(xì)胞漿中排列有大量的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),其內(nèi)含有分泌小泡。臨床上,患者出現(xiàn)上腹飽脹感、胃納差等消化功能不佳的情況,可能與胃酸及胃蛋白酶的分泌減少有關(guān)。經(jīng)過(guò)前期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),以健脾清熱活血法為治法的代表方胃萎清在一定程度上可以改善患者的胃萎縮、慢性炎癥等癥狀,且能改善患者的精神狀態(tài)以及上腹部不適、消化不良,其機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。本研究以N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)合饑飽失常法建立脾胃虛弱、熱毒血瘀的CAG大鼠模型,并通過(guò)電鏡觀察以探討胃萎清在超微結(jié)構(gòu)方面對(duì)CAG大鼠的影響。

        1 材料和方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用70~80天齡SPF級(jí)SD雄性大鼠94只,體質(zhì)量170~200 g,由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(粵)2013-0002。動(dòng)物飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,室溫保持在(22±2)℃,濕度(55±5)%,保持晝夜節(jié)律各12 h,自由飲食。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 胃萎清顆粒劑(由黃芪、白術(shù)、半枝蓮、莪術(shù)、五指毛桃、枳殼等組成),由廣東省一方制藥有限公司提供,并進(jìn)行質(zhì)量控制(批號(hào):J1603001),提供質(zhì)量合格證明。葉酸片由江蘇亞邦愛(ài)普森藥業(yè)有限公司提供(批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H32023288,產(chǎn)品批號(hào):1507026),規(guī)格為5mg×100片/瓶。

        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 MNNG由日本東京株氏會(huì)社提供,使用時(shí)稀釋為180μg/mL的MNNG飲用液,裝入500mL的避光飲水瓶中自由飲用,每2天更換1次。

        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 JEM1230型透射電鏡(日本JEOL公司)。切片機(jī)Leica UC 7(德國(guó)萊卡公司),厚度60 nm。

        1.5 動(dòng)物分組及造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為對(duì)照組和造模組。其中對(duì)照組14只,造模組80只。該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組一直給予正常飲食、自由飲水,直至整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。造模組則予濃度為180μg/mL的MNNG飲用液自由飲用,并在此基礎(chǔ)上采用經(jīng)典的饑飽失常法復(fù)制脾虛證(即喂食1天,而后禁食1天,如此循環(huán)),連續(xù)造模直至第14周,隨機(jī)抽取造模組中的兩只CAG大鼠,進(jìn)行胃黏膜病理形態(tài)組織學(xué)檢查。

        確定造模成功后開始給藥,將造模組隨機(jī)分為模型組,胃萎清高劑量組,胃萎清中劑量組,胃萎清低劑量組及葉酸組。其中模型組14只,胃萎清高、中、低劑量組及葉酸組均為16只。對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水,胃萎清高、中、低劑量組:所使用的實(shí)驗(yàn)藥物為胃萎清顆粒,第15周開始灌胃,按照大鼠與人體表面積等效換算,大鼠給藥量為7 776mg/kg,此為1倍劑量。因此,測(cè)算后胃萎清高、中、低劑量組給藥濃度(生藥量)分別為15.6 g/kg、7.8 g/kg、3.9 g/kg。葉酸組第15周開始按1.46mg/(kg·d)予葉酸灌胃。灌胃容積為10mL/(kg·d),連續(xù)灌胃10周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,每2周給各組大鼠測(cè)量1次體質(zhì)量,以觀察體質(zhì)量變化情況。

        1.6 標(biāo)本的采集及制備 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后所有大鼠禁食不禁水24 h,用10%的水合氯酸按3mL/kg的劑量腹腔注射麻醉。取全胃,沿大彎剪開胃壁,4℃生理鹽水清洗后,取胃竇部組織,10%中性福爾馬林固定,常規(guī)石蠟切片,用于相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè),其余部分胃黏膜層(剔除肌肉層)組織立即置于-80℃低溫冰箱中保存。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠的一般情況 見(jiàn)圖1。與對(duì)照組比較,模型組大鼠胃黏膜出現(xiàn)萎縮,且腺體排列紊亂,腺體減少。胃黏膜固有腺體萎縮伴腸上皮化生,提示造模成功。

        2.2 各組大鼠電鏡觀察結(jié)果 見(jiàn)圖2。對(duì)照組大鼠胃黏膜壁細(xì)胞核仁規(guī)則,染色質(zhì)正常,胞漿可見(jiàn)大量的管泡結(jié)構(gòu),散布于細(xì)胞質(zhì)中,線粒體呈典型的短棒狀,主細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá),排列整齊,細(xì)胞核核仁結(jié)構(gòu)均一,核內(nèi)染色質(zhì)正常。與對(duì)照組比較,模型組大鼠胃黏膜主細(xì)胞出現(xiàn)核固縮,染色質(zhì)濃縮,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)僅有少量殘存,胞漿中出現(xiàn)大量空泡樣變,壁細(xì)胞出現(xiàn)核固縮,染色質(zhì)濃縮,線粒體嵴數(shù)量減少,部分可見(jiàn)空泡化。與模型組比較,胃萎清高劑量組大鼠胃黏膜主細(xì)胞核仁結(jié)構(gòu)尚均一,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本整齊,壁細(xì)胞核質(zhì)比正常,胞漿見(jiàn)大量管泡結(jié)構(gòu),線粒體形態(tài)尚規(guī)則,線粒體嵴較模型組增多。胃萎清中劑量組大鼠胃黏膜主細(xì)胞細(xì)胞核間隙正常,核型不規(guī)則,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,胞漿見(jiàn)空泡樣變,壁細(xì)胞細(xì)胞核基本規(guī)則,部分線粒體及胞漿呈現(xiàn)空泡樣變。胃萎清低劑量組大鼠胃黏膜主細(xì)胞細(xì)胞核核仁形態(tài)不規(guī)則,胞漿中出現(xiàn)大量空泡樣變,僅殘存少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),壁細(xì)胞細(xì)胞核呈異型改變,線粒體數(shù)量減少,胞漿出現(xiàn)空泡樣變。葉酸組大鼠胃黏膜主細(xì)胞細(xì)胞核染色質(zhì)較正常,胞漿出現(xiàn)大量空泡樣變,壁細(xì)胞染色質(zhì)固縮,線粒體嵴數(shù)量較模型組多,胞漿出現(xiàn)空泡樣變。

