苗玉發(fā)，張河戰(zhàn)(中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100176)

血糖(blood glucose，GLU)、膽固醇(cholesterol，CHO)、三酰甘油(triglyceride，TG)以及電解質(zhì)鉀(potassium，K+)、鈉 (sodium，Na+) 、氯(chlorine，Cl-)等指標(biāo)除用于臨床人體疾病診斷外，還普遍用于評(píng)估藥物在動(dòng)物體內(nèi)的毒性[1，2]。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)這些指標(biāo)的準(zhǔn)確性直接影響藥物的安全性評(píng)價(jià)結(jié)果，從而影響能否進(jìn)一步開展該藥物的臨床人體研究。目前，開展這6項(xiàng)生化檢測(cè)的大多數(shù)食品藥品檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室未參加過相應(yīng)的能力驗(yàn)證活動(dòng)，其檢測(cè)能力不得而知，本研究的目的就是評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)這6項(xiàng)指標(biāo)的準(zhǔn)確性和可比性，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)能力缺陷，促進(jìn)檢驗(yàn)?zāi)芰μ岣摺?/p>

能力驗(yàn)證(proficiency testing，PT)是按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評(píng)價(jià)參加實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，具體過程包括研究方案制定、樣品制備、樣品均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)、分發(fā)樣品并回收數(shù)據(jù)、結(jié)果評(píng)價(jià)等[3～5]。本文總結(jié)了本次能力驗(yàn)證研究的相關(guān)內(nèi)容，并對(duì)不滿意結(jié)果進(jìn)行了分析，為實(shí)驗(yàn)室采取糾正措施，促進(jìn)質(zhì)量改善，以及監(jiān)管部門評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1 研究對(duì)象 本研究對(duì)象為43家食品藥品檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室。向43家實(shí)驗(yàn)室發(fā)送了能力驗(yàn)證樣品，回報(bào)GLU，CHO，TG，K+，Na+和Cl-結(jié)果的分別有42，42，43，33，33和33家。43家實(shí)驗(yàn)室分布于18個(gè)省、自治區(qū)或直轄市。

能力驗(yàn)證樣品為市售的低、高2個(gè)水平的血清凍干粉。使用時(shí)每瓶加入5 ml去離子水，室溫放置30 min，混勻配制成上機(jī)樣品。

1.2 試劑和儀器 HITACHI 7180型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)；HB-RO/60 制水機(jī)(杭州惠邦凈水設(shè)備有限公司)；P1000 Gilson移液槍(美國(guó)吉爾森公司)；GLU，CHO，TG試劑和校準(zhǔn)品以及電解質(zhì)試劑和校準(zhǔn)品，均購(gòu)自日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備及運(yùn)輸方法：能力驗(yàn)證樣品為血清凍干粉，5 ml/瓶，無需分裝，對(duì)低、高水平樣品進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)，且檢驗(yàn)結(jié)果符合要求后，按低、高、低、高、高設(shè)置成1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)和5號(hào)5個(gè)樣品，直接粘貼標(biāo)簽制備成能力驗(yàn)證樣品，4℃冷藏保存。運(yùn)輸時(shí)樣品瓶外包裹海綿墊防止擠壓，包裹錫箔紙避光，然后放入塑料泡沫盒中，內(nèi)置冰袋冷藏。

1.3.2 均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)方法：能力驗(yàn)證樣品標(biāo)記分發(fā)之前，根據(jù)CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》，對(duì)低、高2個(gè)水平能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行檢驗(yàn)[6]。均勻性檢驗(yàn)具體實(shí)施方法是從低、高水平樣品中按照隨機(jī)化原則分別隨機(jī)抽取10個(gè)樣品，配制成溶液后，每個(gè)樣品再分成2份樣品，進(jìn)行20次獨(dú)立平行測(cè)定，采用單因素方差分析法(F檢驗(yàn))對(duì)樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果的F值

