凡瞿明，杜 琴，盧小嵐，王 強(qiáng)，汪光蓉，王東生，蔡艷娟，鄧仁兵，劉 萍，張國元

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，四川南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心，四川南充 637000；4.博奧賽斯天津生物科技有限公司，天津 300300)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是以全身性免疫性炎癥為表現(xiàn)的自身免疫性疾病，患者常有不同程度血脂異常[1]。簇分化抗原36(cluster of differentiation，CD36)亦稱清道夫受體，是多種組織細(xì)胞上的跨膜糖蛋白，血液中主要表達(dá)于單核細(xì)胞及血小板。而單核巨噬細(xì)胞上的CD36是吞噬攝取氧化修飾低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，oxLDL)的主要受體[2]，是促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的重要因素。早期有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)SLE患者血清可顯著增加體外培養(yǎng)的THP-1單核細(xì)胞株CD36的表達(dá)水平[3]，提示CD36可能與SLE脂代謝異常及動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。而患者體內(nèi)是否也存類似變化鮮有研究，本研究擬通過SLE患者外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)強(qiáng)度與其血脂濃度水平變化的相關(guān)性分析，探明SLE患者外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)強(qiáng)弱與血清脂蛋白的關(guān)系及與體內(nèi)脂代謝的內(nèi)在聯(lián)系。

1材料與方法

1.1 研究對(duì)象 SLE患者組病例均來自本院風(fēng)濕科、皮膚科、腎內(nèi)科等就診自愿患者，符合美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR)2009年修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)并排除高血壓、糖尿病、甲狀腺功能減退、肝膽疾病等可引起脂代謝紊亂的其它疾病。隨機(jī)選取病例30例，其中男性3例，女性27例，平均年齡35.7歲，平均病程25.4個(gè)月。表觀健康對(duì)照組隨機(jī)抽取本院健康管理中心表觀健康體檢自愿者31例，其中男性6例，女性25例，平均年齡34.28歲。本研究組均履行研究對(duì)象知情同意義務(wù)，所采集資料不涉及個(gè)人隱私，標(biāo)本僅限本研究使用，遵守本單位倫理規(guī)范。

1.2 試劑和儀器 CD36檢測(cè)所用儀器為美國BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細(xì)胞分析儀及CELLQUEST分析軟件，采用FITC標(biāo)記鼠抗人CD36單克隆抗體(CD36-FITC)，購自BECKMAN COULTER，克隆號(hào)：FA6.152，產(chǎn)品號(hào)：IM0766U；標(biāo)記PE的鼠抗人CD14單克隆抗體(CD14-PE)，購自BD公司，克隆號(hào)：MФP9，產(chǎn)品號(hào)：347497；配套破膜劑。血脂檢測(cè)：三酰甘油(triglyceride，TG)與總膽固醇(cholesterol，TC)檢測(cè)采用酶偶聯(lián)法，高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDLC)檢測(cè)采用直接法，低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDLC)檢測(cè)采用選擇性清除法，極低密度脂蛋白膽固醇(very low density lipoprotein cholesterol，VLDLC)采用計(jì)算法，載脂蛋白A1(apolipoprotein A1，apoA1)及載脂蛋白B100(apolipoprotein B100，apoB100)使用免疫比濁法，所用儀器為日立HITACHI 7600，試劑為該機(jī)型配套試劑。

