劉 健，肖朝江，2，張盼盼，崔淑君 ，李 陽(yáng)，姜 北，2*

（1.大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000；2.大理大學(xué)藥物研究所，云南大理 671000）

匙萼金絲桃（Hypericum uralum Buch.-Han.ex D.Don）又名土連翹、芒種花、金絲桃等，為藤黃科金絲桃屬植物，主要分布于西藏、云南西北部。該植物為灌木，高0.3～2 m，叢狀，有直立而拱彎、通常多葉的莖，花期7～9月，果期9～11月〔1〕。該植物全株可用于治療肝炎、痢疾、淋病、咽喉腫痛、口腔炎、瘡癰、跌打損傷、鼻咽癌、喉癌、扁桃體癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等〔2-3〕。在前期開展的大規(guī)模滇西地區(qū)特色性植物鎮(zhèn)痛活性篩選研究中，發(fā)現(xiàn)匙萼金絲桃提取物具有顯著的鎮(zhèn)痛活性。為深入了解認(rèn)識(shí)該植物的化學(xué)成分，本文采用硅膠和凝膠柱層析等手段，對(duì)采自云南大理地區(qū)的匙萼金絲桃95%乙醇提取物乙酸乙酯部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到了6個(gè)化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇（1）、豆甾醇（2）、胡蘿卜苷（3）、樺木酸（4）、槲皮素（5）、表兒茶素（6）。見圖1。

1 儀器與材料

圖1 化合物1～6的結(jié)構(gòu)

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 AL-204電子天平［梅特勒-托利多（上海）有限公司］；Bruker AvanceⅢ-400核磁共振儀（德國(guó)布魯克公司），四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)；柱層析硅膠和薄層層析硅膠板GF254（青島海洋化工廠）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences）；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等均為工業(yè)級(jí)有機(jī)溶劑，經(jīng)重蒸后使用。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 本實(shí)驗(yàn)所用樣品于2017年7月采自云南省大理市蒼山，由大理大學(xué)張德全博士鑒定為匙萼金絲桃（Hypericum uralum Buch.-Ham.ex D.Don），植物樣本（20170705-1A）存放于大理大學(xué)藥物研究所姜北教授研究組。

2 提取方法

匙萼金絲桃全植株9.34 kg，用95%乙醇冷浸提取9次，合并提取液，減壓濃縮所得總浸膏（1.26 kg）以水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到相應(yīng)萃取物。乙酸乙酯萃取物（322 g）經(jīng)300～400目硅膠柱，氯仿-丙酮洗脫系統(tǒng)（1：0→0：1）梯度洗脫，得到9個(gè)流分（A～I(xiàn)）；B段經(jīng)300～400目硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（1：0→0：1）梯度洗脫，得到化合物1（9 mg）和2（15 mg）；B3段經(jīng)300～400目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（10：1）等度洗脫，得到化合物4（23 mg）和5（35 mg）；C段經(jīng)兩次凝膠（Sephadex LH-20，甲醇）柱色譜，得到化合物6（40 mg）；G段經(jīng)兩次凝膠（Sephadex LH-20，甲醇）柱色譜分離純化，得到化合物3（15 mg）。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物1：無色針晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，brs，H-6），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5 Hz，Me-21），0.85，0.82，0.81（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.4（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），31.8（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），39.9（t，C-12），42.5（s，C-13），56.2（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），56.9（d，C-17），12.1（q，C-18），19.5（q，C-19），36.3（d，C-20），18.9（q，C-21），34.1（t，C-22），26.2（t，C-23），46.0（d，C-24），29.3（d，C-25），20.0（q，C-26），19.2（q，C-27），23.3（t，C-28），12.0（q，C-29）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔4〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為β-谷甾醇。

化合物2：無色針晶（氯仿）。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，brs，H-6），5.15（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-23），5.01（1H，dd，J=15.5，8.6Hz，H-22），3.53（1H，m，H-3α），1.01（3H，s，Me-19），0.92（3H，d，J=6.5Hz，Me-21），0.84，0.82，0.80（各3H，overlap，Me-26，27，29），0.70（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.4（t，C-1），31.8（t，C-2），72.0（d，C-3），42.5（t，C-4），140.9（s，C-5），121.9（d，C-6），32.1（t，C-7），32.0（d，C-8），50.3（d，C-9），36.6（s，C-10），21.2（t，C-11），40.7（t，C-12），42.4（s，C-13），56.1（d，C-14），24.5（t，C-15），28.4（t，C-16），57.0（d，C-17），12.0（q，C-18），19.5（q，C-19），40.6（d，C-20），21.4（q，C-21），138.5（d，C-22），129.4（d，C-23），51.4（d，C-24），32.0（d，C-25），21.4（q，C-26），19.1（q，C-27），25.6（t，C-28），12.1（q，C-29）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔5〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為豆甾醇。