1.3.3 能力驗(yàn)證評(píng)價(jià)方法：按照CNAS-GL02《能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評(píng)價(jià)指南》的評(píng)價(jià)原則，采用數(shù)值范圍的形式對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案(CLIA’88)中能力驗(yàn)證的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)制定本研究的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，GLU，CHO，TG，K+，Na+和Cl-的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分別為均值±10%，均值±10%，均值±25%，均值±0.5 mmol/L，均值±4 mmol/L和均值±5%。依據(jù)美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)(College of American Pathologists，CAP)組織的生化指標(biāo)能力驗(yàn)證的評(píng)價(jià)要求，每個(gè)指標(biāo)分配5個(gè)樣品，一個(gè)樣品通過記20分，得分≥80分為該指標(biāo)滿意[7，8]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行隨機(jī)抽樣、均勻性和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)分析以及能力驗(yàn)證結(jié)果處理。通過單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)進(jìn)行能力驗(yàn)證結(jié)果數(shù)據(jù)的正態(tài)性檢驗(yàn)，顯著性水平α=0.05。

2結(jié)果

2.1 樣品均勻性和穩(wěn)定性考察結(jié)果 均勻性檢驗(yàn)結(jié)果顯示低、高水平樣品的各指標(biāo)檢驗(yàn)F值

表1 低水平樣品的均勻性檢驗(yàn)結(jié)果

表2 高水平樣品的均勻性檢驗(yàn)結(jié)果

表3 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(P值)

2.2 數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)量結(jié)果 對(duì)能力驗(yàn)證結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)，數(shù)據(jù)呈正態(tài)性分布，P≥0.05時(shí)，數(shù)據(jù)不呈正態(tài)性分布。結(jié)果顯示，所有指標(biāo)的Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)P值均大于0.05，數(shù)據(jù)呈正態(tài)性分布。5個(gè)樣品能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)量見表4。

表4 能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)量

2.3 評(píng)價(jià)結(jié)果 除TG滿意率為100%外，其余所有指標(biāo)均出現(xiàn)不滿意的結(jié)果，評(píng)價(jià)結(jié)果見表5。

表5 能力驗(yàn)證評(píng)價(jià)結(jié)果

注：*表示無實(shí)驗(yàn)室代碼。

3討論在本研究中，各實(shí)驗(yàn)室的血糖定量采用了葡萄糖氧化酶法(GOD)和己糖激酶法(HK)兩種檢測(cè)方法，統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn)這兩種方法檢測(cè)結(jié)果的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，沒有對(duì)這兩種檢測(cè)方法進(jìn)行分組評(píng)價(jià)。TG測(cè)定方法分為去游離甘油酶法和不去游離甘油酶法。不去游離甘油酶法不能消除樣本中游離甘油的影響，會(huì)導(dǎo)致TG的測(cè)定結(jié)果偏高[9]。本研究中兩種方法測(cè)定TG值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，將兩種方法進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)。其余指標(biāo)均分別采用相同的檢測(cè)方法，未進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)分析和評(píng)價(jià)。

中國(guó)衛(wèi)計(jì)委臨檢中心2016年GLU，CHO，TG，K+，Na+，Cl-的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分別為靶值±10%，靶值±10%，靶值±25%，靶值±0.5mmol/L，靶值±4mmol/L和靶值±5%，與本研究中參照的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案(CLIA’88)中能力驗(yàn)證的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)一致。但是，2017年衛(wèi)計(jì)委臨檢中心將GLU，CHO，TG，K+，Na+，Cl-的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分別修訂為靶值±7%，靶值±9%，靶值±14%，靶值±6%和靶值±4%，Cl-的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不變。按照修改后的標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)價(jià)本研究中的數(shù)據(jù)，除Na+的滿意率提升為90.9%以及Cl-的滿意率不變外，其余指標(biāo)的滿意率均下降，不滿意實(shí)驗(yàn)室數(shù)量增加。很明顯，衛(wèi)計(jì)委修訂后的GLU，CHO，TG和K+的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)更為嚴(yán)格，而Na+的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)卻變的寬松。對(duì)于美國(guó)CLIA’88的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和中國(guó)衛(wèi)計(jì)委臨檢中心的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，哪個(gè)是最科學(xué)、最適合的標(biāo)準(zhǔn)仍需要在實(shí)踐中去論證。

本研究中的6項(xiàng)生化指標(biāo)，只有TG的滿意率為100%，其余均有不滿意的結(jié)果。電解質(zhì)的滿意率普遍較低，以Na+為最低。被評(píng)價(jià)為不滿意的結(jié)果一定是那些與靶值偏差較大的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取措施糾正偏差，也可以申請(qǐng)測(cè)量審核進(jìn)行再次評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保留對(duì)不滿意結(jié)果所采取的糾正措施及產(chǎn)生效果的相關(guān)記錄，以供監(jiān)管者審閱。

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