田迎秋 李玲 楊玉玲 黃玉玲 王春全 楊清松 蔡群虎

摘 要：目的：對(duì)不同產(chǎn)地黃精品種進(jìn)行多糖含量和浸出物測(cè)定，為黃精品種選育和種植奠定基礎(chǔ)；同時(shí)對(duì)不同生長(zhǎng)年限的滇黃精以及三年生滇黃精不同采收期的多糖含量進(jìn)行比較，確定其適宜的采收期。方法：黃精浸出物按《中國(guó)藥典》2015年版醇溶性測(cè)定法的熱浸法測(cè)定，多糖含量采用硫酸蒽酮法測(cè)定。結(jié)果：產(chǎn)自云南文山的滇黃精（黃斷面類型）的浸出物和多糖含量最高，分別為54.6%和24.62%；不同生長(zhǎng)年限的滇黃精多糖含量以十年生滇黃精多糖含量最高，為35.83%；三年生不同采收期的滇黃精以11月采收的多糖含量最高，為25.93%。結(jié)論：不同產(chǎn)地黃精的多糖和浸出物含量均有較大差異，滇黃精的生長(zhǎng)年限和采收期影響多糖含量。

關(guān)鍵詞：滇黃精；多花黃精；雞頭黃精；浸出物；多糖；采收期

黃精為百合科黃精屬（Liliaceae）多年生草本植物，有黃精（Polygonatum sibiricum Red.）、滇黃精（Polygonatum kingianum Coll. et Hernsl.）和多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）等，按形狀不同，習(xí)稱“雞頭黃精”、“大黃精”、 “姜形黃精”。具補(bǔ)腎益精、滋陰潤(rùn)燥之功，用于滋補(bǔ)強(qiáng)身和治療腎虛精虧、肺虛燥咳以及脾胃虛弱之癥已有很長(zhǎng)歷史，是中醫(yī)常用藥物之一[2，3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其活性成分主要為黃精多糖（polygonatum sibiricum polysaccharides， PSP），具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎抗菌、調(diào)節(jié)血糖血脂、調(diào)節(jié)免疫、改善記憶力等功能[5-11]。并且黃精中的多糖含量普遍在10%以上，因此黃精多糖的研究對(duì)黃精的開(kāi)發(fā)利用具有重要意義[12]。但當(dāng)前已報(bào)告黃精多糖的研究大多是關(guān)于提取工藝的研究[13]。本研究主要對(duì)不同品種黃精進(jìn)行多糖和浸出物含量的測(cè)定，為黃精品種選育及利用提供理論依據(jù)。同時(shí)對(duì)不同生長(zhǎng)年限、3年生不同采收期滇黃精的多糖含量進(jìn)行分析，確定適宜的采收期，為滇黃精的采收提供依據(jù)。

一、 材料和儀器

1.材料

從云南、貴州、四川、河北、內(nèi)蒙古等5省的8個(gè)產(chǎn)地收集黃精新鮮塊根樣品8份；從云南廣南采集一年、兩年、三年、四年、五年、十年等不同生長(zhǎng)年限的滇黃精塊根（斷面呈淺黃色類型，以下簡(jiǎn)稱“黃斷面類型”）6份；從云南文山對(duì)生長(zhǎng)至第三年的滇黃精塊根（種植時(shí)的塊根重量約為400g，黃斷面類型）按不同月份進(jìn)行采集6份。樣品洗凈，切片，60℃微波干燥。

試劑：無(wú)水乙醇、濃硫酸、蒽酮（以上試劑均為分析純）。

標(biāo)準(zhǔn)曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品：葡萄糖。

2.儀器

萬(wàn)能粉碎機(jī)；電子天平；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋；循環(huán)水真空泵；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；超聲波清洗器；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；離心機(jī)；真空干燥箱；冷凍干燥機(jī)。

二、 方法

1.黃精口感的測(cè)定

取等量干燥的黃精粉末，進(jìn)行品嘗，將口感的等級(jí)分為：微苦、微甜、甜、較甜。

2.黃精浸出物的測(cè)定

按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）醇溶性測(cè)定法的熱浸法測(cè)定，稀乙醇為溶劑。

3.硫酸蒽酮法測(cè)定黃精多糖含量

（1）對(duì)照品溶液的制備。取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品33.10mg，精密稱定，置l00ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含無(wú)水葡萄糖0.3310mg）。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.1m1、0.2m1、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加水至2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%葸酮硫酸溶液至刻度、混勻，放置冷卻，后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白。按照紫外可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）供試樣品溶液制備。取60℃干燥至恒重的本品細(xì)粉約0.2512g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10ml，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150ml，置沸水浴中加熱回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10ml，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞干燥試管中，加水至2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%葸酮硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘，取出即得。

（3）空白樣品制備。取水2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%葸酮硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘，取出即得。

（4）波長(zhǎng)測(cè)定。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加水至2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%葸酮硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即放置于冰水浴中冷卻10分鐘，取出進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。根據(jù)掃描結(jié)果可知，在582nm處有最大吸收，確定582nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

（5）線性關(guān)系考察。精密量取對(duì)照品溶液0.1m1、0.2m1、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加水至2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%葸酮硫酸溶液至刻度，混勻，待冷卻后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白。按照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.0443X+0.1020，R=0.9992，結(jié)果表明以無(wú)水葡萄糖為對(duì)照在33.10--199.84ug范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。

