張?zhí)m，魏吉鵬,2，沈晨,2，顏鵬，張麗平，李鑫*，韓文炎*

1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，浙江 杭州 310008；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081

“春茶好，夏茶澀，秋茶好吃摘不得”。與春茶相比，夏秋茶芽葉中呈苦澀味的兒茶素、花青素等物質(zhì)含量增多，氨基酸含量減少，使其苦澀味重、滋味鮮爽度差，嚴(yán)重影響茶葉品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益[1]。夏秋季光照充足、雨水充沛，茶鮮葉產(chǎn)量很高，但品質(zhì)差、效益低在很大程度上降低了茶農(nóng)的生產(chǎn)積極性，許多地方夏秋茶僅少量采摘或棄之不采，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)[2-3]。

茶葉品質(zhì)的季節(jié)性變化及地區(qū)間的適制性差異反映了環(huán)境因素對(duì)品質(zhì)的影響，如光、溫度等因子不僅對(duì)茶樹(shù)生育具有十分重要的作用[4-5]，同時(shí)影響茶樹(shù)多酚類、咖啡堿及茶氨酸等品質(zhì)成分的合成與代謝[6]。遮蔭覆蓋作為目前生產(chǎn)上提高夏秋茶品質(zhì)最有效的農(nóng)藝措施[7]，就是通過(guò)種植遮蔭樹(shù)或覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)等措施直接改變茶樹(shù)冠層的光照、溫度等環(huán)境因子，促進(jìn)茶樹(shù)生長(zhǎng)，影響并調(diào)節(jié)茶樹(shù)生理代謝和生化過(guò)程，最終降低茶多酚含量，提高氨基酸、咖啡堿含量，改善夏秋茶品質(zhì)[8-11]。另外，適度遮蔭在改善茶葉品質(zhì)的同時(shí)能有效提高茶樹(shù)的凈光合速率，打破茶樹(shù)光合“午休現(xiàn)象”[12-13]。光合作用為茶樹(shù)碳、氮代謝提供碳源和能量[14-15]，而糖作為碳源或信號(hào)分子可能參與類黃酮生物合成的代謝調(diào)控[6]。因此，環(huán)境因子光、溫度及光合作用可能是影響夏、秋茶品質(zhì)的關(guān)鍵因素。

目前關(guān)于夏秋季強(qiáng)光、高溫等環(huán)境因素對(duì)茶品質(zhì)成分影響的研究較少，本試驗(yàn)以自然生長(zhǎng)的龍井43為材料，測(cè)定在日照強(qiáng)度、日平均溫度顯著不同的兩時(shí)間里，秋茶冠層處光強(qiáng)、葉片溫度、光合作用、主要品質(zhì)成分含量及品質(zhì)成分相關(guān)基因合成表達(dá)，從而初步明確光強(qiáng)、溫度及光合作用與秋茶品質(zhì)成分之間存在的聯(lián)系，為茶葉生產(chǎn)者在改善夏秋茶品質(zhì)方面提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與處理

試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所龍冠公司茶園中進(jìn)行，采用適制綠茶品種龍井 43為材料。在茶園中選擇受光均勻，無(wú)樹(shù)木遮蔽的連續(xù)3行（長(zhǎng)度為10 m）茶樹(shù)作為試驗(yàn)區(qū)。分別于2016年8月19日、9月23日（都為晴天）6時(shí)至18時(shí)每3 h測(cè)定冠層處光強(qiáng)，并隨機(jī)選取試驗(yàn)區(qū)12片茶樹(shù)新完全展開(kāi)葉（一般為第三葉）測(cè)定葉片溫度及相關(guān)光合指標(biāo)；6時(shí)至21時(shí)每3 h均勻地在試驗(yàn)區(qū)采集一芽二葉新梢樣，用于測(cè)定茶主要品質(zhì)成分含量和品質(zhì)相關(guān)合成基因表達(dá)。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.2.1 光合氣體交換