1.3 方法 采集研究對(duì)象靜脈血約4 ml，分裝一份1.5 ml經(jīng)EDTA-K3抗凝，另一份2.5 ml注入無添加劑試管中制備血清備用。外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)強(qiáng)度檢測(cè)，取CD36-FITC和CD14-PE試劑各20 μl于流式細(xì)胞專用分析試管底部，再取EDTA-K3抗凝全血50 μl注于前述試劑液滴中勿附著于試管壁，微量振蕩器輕振數(shù)秒混勻，室溫避光靜置15 min。加1 ml經(jīng)1∶10預(yù)稀釋的破膜劑振蕩混勻室溫靜置5 min后離心去上清液，用PBS液1 ml洗滌兩次，每次均離心去上清液。加500 μl PBS制成細(xì)胞混懸液，流式細(xì)胞儀分析單核細(xì)胞CD36熒光強(qiáng)度。具體方法：以F1熒光通道側(cè)向散射光(SSC)、前向散射光(FSC)特性GATE出有核細(xì)胞群，通過有核細(xì)胞群CD14與CD36雙陽性細(xì)胞群選定單核細(xì)胞群，GATE出該群細(xì)胞分析其CD36表達(dá)熒光強(qiáng)度以平均熒光強(qiáng)度指數(shù)(MFI)記錄結(jié)果。血脂蛋白濃度檢測(cè)均在儀器及質(zhì)控良好的情況下自動(dòng)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用STATA14.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用中位數(shù)±四分位數(shù)(M±Q)表示。兩組間比較用Wilcoxon ranksum秩和檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 SLE患者組與表觀健康對(duì)照組外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)強(qiáng)度與血清脂蛋白水平比較 見表1。

表1 SLE組與對(duì)照組外周血單核細(xì)胞CD36強(qiáng)度與脂蛋白水平比較(M±Q)

SLE患者外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)低于對(duì)照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(|Z|=4.198，P<0.01)。血脂變化：SLE患者血清TG，VLDLC，apoB100較對(duì)照組高(|Z|=4.603，3.620，2.28，均P<0.01)，HDLC(|Z|=3.571，P<0.05)和apoA1(|Z|=3.918，P<0.05)低于對(duì)照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TC，LDLC組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(|Z|=0.159，0.476，均P>0.05)。

2.2 SLE組單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)強(qiáng)度與血脂水平的相關(guān)性 見圖1。 SLE組單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)熒光強(qiáng)度與血脂蛋白指標(biāo)TG，LDLC，VLDLC，HDLC，apoA1，apoB100經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，均P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 SLE組單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)強(qiáng)度與血脂水平的相關(guān)性分析

3討論SLE患者體內(nèi)脂代謝異常增加患者發(fā)生心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，調(diào)控患者血脂水平是SLE治療過程中預(yù)防繼發(fā)心腦血管病變的重要手段，探明SLE患者血脂異常的特點(diǎn)及其潛在的影響因素，將為防控SLE患者發(fā)生心腦血管事件提供理論基礎(chǔ)。Yuan等[4]學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)SLE患者較對(duì)照組TG顯著增高，而HDLC，apoA1顯著降低，得出結(jié)果與本研究相似，本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)SLE患者組較表觀健康對(duì)照組。VLDLC和apoB100增高，而TC和LDLC組間無顯著性差異。從本研究數(shù)據(jù)可見，SLE患者血清中有害脂蛋白TG，VLDLC和apoB100增高，而有利于脂肪代謝的脂蛋白HDLC，apoA1水平則降低，這一不利于SLE患者脂肪代謝表達(dá)模式可能是發(fā)引患者心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)升高的重要因素之一。