化合物3：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：5.37（1H，brs，H-6），5.14（1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），5.08（1H，d，J=7.7 Hz，H-1′），4.59（1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6′a），4.43（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6′b），4.33（1H，overlap，H-4′），4.31（1H，overlap，H-5′），4.08（1H，m，H-3α），4.00（1H，overlap，H-2′），3.96（1H，overlap，H-3′），1.00（3H，overlap，Me-21），0.96（3H，s，Me-19），0.95（3H，overlap，Me-26），0.91（3H，overlap，Me-27），0.89（3H，overlap，Me-29），0.68（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100MHz，C5D5N）δ：37.8（t，C-1），30.6（t，C-2），78.9（d，C-3），40.3（t，C-4），141.3（s，C-5），122.3（d，C-6），32.5（t，C-7），32.4（d，C-8），50.7（d，C-9），37.3（s，C-10），21.7（t，C-11），39.7（t，C-12），42.8（s，C-13），57.2（d，C-14），24.9（t，C-15），28.9（t，C-16），56.6（d，C-17），12.3（q，C-18），19.8（q，C-19），36.7（d，C-20），19.4（q，C-21），34.6（t，C-22），26.7（t，C-23），46.4（d，C-24），29.8（d，C-25），19.8（q，C-26），20.4（q，C-27），23.8（t，C-28），12.5（q，C-29），102.9（d，C-1′），75.7（d，C-2′），78.5（d，C-3′），72.1（d，C-4′），79.0（d，C-5′），63.2（t，C-6′）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔6〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為胡蘿卜苷。

化合物4：白色粉末。1H-NMR（400MHz，C5D5N）δ：4.94（1H，brs，H-29a），4.76（1H，brs，H-29b），3.53（1H，td，J=10.9，5.0 Hz，H-3α），3.45（1H，dd，J=9.1，7.1 Hz，H-19），1.78（3H，s，H-30），1.21（3H，s，H-27），1.05（3H，s，H-26），1.04（3H，s，H-23），1.00（3H，s，H-25），0.80（3H，s，H-24）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：38.9（t，C-1），28.6（t，C-2），78.5（d，C-3），39.9（s，C-4），56.2（d，C-5），19.1（t，C-6），35.2（t，C-7），41.4（s，C-8），51.3（d，C-9），37.8（s，C-10），21.5（t，C-11），26.4（t，C-12），38.9（d，C-13），43.2（s，C-14），30.6（t，C-15），33.2（t，C-16），57.0（s，C-17），48.1（d，C-18），50.1（d，C-19），151.7（s，C-20），31.5（t，C-21），37.9（t，C-22），29.0（q，C-23），16.8（q，C-24，C-26），16.7（q，C-25），15.2（q，C-27），179.2（s，C-28），110.3（t，C-29），19.8（q，C-30′）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔7〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為樺木酸。

化合物 5：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：12.1（1H，s，5-OH），7.80（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.67（1H，dd，J=8.4，1.9 Hz，H-6′），6.97（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.50（1H，brs，H-6），6.24（1H，brs，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：146.9（s，C-2），136.7（s，C-3），176.5（s，C-4），162.3（s，C-5），99.1（d，C-6），164.9（s，C-7），94.4（d，C-8），157.7（s，C-9），104.1（s，C-10），123.7（s，C-1′），115.7（d，C-2′），145.8（s，C-3′），148.3（s，C-4′），116.2（d，C-5′），121.4（d，C-6′）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔8〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為槲皮素。