利用 LI-COR 6400xt型便攜式光合熒光測(cè)量系統(tǒng)在光照強(qiáng)度為 600 μmol·m-2·s-1、CO2濃度為 400 μmol·mol-1條件下測(cè)定茶樹(shù)冠層處新展開(kāi)葉片的凈光合速率、胞間 CO2濃度、氣孔導(dǎo)度及蒸騰速率，同時(shí)利用外部光強(qiáng)探頭及葉室內(nèi)葉溫?zé)犭娕紲y(cè)定冠層處光強(qiáng)及葉片的溫度。

1.2.2 茶多酚、游離氨基酸及咖啡堿含量測(cè)定

茶多酚含量測(cè)定參照GB/T 8313—2008。游離氨基酸、咖啡堿含量測(cè)定參照GB/T 8314—2013及GB/T 8312—2013有所改進(jìn)。上清液浸提方法：準(zhǔn)確稱取1.0000 g茶粉末于50 mL錐形瓶中，加入超純水 45 mL后轉(zhuǎn)入沸水浴中，浸提45 min（每隔10 min搖動(dòng) 1次）后立即趁熱減壓過(guò)濾，殘?jiān)脽岢兯礈?~5次。濾液冷卻后轉(zhuǎn)入 50 mL離心管中，用超純水定容至刻度，搖勻。

游離氨基酸測(cè)定方法：吸取0.1 mL上清液于10 mL離心管中，分別加入50 μL 2%茚三酮、50 μL pH 8.0的磷酸緩沖液，沸水浴中加熱15 min后在冰水中快速冷卻，然后加入4.8 mL超純水，搖勻后在570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。茶咖啡堿含量測(cè)定：準(zhǔn)確吸取 5 mL溶液至50 mL離心管中，分別加入4 mL 0.01 mol·L-1鹽酸和2 mL 50%（w/v）的乙酸鉛溶液，然后用超純水定容至刻度，靜置澄清過(guò)濾。準(zhǔn)確吸取濾液25 mL至50 mL離心管中，加入0.1 mL 4.5 mol·L-1硫酸溶液，加水稀釋至刻度，混勻，靜置澄清過(guò)濾。濾液在274 nm處測(cè)定吸光值。

吸光值的測(cè)定使用SHIMADZU UV-2550分光光度計(jì)。

1.2.3 茶樹(shù)總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

使用TIANGEN RNAprep pure Plant Kit（離心柱型）試劑盒，根據(jù)推薦步驟提取茶樹(shù)葉片的總RNA?？俁NA濃度及質(zhì)量的測(cè)定使用NaNoDrop2000超微量分光光度計(jì)（中國(guó)香港，Gene Company Limited）。使用ReverTra Ace qPCR RT試劑盒（日本，TOYOBO）將提取的葉片總RNA根據(jù)推薦步驟進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA模板。

1.2.4 基因表達(dá)

qRT-PCR（Quantitative real time-PCR，熒光實(shí)時(shí)定量PCR）使用StepOnePlus Real-Time PCR System儀器（美國(guó)，Applied Biosystems公司）進(jìn)行。20 μL 反應(yīng)體系中包括 10 μL SYBR Green Master Mix熒光染料（中國(guó)，Vazyme），濃度稀釋為 10 μmol·L-1的正、反向引物各 0.4 μL，0.4 μL ROX，2 μL cDNA 模板及 6.8 μL滅菌超純水。PCR采用兩步法標(biāo)準(zhǔn)程序，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性 10 s，65℃延伸 40 s，擴(kuò)增 40個(gè)循環(huán)?；蛳鄬?duì)表達(dá)量計(jì)算參照Livak等方法[16]。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SAS 8.1及SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行顯著性差異及相關(guān)性分析，Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物序列，Origin 7.5作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶樹(shù)冠層光強(qiáng)和葉片溫度的變化

