(儀征市真州獸醫(yī)站，江蘇 儀征 211400)

0 引言

2016年9月儀征地區(qū)，雛鴨肝炎的發(fā)病率較高，通過在儀征市真州獸醫(yī)站采集的3例疑似雛鴨肝炎病例死亡的雛鴨肝臟，經(jīng)過研磨，勻漿，離心等操作以后提取其上清液，通過瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)(AGP)48 h以后對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀查，最后實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，證實(shí)了所取的3例病料均為雛鴨肝炎。通過合理的防治措施很好的控制了該病的發(fā)生和雛鴨的死亡，保護(hù)養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 材料

通過真州獸醫(yī)站門診部，采集了3份鴨肝炎的病料，現(xiàn)將整理如下。

1.1.1 第一例病料

臨床癥狀：雛鴨采食下降，行動(dòng)呆滯，有些病鴨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，頭向后仰，并快速死亡。

免疫和飼養(yǎng)情況：雛鴨購入以后未進(jìn)行任何免疫，日常飲水中加入了氟派酸。飼料為某飼料廠全家料。

剖檢變化：肝臟明顯腫大，出血呈暗紅色，表面有大小不等的出血點(diǎn)，膽囊腫大，膽汁呈茶色。脾臟稍腫大。

1.1.2 第二例病料

臨床癥狀：雛鴨現(xiàn)采食下降，行動(dòng)呆滯，眼半閉，雛鴨拉稀糞，呈水樣。有些病鴨出現(xiàn)頭向后仰，死亡以后呈角弓反張。

免疫飼養(yǎng)情況：在購買時(shí)沒有具體向孵化廠詢問的免疫情況，日常飼養(yǎng)中也未用任何的藥物。所用飼料是自家用玉米和大豆等幾樣農(nóng)作物進(jìn)行配置的。

剖檢變化：肝臟明顯腫大，質(zhì)脆，表面有大小不等的出血點(diǎn)，膽囊腫大，膽汁呈褐色。脾臟稍腫大，腸道股氣，內(nèi)有大量的黏性分泌物。

1.1.3 第三例病料

臨床癥狀：雛鴨于25日下午開始出現(xiàn)采食下降，有10幾只鴨出現(xiàn)癱瘓，地上墊草上出現(xiàn)大量的白色的糞便，當(dāng)晚有一些鴨開始出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，并很快的死亡，死后呈明顯的神經(jīng)癥狀。到25日上午來就證前已經(jīng)死亡了99只。

免疫和飼養(yǎng)情況：雛鴨購買前已經(jīng)進(jìn)行了鴨瘟和鴨霍亂二聯(lián)苗免疫，用的是揚(yáng)州一飼料廠的飼料。

剖檢變化：肝臟腫大，質(zhì)地很脆，嚴(yán)重的出血。膽囊腫大，膽汁呈深褐色。脾臟腫大。腎臟表面有白色的尿酸鹽沉積，腸道內(nèi)有大量的黏液，并伴有鼓氣。

實(shí)驗(yàn)材料的收集:在解剖時(shí)，分別收集每例病鴨的肝臟，存放于-70℃的冰箱中。

1.2 方法

1.2．1 抗原的制備

(1)材料:玻璃研磨、移液槍和槍頭、天平、高速離心機(jī)、高壓滅菌鍋、超聲裂解器、指形管、記號(hào)筆、恒溫箱、載玻片、移液管。

(2)試劑：生理鹽水、陰性血清、陽性血清、瓊脂粉、蒸餾水、氯化鈉、PH試紙、NaOH、0.1mol/L的稀鹽酸。

1.2．2 步驟

(1)將第一例病料去除以后稱重，放在研磨中加入滅菌沙，進(jìn)行充分的研磨，入等量的PBS液(pH為7.0)制成勻漿，勻漿制好以后在在用CRX型—2型的超色化器，進(jìn)行超聲裂解(頻率2 000 Hz；20～30 W)12 s左右，裂解好以后在高速離心機(jī)上進(jìn)行高速離心12 000轉(zhuǎn)/min，離心20 min，取其上清液。

(2)抗原的稀釋：把抗原進(jìn)行2倍4倍8倍的稀釋方法如下。

取3支指形管編號(hào)為1 2 3 ，1～3號(hào)指形管中各加0.5 mL的無菌生理鹽水，在第1 管中加入0.5 mL的抗原，混勻后，用移液槍，吸取0.5 mL放到第2管中。將第2管中的生理鹽水和抗原混勻，用移液槍，吸求0.5 mL放到第3管中。將第3管中的生理鹽水和抗原混勻，丟棄0.5 mL。通過倍比稀釋以后第1管中的抗原稀釋倍數(shù)為2倍稀釋，2號(hào)管中的稀釋倍數(shù)為4倍稀釋，3號(hào)管中的稀釋倍數(shù)為8倍稀釋。

(3)陰性血清和陽性血清微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2．3 瓊脂平板的制備

(1)稱取瓊脂粉1 g NaCl 8g 放到燒杯中進(jìn)行溶解。等到瓊脂粉和NaCl完全溶解時(shí)，對(duì)溶液進(jìn)行pH值的調(diào)節(jié)使瓊脂液的pH在7左右(要求在6～8)