化合物6：黃色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：7.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.83（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6′），6.78（1H，d，J=8.1，H-5′），6.02（1H，d，J=2.3 Hz，H-6），5.92（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），4.87（1H，s，H-2b），4.20（1H，m，H-3b），2.86（1H，dd，J=16.6，4.6 Hz，H-4a），2.74（1H，dd，J=16.6，3.3 Hz，H-4b）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：79.5（d，C-2），67.1（d，C-3），29.1（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（s，C-6），157.7（s，C-7），95.8（d，C-8），157.2（s，C-9），99.9（s，C-10），132.3（d，C-1′），115.4（d，C-2′），145.4（s，C-3′），145.5（s，C-4′），115.6（d，C-5′），119.5（d，C-6′）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔9〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為表兒茶素。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從匙萼金絲桃95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離得到6個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到〔10-14〕，其主要涉及甾體類、黃酮類及萜類。前人研究表明黃酮類及萜類化合物具有豐富的藥理活性。文獻(xiàn)報(bào)道，槲皮素可顯著降低多種動(dòng)物模型的痛閾值〔15〕。另外，阮洪生等〔16〕研究表明表兒茶素可以抑制對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)，具有抗炎作用。徐先祥等〔17〕研究表明樺木酸可以通過活化糖皮質(zhì)激素受體、抑制花生四烯酸代謝途徑、抑制一氧化氮生成等多種途徑發(fā)揮抗炎作用。由于鎮(zhèn)痛常與抗炎作用密切相關(guān)，從本研究所分離得到的化學(xué)成分及其相關(guān)研究報(bào)道，可初步推斷前期研究過程中所發(fā)現(xiàn)的匙萼金絲桃提取物顯示鎮(zhèn)痛作用具有一定的合理性。本研究為系統(tǒng)了解匙萼金絲桃的化學(xué)成分、更好地開發(fā)與利用該植物資源奠定了一定基礎(chǔ)。

〔1〕中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第50（2）卷〔M〕.北京：科學(xué)出版社，1990：27.

〔2〕姜北，段寶忠.白族慣用植物藥〔M〕.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2014：49-50.

〔3〕國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草：第9卷〔M〕.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：607.

〔4〕HAMDAN D，EL-READI M Z，TAHRANI A，et al.Chemi?cal composition and biological activity of Citrus jambhiri Lush〔J〕.Food Chem，2011，127（2）：394-403.

〔5〕SANG S，LAPSLEY K，ROSEN R T，et al.New Prenylated Benzoic Acid and Other Constituents from Almond Hulls（Prunus amygdalus Batsch）〔J〕.J Agric Food Chem，2002，50（3）：607-609.

〔6〕王健，馬養(yǎng)民，閆夢(mèng)茹，等.高叢珍珠梅莖枝化學(xué)成分研究〔J〕.中藥材，2015，38（10）：2098-2101.

〔7〕劉瑩，李喜鳳，劉艾林，等.細(xì)皺香薷葉的化學(xué)成分研究〔J〕.中草藥，2009，40（9）：1356-1359.

〔8〕CHEN Y P，LIU L，ZHOU Y H，et al.Chemical constitu?ents from Sappan Lignum〔J〕.Journal of Chinese Pharma?ceutical Science，2008，17（1）：82-86.

〔9〕胡江苗，陳紀(jì)軍，趙友興，等.山竺果殼的化學(xué)成分〔J〕.云南植物研究，2006，28（3）：319-322.

〔10〕ZHANG J J，YANG J，LIAO Y，et al.Hyperuralones A and B，New Acylphloroglucinol Derivatives with Intricately Caged Cores from Hypericum uralum〔J〕.Organic Letters，2014，16（18）:4912-4915.

〔11〕ZHANG J J，YANG X W，LIU X，et al.1，9-seco-Bicyclic Polyprenylated Acylphloroglucinols from Hypericum ural?um〔J〕.J Nat Prod，2015，78（12）:3075-3079.

〔12〕張晶晶.兩種金絲桃屬植物中間苯三酚類化學(xué)成分研究〔D〕.昆明：中科院昆明植物研究所，2014.

〔13〕ZHOU Z B，LI Z R，WANG X B，et al.Polycyclic Polypre?nylated Derivatives from Hypericum uralum:Neuroprotec?tive Effects and Antidepressant-like Activity of Uralodin A〔J〕.J Nat Prod，2016，79（5）:1231-1240.

〔14〕LI X Q，LI Y，LUO J G，et al.New phloroglucinol deriva?tives from the whole plant of Hypericum uralum〔J〕.Fito?terapia，2017，123:59-64.

〔15〕XIAO X，WANG X，GUI X，et al.Natural Flavonoids as Promising Analgesic Candidates：A Systematic Review〔J〕.Chem Biodivers，2016，13（11）：1427-1440.

〔16〕阮洪生，牟晉珠.表兒茶素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥因子的影響〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（4）：159-163.

〔17〕徐先祥，秦思，李瓊.樺木酸抗炎作用與機(jī)制〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31（10）：1284-1287.