茶樹(shù)冠層葉片處的光強(qiáng)及葉片溫度直接受外界環(huán)境光強(qiáng)及空氣溫度的影響，也是直接影響茶樹(shù)新梢生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵因素。從6時(shí)至18時(shí)，茶樹(shù)冠層處光照強(qiáng)度和葉片溫度均呈先升高后降低的趨勢(shì)。8月19日及9月23日光照強(qiáng)度在正午 12時(shí)達(dá)到最大值，分別為1649.3、1467.7 μmol·m-2·s-1，隨后迅速下降（圖1-A）。兩者的葉片溫度在12時(shí)至15時(shí)內(nèi)穩(wěn)定維持當(dāng)天最高值，分別約為42.8℃、34.2℃，前者最高溫比后者高約 8.6℃（圖 1-B）。通過(guò)圖1可知，8月 19日冠層處光強(qiáng)與葉片溫度顯著高于9月23日同一時(shí)間點(diǎn)的冠層處光強(qiáng)和葉片溫度。

2.2 茶樹(shù)冠層功能葉片光合參數(shù)的變化

光合作用是碳代謝的重要部分，植物體內(nèi)的糖、淀粉等碳水化合物和氨基酸、蛋白等含氮化合物都直接或間接地來(lái)源于光合作用。此外，植物體內(nèi)的碳氮代謝還需要光合作用提供能量。測(cè)定8月19日及9月23日茶樹(shù)新展開(kāi)功能葉的凈光合速率發(fā)現(xiàn)，前者凈光合速率在6 時(shí)至 9 時(shí)最大，約為 10 μmol·m-2·s-1，其光合作用強(qiáng)度在12時(shí)顯著降低，至18時(shí)凈光合速率下降為 0.77 μmol·m-2·s-1；后者凈光合速率變化呈現(xiàn)典型的“單峰型”，峰值在上午9時(shí)，約 13.37 μmol·m-2·s-1（圖 2-A）。9 時(shí)至 18時(shí)前，后者光合作用強(qiáng)度顯著高于前者。不同時(shí)間點(diǎn)茶樹(shù)葉片的氣孔導(dǎo)度如圖 2-B所示，8月19日葉片氣孔導(dǎo)度最大值在9時(shí)至12時(shí)，約 0.11 mol·m-2·s-1；9 月23 日6~12 時(shí)，氣孔導(dǎo)度逐漸上升至最大值，約 0.17 mol·m-2·s-1。前者氣孔導(dǎo)度在15時(shí)之前顯著低于后者。圖2-C為不同時(shí)間點(diǎn)茶樹(shù)葉片的胞間 CO2濃度。8月19日葉片胞間CO2濃度在6時(shí)、9時(shí)、15時(shí)有最低值，12時(shí)和18時(shí)存在顯著上升；9月23日其趨勢(shì)變化較明顯，在9時(shí)、15時(shí)存在胞間 CO2濃度的當(dāng)天最低值，6時(shí)、18時(shí)其濃度相對(duì)較高。8月19日和9月23日的茶樹(shù)葉片蒸騰速率在中午12時(shí)達(dá)到最大值，約為3.70 mmol·m-2·s-1，9 時(shí)、15 時(shí)前者蒸騰速率顯著高于后者（圖2-D）。

2.3 茶樹(shù)一芽二葉品質(zhì)成分的變化

圖1 茶樹(shù)冠層光強(qiáng)和葉片溫度的變化Fig. 1 The changes of luminous intensity and leaf temperature of tea canopy

圖2 茶樹(shù)冠層功能葉片光合參數(shù)的變化Fig. 2 The changes of photosynthesis parameters of tea functional leaves

