張 婭,項(xiàng)朋志,何鵬飛,齊 杰
(1.云南省中醫(yī)中藥研究院,昆明 650223;2.云南開(kāi)放大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院,昆明 650222)
流行病學(xué)調(diào)查顯示,高脂血癥是脂肪肝主要致病因素之一。另外,脂肪肝患者中約25%可發(fā)展為肝纖維化,且有5%~8%進(jìn)展為肝硬化[1]。一旦形成脂肪肝,又可使血脂代謝、脂蛋白合成障礙(尤其是HDL合成減少[2]),可以形成或加重高血脂癥。
難消化的低聚糖是雙歧桿菌的增殖因子,具有改善腸內(nèi)菌群和脂質(zhì)代謝等保健功能,正日益受到重視[3]。研究證實(shí)[4]:低聚糖具有低熱、穩(wěn)定、安全無(wú)毒等理化特性,可使腸道有益菌增加,促進(jìn)雙歧桿菌生長(zhǎng),并有降低血脂及膽固醇等生理功能。許多發(fā)達(dá)國(guó)家已將多種低聚糖類(lèi)產(chǎn)品定為特定保健食品,用來(lái)預(yù)防便秘、肥胖、高血脂、動(dòng)脈硬化及冠心病的發(fā)生。國(guó)內(nèi)近來(lái)亦有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于大豆低聚糖抗高血脂和抗氧化功能的研究[5]。
魔芋低聚糖主要是以甘露糖和葡萄糖的二糖、三糖的異構(gòu)體形式存在[6]。我們用魔芋低聚糖給高脂血癥模型大鼠灌胃給藥,觀察其對(duì)高脂血癥大鼠血脂各項(xiàng)指標(biāo)、肝功能、肝臟組織的影響,旨在探討魔芋低聚糖降低血脂及保肝的保健功能。
1.1 實(shí)驗(yàn)環(huán)境 云南省中醫(yī)中藥研究院IVC獨(dú)立送風(fēng)系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(滇)2013-0006,溫度20~26 ℃,濕度40%~60%。
1.2 實(shí)驗(yàn)材料 SD雄性大鼠50只,SPF級(jí)。魔芋低聚糖(云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供);阿托伐他汀鈣片(批號(hào):M60798,輝瑞制藥有限公司生產(chǎn))。 輻照鼠用滅菌飼料、輻照鼠用滅菌高脂飼料均由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司提供,蘇飼審(2009)05032。珍茗山泉水符合GB2762-2012、GB19298-2003的要求,昆明珍茗食品有限責(zé)任公司。Olympus Au5400型全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus公司);Olympus CX21研究型系統(tǒng)生物顯微鏡(日本Nikon公司);BP310S 電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);ASP300脫水機(jī)(德國(guó)萊卡);RM2235切片機(jī)(德國(guó)萊卡);CSVI攤片烤片機(jī)(湖北宏業(yè));YB6LF包埋機(jī)(湖北宏業(yè))。
2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 SD雄性大鼠50只,隨機(jī)分為4組,其中正常對(duì)照組10只,采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);其余40只大鼠采用高脂飼料(2%膽固醇、10%豬油、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.2%豬膽鹽、87.6%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)4周進(jìn)行造模后,眼眶取血檢測(cè)TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,與空白組比較,選取膽固醇顯著升高的動(dòng)物繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)膽固醇水平將造模動(dòng)物隨機(jī)分為高脂模型組(14只)、陽(yáng)性對(duì)照組(13只)、魔芋低聚糖組(13只)。
2.2 劑量設(shè)置及給藥方案 正常對(duì)照組、高脂模型組:灌胃給予飲用水,給藥體積為20 mL/kg;陽(yáng)性藥對(duì)照組:灌胃給予阿托伐他汀鈣片,給藥劑量為4 mg/kg(20 mg配成100 mL溶液),給藥體積為20 mL/kg,約為成人臨床用量(80 mg/d,按60 kg/人計(jì))的3倍;魔芋低聚糖組:給藥劑量為4.8 g/kg(濃度0.24 g/mL,給藥體積為20 mL/kg)。