（6）精密度實(shí)驗(yàn)。精密稱取5份供試樣品按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法進(jìn)行多糖含量的測(cè)定，觀察其精密度，RSD為0.13%，儀器精密度良好。

（7）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。精密吸取供試樣品溶液1h內(nèi)，每隔10分鐘按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法測(cè)定樣液吸光度，RSD=0.83%，表明供試樣品溶液在一小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（8）加樣回收率實(shí)驗(yàn)。取1mL樣液三份，分別加入0.1、0.2、0.3mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水補(bǔ)至2mL按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法測(cè)定樣液吸光度，平均回收率為100.29%，RSD=1.5%。

三、結(jié)果與分析

1.不同產(chǎn)地黃精口感的比較

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（表1），多花黃精、滇黃精（黃斷面類型）的口感均為味甜，雞頭黃精的口感為味微甜，滇黃精（斷面呈淺白色，以下簡(jiǎn)稱“白斷面類型”）的口感為味微甜苦。

2.不同產(chǎn)地黃精浸出物含量的比較

不同地區(qū)黃精浸出物含量存在明顯差異（表1），其中，云南文山滇黃精（黃斷面類型）、河北承德的雞頭黃精、貴州遵義的多花黃精、云南玉溪的滇黃精（黃斷面類型）4個(gè)地區(qū)的黃精浸出物含量相對(duì)較高，均在50%以上，其含量依次分別為54.6%、53.11%、52.1%、50.21%，云南文山產(chǎn)的滇黃精（白斷面類型）的浸出物含量最低，為38.6%。

3.不同產(chǎn)地黃精品種多糖含量的比較

結(jié)果表明（表1），各個(gè)地區(qū)的黃精多糖含量均符合《中國(guó)藥典》的含量要求，其中，云南文山滇黃精（黃斷面類型）的多糖含量最高，為24.62%，云南文山滇黃精（白斷面類型）的多糖含量最低，為10.67%。

4.不同生長(zhǎng)年限滇黃精的多糖含量比較

不同生長(zhǎng)年限滇黃精的多糖含量存在明顯差異，其中，十年生滇黃精多糖含量最高，為35.83%，其次為四年生，含量為 26.51%，最低為一年生，含量為9.82%。從檢測(cè)結(jié)果看，所有樣品的多糖含量均達(dá)到《中國(guó)藥典》2015版的含量要求，并且隨生長(zhǎng)年限呈逐年增加的趨勢(shì)，其中第三年至第五年的多糖含量增長(zhǎng)緩慢，而第四年和第五年間沒(méi)有明顯差異。

5.三年生滇黃精不同生長(zhǎng)月份多糖含量比較

三年生滇黃精不同生長(zhǎng)月份的多糖含量存在差異，其中，11月采收的滇黃精多糖含量最高，為25.93%，其次為1月份，其多糖含量為25.62%，5月和9月采收的滇黃精多糖含量分別為22.13%和25.93%，7月份的多糖含量最低，為21.41%。三年生不同生長(zhǎng)月份的多糖含量均達(dá)到《中國(guó)藥典》的含量要求。

四、 討論與結(jié)論

黃精屬于藥典規(guī)定的大宗藥材，同時(shí)也是藥食兩用的中藥品種，全國(guó)多數(shù)省份均有種植，其中一些產(chǎn)區(qū)，目前主要是滇黃精產(chǎn)區(qū)主要靠野外采集和采集后人工種植的方式種植，因此，提前做好資源品種品質(zhì)的鑒別，為今后選育新類型和新品種奠定基礎(chǔ)變得十分必要。加之，黃精具有藥食兩用的歸屬優(yōu)勢(shì)，因此選育藥效成分含量高的藥用型品種和適口性好的食用型品種對(duì)黃精產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有長(zhǎng)遠(yuǎn)意義。

本研究選取七個(gè)產(chǎn)區(qū)的三個(gè)品種及其不同類型進(jìn)行分析，采用醇溶性測(cè)定法的熱浸法測(cè)定黃精浸出物，采用硫酸蒽酮法測(cè)定黃精多糖含量，方法簡(jiǎn)單易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度好。從分析結(jié)果看，滇黃精的生長(zhǎng)年限和采挖期影響多糖含量，三年生和四年生黃精多糖含量均為25%左右，含量和產(chǎn)量均差異不明顯，說(shuō)明第三年可以作為多年生黃精塊根的一個(gè)采挖期。而就采挖月份看，三年生滇黃精最適宜的采挖期分別為11月和翌年1月，因?yàn)槎军S精進(jìn)入休眠期，沒(méi)有發(fā)芽和開(kāi)花等生長(zhǎng)旺盛過(guò)程，營(yíng)養(yǎng)成分都富集在地下部分的塊根中，并且冬季雨水少，塊根含水量也較低，多糖含量較高。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三年生冬季采挖的不同黃精品種或類型，其多糖含量和糖分類型均存在差異，值得一提的是，一些類型的斷口面成色與其多糖的類型存在相關(guān)性，在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，斷口面呈黃色或微黃色的，其甜味和適口性均比斷口面呈白色的好，推測(cè)可能是由于前一種類型含小分子糖較多，而后一種類型含大分子糖較多的原故。在后期的研究中，可以加大對(duì)這兩種類型的鑒別，進(jìn)一步選育出藥用型品種和食用型品種的滇黃精，為后期開(kāi)發(fā)不同類型的食品、保健品和藥品等新產(chǎn)品提供原料而奠定基礎(chǔ)。

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