茶葉中的茶多酚、游離氨基酸、咖啡堿是影響茶葉品質(zhì)的主要成分，三者的含量及比例直接影響茶葉的滋味品質(zhì)[17]。由圖3-A可知，8月19日6時(shí)至21時(shí)茶樹(shù)一芽二葉中茶多酚含量在 15時(shí)達(dá)到最大值，約為 32.41%，21時(shí)下降至28.59%。9月23日茶多酚含量在9時(shí)、12最高，范圍在14.94%~15.41%，21時(shí)含量下降至 12.68%。前者茶多酚含量是后者同一時(shí)間茶多酚含量1.9~2.3倍。8月19日游離氨基酸含量整體維持在2.09%~2.29%，但9月23日的含量變化幅度相對(duì)較大，不同時(shí)間點(diǎn)游離氨基酸含量分別為 3.93%、3.60%、3.76%、3.87%、3.96%、3.12%（圖3-B）。利用茶多酚及游離氨基酸含量的比值，獲得酚氨比（圖3-C）。結(jié)果顯示 8月 19日酚氨比維持在很高的水平，約13.27~14.75；9月23日酚氨比相對(duì)較低，范圍在 3.57~4.24。前者酚氨比是后者的3.14~4.09倍。圖3-D所示為茶葉片中咖啡堿含量，發(fā)現(xiàn)8月19日咖啡堿含量顯著高于9月23日。前者不同時(shí)間點(diǎn)咖啡堿含量分別為3.81%、2.92%、2.90%、3.00%、3.01%、2.62%，在上午 6時(shí)開(kāi)始下降。后者咖啡堿含量分別為 2.37%、2.47%、2.61%、2.12%、2.09%、1.97%，在 12時(shí)達(dá)最大值后開(kāi)始降低。

2.4 茶樹(shù)冠層處光強(qiáng)、葉片溫度與光合作用參數(shù)、品質(zhì)成分含量相關(guān)性分析

將8月19日、9月23日6時(shí)至18時(shí)茶樹(shù)冠層處光強(qiáng)、葉片溫度、光合作用參數(shù)與品質(zhì)成分含量進(jìn)行相關(guān)性分析（表1）。結(jié)果表明，茶樹(shù)冠層處光強(qiáng)與葉片溫度顯著相關(guān)，同時(shí)影響茶樹(shù)葉片的氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率及胞間 CO2濃度，相關(guān)性系數(shù)分別為 0.659、0.409、–0.597和0.885。葉片溫度與凈光合速率負(fù)相關(guān)，與蒸騰速率正相關(guān)。同時(shí)，葉片溫度與品質(zhì)成分茶多酚、氨基酸含量及酚氨比分別有0.604、–0.691、0.676的顯著相關(guān)性。另外，茶樹(shù)主要品質(zhì)成分含量之間也具有顯著的相關(guān)關(guān)系。茶多酚含量與酚氨比、咖啡堿含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.960、0.802；與氨基酸含量負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為–0.939。氨基酸含量與酚氨比、咖啡堿含量呈顯著負(fù)相關(guān)。酚氨比與咖啡堿含量顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.800。

圖3 茶樹(shù)一芽二葉品質(zhì)成分含量的變化Fig. 3 The changes of tea quality components in two leaves and one bud shoot

表1 茶樹(shù)冠層處光強(qiáng)、葉片溫度與光合參數(shù)、品質(zhì)成分含量之間的相關(guān)性分析Table 1 Correlation analysis of luminous intensity, leaf temperature, net photosynthesis rate andquality component contents

2.5 茶樹(shù)冠層處光強(qiáng)、葉片溫度、凈光合速率與品質(zhì)成分基因表達(dá)水平的相關(guān)性分析

為在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)一步明確光強(qiáng)、葉片溫度、凈光合速率是否與品質(zhì)成分相關(guān)合成基因表達(dá)存在聯(lián)系，通過(guò)GenBank中登錄的有關(guān)茶多酚[18-19]、氨基酸[20-21]及咖啡堿[22]合成基因的序列信息，設(shè)計(jì)相關(guān)引物（表2）。以CsPTB為內(nèi)參基因[23]，8月19日6時(shí)的表達(dá)量為對(duì)照，得到8月19日與9月23日不同時(shí)間點(diǎn)相關(guān)基因表達(dá)數(shù)據(jù)。利用基因表達(dá)數(shù)據(jù)與光強(qiáng)、葉片溫度、凈光合速率及品質(zhì)成分含量進(jìn)行相關(guān)性分析（表3）。