(2)將調(diào)節(jié)好pH值的瓊脂液倒入250 mL干凈生理鹽水瓶中，將生理鹽水瓶的瓶口用紗布包扎好，放入高壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓滅菌，滅菌條件要求在121C這個(gè)溫度維持在20℃左右。

1.2．4 澆板和打孔

(1)瓊脂液滅菌好以后，待溫度降到55℃左右的時(shí)候，開始進(jìn)行澆板。取1塊干凈透明的載玻片，將瓊脂液用移液管吸取進(jìn)行澆板，澆板的厚度為2～3 mm。澆好板以后讓瓊脂液在載玻片上自然冷卻凝固。

(2)待瓊脂液在在載玻片上自然冷卻凝固以后，在瓊脂平板上打梅花孔，要求沒孔的直徑要求在2 mm左右，孔與孔之間的距離為3 mm左右。

(3)補(bǔ)底，在打好孔的瓊脂平板在酒精燈的火焰上方來回的走動(dòng)，使瓊脂平板的底補(bǔ)瓊脂融化，防止孔與孔底部之間相互連通。

1.2．5 加樣(如圖1)

中間孔加入陽性血清;第1孔加入抗原的原液;第2孔加入二倍稀釋的抗原;第3孔加入四倍稀釋的抗原;第4孔加入八倍稀釋的抗原;第5孔加入陰性血清;第6孔加入無菌生理鹽水。

1.2．6 培養(yǎng)觀察

取一大培養(yǎng)皿，將底部放1塊潮濕的紗布，然后將加好樣的平板放在紗布上，將培養(yǎng)皿蓋好放入恒溫箱中，恒溫箱的溫度為37℃。在24 h和48 h進(jìn)行觀察，如果血清孔和抗原孔之間無任何反應(yīng)，為陰性反應(yīng)。如果血清孔和抗原孔之間有明顯的沉淀線，為陽性反應(yīng)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在48 h之后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),結(jié)果見表1、表2、表3。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察，發(fā)現(xiàn)這3個(gè)病例多出現(xiàn)了陽性的白色沉淀線。那么就可以通過以上的臨床癥狀和病理變化以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果就可以確定這3個(gè)病例為雛鴨肝炎。

表1 第一病例結(jié)果

表2 第二病例結(jié)果

表3 第三病例結(jié)果

3 治療

對(duì)病鴨采取嚴(yán)格的隔離飼養(yǎng)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格進(jìn)行環(huán)境的消毒，給雛鴨群肌注0.5 mL/只高免血清或康復(fù)鴨的血清，減少雛鴨的死亡。在飼料中添加5%甲砜霉素防治繼發(fā)感染。在飲水添加電解多維增強(qiáng)抵抗力。同時(shí)使用中草藥治療，用復(fù)方禽瘟靈片(主要成分是穿心蓮、板蘭根、黃芩等)雛鴨0.5片/次， 2次/d連用3～5 d。

4 預(yù)防措施

雛鴨肝炎是一種傳播迅速、死亡較高的病毒性傳染病，如果在日常飼養(yǎng)中如果不能很好的預(yù)防和控制本病，將會(huì)給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。

(1)規(guī)?；B(yǎng)鴨，鴨齡在4周齡以內(nèi)，且未發(fā)病的鴨群，雛鴨要進(jìn)行病毒肝炎疫苗緊急接種。

(2)在有病毒性肝炎流行史地區(qū)，可以通過種鴨開產(chǎn)前2～4周進(jìn)行全群免疫接種。對(duì)于嚴(yán)重污染地區(qū)要重復(fù)免疫1次。以使苗鴨獲得高水平抗體。

(3)在病毒性肝炎流行地區(qū)，如種鴨未經(jīng)病毒性肝炎弱毒苗接種，不能單純用病毒性肝炎血清或卵黃液來代替免疫。

(3)初診為病毒性肝炎后，每只雛鴨緊急肌肉注射高免血清1 mL。對(duì)存欄雛鴨進(jìn)行圈養(yǎng)，及時(shí)隔離病弱雛鴨。在未發(fā)病的鴨飼料中加入磺胺嘧啶鈉，在病鴨的飲水中加入恩諾沙星和口服補(bǔ)液鹽，同時(shí)在所有雛鴨的飲水中加入水溶性多維素。

(4)養(yǎng)鴨場(chǎng)實(shí)行封閉式生產(chǎn)，本著“防重于治”的原則，做好隔離消毒工作。發(fā)病地區(qū)要加強(qiáng)消毒工作，場(chǎng)地用3%～5%熱氫氧化鈉噴灑消毒，1～2次/d，所用器皿用0.1%-0.2%高錳酸鉀清洗消毒。用3%的過氧乙酸進(jìn)行室內(nèi)帶鴨消毒，病死鴨深埋。

(5)進(jìn)雛鴨時(shí)，要從正規(guī)無病史種鴨場(chǎng)引種，對(duì)1日齡雛鴨接種鴨肝炎弱毒疫苗，做好商品雛鴨的預(yù)防免疫接種工作。

Y.M.塞弗,蘇敬良.禽病學(xué)(第十一版)[M].高福,譯.北京：農(nóng)業(yè)出版社,1999：276-382.

[2] B.W卡爾尼克.禽病學(xué)(第九版)[M].高福,劉文軍,譯.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1991：455-471.