        圖1 對(duì)照組與模型組大鼠胃黏膜病理對(duì)照?qǐng)D(×200)

        圖2 各組大鼠胃黏膜壁細(xì)胞及主細(xì)胞電鏡觀察 (×10 000)

        3 討論

        目前CAG被認(rèn)為是一種癌前疾病及難治性消化系統(tǒng)疾病,受到消化學(xué)界的重視,也是研究熱點(diǎn)之一。在古代文獻(xiàn)中并無(wú)直接與CAG相對(duì)應(yīng)的中醫(yī)病名。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,萎縮性胃炎屬中醫(yī)胃痛、痞滿、胃痞、虛痞等病的范疇[3],臨床研究表明,本病是以脾胃虛弱為本,肝胃不和、濕熱郁結(jié)及氣滯血瘀等為標(biāo)的疾病[4~6]。由于長(zhǎng)期炎癥刺激而致胃黏膜萎縮、腸上皮化生和不典型增生等改變,與中醫(yī)理論中“濕熱蘊(yùn)結(jié)”、“氣滯血瘀”病理表現(xiàn)相一致。臨床研究顯示,治療本病多以健脾益氣治其本,清熱解毒,活血化瘀治其標(biāo),健脾清熱活血法貫穿疾病始終[7~9]。

        本研究所使用的治療藥物為健脾清熱活血法代表方藥胃萎清,它是由我院的院內(nèi)制劑胃炎消發(fā)展而來(lái),有一定的研究基礎(chǔ)。胃炎消是廣州中醫(yī)藥大學(xué)的國(guó)家“八五”攻關(guān)課題“中醫(yī)藥治療胃癌癌前病變的臨床與實(shí)驗(yàn)研究”科研用藥,通過(guò)數(shù)十年的臨床與實(shí)驗(yàn)研究,表明胃炎消具有較好預(yù)防和治療胃癌癌前病變的作用,臨床治療CAG效果較好[5]。本課題組在劉鳳斌教授的帶領(lǐng)下,在胃炎消的研究基礎(chǔ)上,繼承歷代醫(yī)家學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn),經(jīng)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐,并結(jié)合CAG臨床特點(diǎn),從整體出發(fā),不僅重視CAG病理改善,亦強(qiáng)調(diào)患者臨床癥狀的改善,組成有“健脾化瘀解毒”功效的方劑胃萎清。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床觀察,其臨床療效顯著。該方由黃芪、白術(shù)、半枝蓮、莪術(shù)、五指毛桃、枳殼組成,通中有補(bǔ),補(bǔ)而不滯。全方諸藥合用,共奏健脾清熱活血之效,也契合CAG“脾虛熱毒血瘀”的病機(jī)。

        本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用MNNG溶液自由飲用合饑飽失常法制造大鼠CAG模型,屬雙因素造模,其一是饑飽失常法,即喂食1天,而后禁食1天,如此循環(huán),可造成脾虛證,符合CAG的脾胃虛弱本質(zhì);其二是適當(dāng)濃度的MNNG飲用法,MNNG屬于“毒物”范疇,中醫(yī)屬性可歸屬于熱毒之邪,熱毒之邪流連,久而形成熱毒血瘀之象,炎癥刺激而致胃黏膜萎縮、腸上皮化生和不典型增生等改變,與中醫(yī)理論中“濕熱蘊(yùn)結(jié)”、“氣滯血瘀”病理表現(xiàn)相一致。因而,本造模方法符合中醫(yī)理論,屬“脾胃虛弱、熱毒血瘀”的病證結(jié)合模型,與本研究設(shè)想的健脾清熱活血治法相一致,與實(shí)驗(yàn)用藥胃萎清所針對(duì)的病因病機(jī)一致。

        本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀察CAG大鼠胃黏膜病理組織學(xué)改變以及超微結(jié)構(gòu)的變化,初步探討健脾清熱活血中藥對(duì)CAG的作用機(jī)制。本研究對(duì)壁細(xì)胞和主細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。結(jié)果提示胃萎清能改善CAG大鼠胃黏膜腺上皮主細(xì)胞和壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),其中胃萎清高劑量組效果最明顯?;谥骷?xì)胞和壁細(xì)胞的主要功能,我們認(rèn)為胃萎清改善CAG患者臨床癥狀的機(jī)制之一是通過(guò)改善主細(xì)胞和壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)進(jìn)而改善其分泌功能。

        綜上所述,胃萎清能改善胃黏膜腺上皮主細(xì)胞、壁細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)及大鼠胃黏膜病理組織,從而影響胃酸及胃蛋白酶的分泌,起到一定的治療作用,這為進(jìn)一步系統(tǒng)研究胃萎清奠定基礎(chǔ)。

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