結(jié)果表明，基因CsPAL、CsCHI、CsF3′5′H、CsDFR、CsANS、CsUFGT、CsLAR的表達(dá)水平與秋茶茶多酚含量顯著相關(guān)，其中CsPAL、CsANS、CsLAR與茶多酚含量的相關(guān)系數(shù)分別為 0.603、0.469、0.425，而CsCHI、CsF3′5′H、CsDFR、CsUFGT與茶多酚含量的相關(guān)系數(shù)分別為–0.683、–0.754、–0.696、–0.870。基因CsGDH、CsGS、CsGOGAT、CsTS1及CsTS2與秋茶氨基酸含量的顯著相關(guān)系數(shù)分別為 0.559、–0.427、0.413、0.882、–0.445?；駽sTIDH、CssAMS與咖啡堿含量具有顯著相關(guān)性，相關(guān)性系數(shù)分別為–0.421、0.503。在上述基因中進(jìn)一步篩選，表達(dá)量與葉片溫度顯著相關(guān)的分別是CsPAL、CsF3′5′H、CsANS、CsUFGT、CsGS、CsGOGAT及CsTS1；與光強(qiáng)顯著相關(guān)的是基因CsPAL、CsANS、CsGS、CsTS1、CsTS2及CssAMS；與凈光合速率顯著相關(guān)的基因是CsF3′5′H、CsANS、CsUFGT、CsGOGAT及CsTS2。

3 討論

在茶園生態(tài)系統(tǒng)中，光、CO2濃度、溫度、水分是影響茶樹(shù)光合作用的主要生態(tài)因子，葉片溫度、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度及蒸騰速率是影響茶樹(shù)光合作用的主要生理因子[24]。本研究發(fā)現(xiàn)，秋茶生長(zhǎng)期典型的強(qiáng)光、高溫環(huán)境下，冠層處光強(qiáng)并不是影響秋茶凈光合速率的直接因素，而與冠層處光強(qiáng)有顯著相關(guān)性的葉片溫度、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度是影響秋茶凈光合速率的關(guān)鍵生理因子。葉片胞間CO2濃度與氣孔導(dǎo)度密切相關(guān)，兩者的變化共同反映出凈光合速率主要受氣孔限制還是葉肉細(xì)胞活性限制[25]。由圖2-C可知，秋茶凈光合速率的下降伴隨著胞間CO2濃度的提高，此時(shí)葉肉細(xì)胞光合活性成為秋茶光合作用的主要限制因素。因此，秋茶葉片溫度以及葉肉細(xì)胞光合活性成為影響其凈光合速率的關(guān)鍵因素。

表2 茶樹(shù)茶多酚、氨基酸、咖啡堿合成相關(guān)基因的實(shí)時(shí)熒光定量引物序列Table 2 Primer sequences of genes related to the biosynthesis of tea catechins, amino acids and caffeine for qRT-PCR

表3 茶樹(shù)品質(zhì)成分合成基因表達(dá)與冠層處光強(qiáng)、葉片溫度及凈光合速率的相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of the expressions of genes involved in quality component biosynthesis, the luminous intensity, leaf temperature and net photosynthesis rate

光、溫度不僅影響茶樹(shù)光合作用，同時(shí)也直接參與調(diào)控茶樹(shù)次生代謝途徑中一些關(guān)鍵基因的表達(dá)。李麗田[26]研究表明，光強(qiáng)影響茶樹(shù)兒茶素的組分含量并且多數(shù)兒茶素合成相關(guān)基因的表達(dá)受光強(qiáng)的影響，但不同基因?qū)鈴?qiáng)的響應(yīng)模式不同。表3研究結(jié)果顯示，秋茶冠層處光強(qiáng)可能對(duì)兒茶素合成基因CsPAL、CsCHS、CsANS、CsANR存在顯著誘導(dǎo)作用。目前，光對(duì)氨基酸、咖啡堿代謝調(diào)控的研究報(bào)道相對(duì)較少，本研究發(fā)現(xiàn)，冠層處光強(qiáng)可能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因CsGS、CsTS1、CsTS2及CssAMS的表達(dá)。值得注意的是，冠層處光強(qiáng)與秋茶茶多酚、氨基酸及咖啡堿含量沒(méi)有顯著相關(guān)性，因此，光強(qiáng)雖然對(duì)秋茶部分品質(zhì)相關(guān)基因存在轉(zhuǎn)錄調(diào)控，但可能不是影響最終品質(zhì)成分含量的關(guān)鍵因素。