2.3 相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目、指標(biāo) 每組動(dòng)物均采用灌胃方式給藥,每天上午給藥1次,每周稱(chēng)量體質(zhì)量1次。各給藥組連續(xù)給藥4周后,禁食不禁水12 h,稱(chēng)體質(zhì)量,取血處死大鼠,測(cè)定總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、載脂蛋白A、載脂蛋白B、脂蛋白a、肝功能、腎功能各項(xiàng)指標(biāo);取肝臟稱(chēng)重,計(jì)算臟器系數(shù);將肝臟放入10%中性甲醛溶液中固定,石蠟包埋、切片,經(jīng)蘇木素、伊紅染色,再經(jīng)脫水、透明、封固后進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。統(tǒng)計(jì)分析組間差異。
2.4 數(shù)據(jù)處理及分析 數(shù)據(jù)資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x± s )表示,符合正態(tài)分布、方差齊者用t檢驗(yàn),方差不齊者用t’檢驗(yàn),比較組間差異。
表1 魔芋低聚糖對(duì)高脂血癥模型大鼠體質(zhì)量的影響(x± s )
由表1結(jié)果顯示:灌胃開(kāi)始至第4周,除正常對(duì)照組呈正常體質(zhì)量增長(zhǎng)外,高脂模型組、陽(yáng)性組及魔芋低聚糖組大鼠體質(zhì)量與灌胃開(kāi)始時(shí)比較,均呈現(xiàn)不同程度的增長(zhǎng)緩慢或下降,可能與高脂飼料攝入后引起大鼠食欲不振等相關(guān);與高脂模型組比較,給藥后第4周陽(yáng)性組體質(zhì)量有顯著增長(zhǎng)(△△P<0.01)、魔芋低聚糖組
給藥后第4周體質(zhì)量有顯著下降(△P<0.05)。
表2 魔芋低聚糖對(duì)高脂血癥模型大鼠血脂、血清載脂蛋白、肝功、腎功的影響(x± s )
表2結(jié)果顯示:各組大鼠給藥4周后,與高脂模型組相比,陽(yáng)性對(duì)照組中TG、CHOL、HDL-C、LDL-C、HDL/CHOL、ALT、AST、UREA、CR、TP、ALB、GLB均有顯著降低(與高脂模型組比較,△P<0.05或△△P<0.01);魔芋低聚糖組中TG、CHOL、HDL-C、LDL-C、HDL/CHOL、APOA、APOB、AST、UREA、CR、TP、GLB有顯著降低(與高脂模型組比較,△P<0.05或△△P<0.01);魔芋低聚糖組LPA有顯著上升(與高脂模型組比較,△△P<0.01)。
表3 魔芋低聚糖對(duì)高脂血癥模型大鼠肝臟臟器系數(shù)的影響(x± s )
表3結(jié)果顯示:高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、魔芋低聚糖組肝臟臟器指數(shù)與空白對(duì)照組相比,均有顯著上升(## P<0.01);魔芋低聚糖組與高脂模型組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。這可能與高脂飼料中的脂肪分解后形成三酰甘油,囤積于肝臟,造成了肝臟重量增加有關(guān)。
3.4 肝臟病理組織學(xué)檢查 病理組織學(xué)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組比較,高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、魔芋低聚糖組受試大鼠肝臟均有不同程度脂肪樣改變。在給藥4周后,與高脂模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、魔芋低聚糖組大鼠肝臟均可見(jiàn)原脂肪樣改變一定程度的減輕,或出現(xiàn)再生新肝細(xì)胞的現(xiàn)象。
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[5]王素敏,劉福英,徐增年,等.大豆低聚糖對(duì)小鼠血脂和抗氧化作用的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 1997, 19(4):468-469.
[6]徐桂蕓,張力文.微量寡糖的甲基化分析——用于魔芋葡甘多糖酶解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)測(cè)定[J].分析化學(xué), 1997, 24(12):1401-1403.