Sajjad等[5]在狼瘡腎炎(LN)患者中發(fā)現(xiàn)，近50%患者伴有高膽固醇血癥和高三酰甘油血癥，近三分之一的LN患者具有高水平的低密度脂蛋白，并且脂蛋白水平與蛋白尿的程度有顯著相關(guān)性，SLE患者脂蛋白異?？赡苓€伴隨腎臟功能減退。Skaggs等[6]研究認(rèn)為SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化與糖皮質(zhì)激素治療累積劑量和病程有關(guān)，累積劑量越高、病程越長發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)也就越高。Sinicato等[7]學(xué)者綜述前人研究認(rèn)為SLE患者血脂異常是糖皮質(zhì)激素治療過程中，因糖皮質(zhì)激素對(duì)胰島素產(chǎn)生抵抗而導(dǎo)致的血脂異常，即血脂代謝異常是糖皮質(zhì)激素治療的臨床副作用。而Pego-Reigosa等[8]通過大樣本不同人種研究發(fā)現(xiàn)使用糖皮質(zhì)激素保守治療SLE有助于預(yù)防患者血脂異常等并發(fā)癥的發(fā)生。由此可見目前SLE患者發(fā)生血脂異常的機(jī)制尚不完全明確，誘因尚存爭(zhēng)議，雖然糖皮質(zhì)激素與SLE患者脂代謝密切相關(guān)得到眾多學(xué)者認(rèn)可，但其作用是誘導(dǎo)或是預(yù)防血脂異常，還有待更多臨床研究證實(shí)。本研究因未就糖皮質(zhì)激素治療情況分組探討，無法得出SLE患者血脂異常與臨床糖皮質(zhì)激素使用有關(guān)的研究證據(jù)。但研究數(shù)據(jù)表明SLE血脂成份的改變朝不利于患者體內(nèi)脂代謝方向發(fā)展，血脂異常應(yīng)是SLE患者繼發(fā)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。Gaal等[9]研究認(rèn)為全身炎癥引起SLE患者體內(nèi)脂蛋白結(jié)構(gòu)和功能屬性改變，致使SLE患者脂蛋白在體內(nèi)和體外均具有較高的氧化能力，導(dǎo)致抗動(dòng)脈粥樣硬化能力降低，加速了SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化過程中oxLDL是主要風(fēng)險(xiǎn)脂蛋白之一，其CD36是oxLDL在單核細(xì)胞表面的主要受體，本研究數(shù)據(jù)表明SLE患者單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)降低，其清運(yùn)oxLDL能力將受影響。

Kato等[10]學(xué)者從基因?qū)W和生物學(xué)方面研究發(fā)現(xiàn)，單核細(xì)胞清道夫受體CD36的表達(dá)與磷脂綜合征和SLE患者血栓形成有關(guān)，Silverstein等[11]研究認(rèn)為巨噬細(xì)胞CD36是通過結(jié)合oxLDL或細(xì)胞膜微粒啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化形成。Boyer等[12]認(rèn)為在慢性炎癥疾病中，腫瘤壞死因子α(tumornecrosis factor alpha，TNF-α)通過激活過氧化物酶增殖物活化受體，從而下調(diào)單核細(xì)胞膜CD36及CD36 mRNA的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血單核細(xì)胞表面CD36相較于表觀健康人群呈低表達(dá)，與Febbraio等[13]小鼠動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，體內(nèi)低水平的CD36可能與SLE長期慢性炎癥性反應(yīng)有關(guān)。亦有研究從動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)理證實(shí)，單核細(xì)胞CD36在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過程中參與泡沫細(xì)胞的形成[14]，是心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素[15]。SLE患者心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增高可能與單核細(xì)胞CD36低表達(dá)密切相關(guān)，是SLE患者易發(fā)心血管意外的因素之一。Febbraio等[13，16]通過動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)，敲除小鼠CD36基因，會(huì)致使小鼠模型血漿膽固醇、三酰甘油和脂肪酸水平顯著升高，因而CD36在體內(nèi)脂肪代謝、炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成中扮演了重要調(diào)節(jié)作用。但本研究數(shù)據(jù)顯示SLE患者外周血單核細(xì)胞CD36水平與血清脂蛋白濃度均無相關(guān)性，外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)強(qiáng)度可能并非造成SLE患者血脂代謝異常的唯一因素，SLE患者血脂紊亂的機(jī)理應(yīng)更加復(fù)雜多樣，但這并不影響外周血單核細(xì)胞CD36作為SLE患者心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)判的獨(dú)立生物標(biāo)志。

綜上所述，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單核細(xì)胞CD36表達(dá)較表觀健康人群降低，單核細(xì)胞CD36表達(dá)水平與血清脂蛋白一樣可作為SLE患者心血管疾病的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志。但其是否是影響SLE患者血脂代謝因素，本研究尚無法提供有效證據(jù)，有待擴(kuò)大研究規(guī)模，尋求更多實(shí)證。

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