有研究證明，晝夜溫度為15℃/5℃的低溫環(huán)境下，銀杏葉片中類黃酮總量，PAL、C4H及4CL活性顯著提高[27]；葡萄果實(shí)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果證實(shí)，溫度對(duì)類黃酮代謝途徑可能存在轉(zhuǎn)錄后或翻譯后調(diào)控[28]。但是，目前關(guān)于溫度對(duì)茶樹(shù)次生代謝產(chǎn)物的影響還未見(jiàn)報(bào)道。表1和表3結(jié)果證明，秋茶葉片的溫度可能在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控兒茶素合成基因CsPAL、CsF3′5′H、CsANS、CsUFGT與氨基酸合成基因CsGS、CsGOGAT、CsTS1的表達(dá)，進(jìn)而影響秋茶茶多酚、氨基酸的合成積累。咖啡堿合成基因CsTCS1的表達(dá)雖與葉片溫度相關(guān)系數(shù)達(dá)0.511，但與咖啡堿含量無(wú)直接相關(guān)性。因此，在合成基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面，葉片溫度可能不是影響秋茶咖啡堿合成的關(guān)鍵因素。

光合作用是葡萄糖、果糖、蔗糖等物質(zhì)的主要來(lái)源。許多研究報(bào)道糖作為碳源和能源或信號(hào)分子促進(jìn)類黃酮物質(zhì)的合成[29-30]，同時(shí)調(diào)控類黃酮途徑中PAL、C4H、4CL、CHS、DFR、F3H、UF3GT等基因表達(dá)[31]。表3結(jié)果顯示，秋茶光合作用的強(qiáng)弱與部分品質(zhì)基因的表達(dá)水平有顯著的相關(guān)性，糖類是否也作為碳源或信號(hào)分子對(duì)秋茶兒茶素、氨基酸某些合成相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)控是值得深入研究的科學(xué)問(wèn)題。

隨著全球極端氣候變化越來(lái)越明顯，夏、秋季持續(xù)的高溫天氣越來(lái)越普遍[32-33]，明確光、溫度等主要環(huán)境因素對(duì)茶樹(shù)光合作用、品質(zhì)成分的影響及調(diào)控機(jī)制能進(jìn)一步幫助生產(chǎn)者采取有效管理措施在生產(chǎn)栽培上預(yù)防極端天氣對(duì)茶樹(shù)生長(zhǎng)的影響，有利于茶產(chǎn)業(yè)更好地發(fā)展。

[1] 陸文淵, 樓黎靜, 錢文春. 湖州市夏秋茶資源的開(kāi)發(fā)和利用[J]. 茶葉學(xué)報(bào), 2011(3): 22-24.

[2] 何小慶. 夏秋茶資源開(kāi)發(fā)利用現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2011(16): 361-362.

[3] 郭敏明, 余繼忠, 師大亮, 等. 杭州市夏秋茶生產(chǎn)現(xiàn)狀及對(duì)策建議[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 1(6): 1268-1271.

[4] 楊亞軍. 中國(guó)茶樹(shù)栽培學(xué)[M]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 2005: 116-121.

[5] 李治鑫, 李鑫, 范利超, 等. 高溫脅迫對(duì)茶樹(shù)葉片光合系統(tǒng)的影響[J]. 茶葉科學(xué), 2015, 35(5): 415-422.

[6] 宛曉春, 夏濤. 茶樹(shù)次生代謝[M]. 北京: 科學(xué)出版社,2015: 51-100.

[7] 陸春蓮, 章卓梁, 胡江波, 等. 夏季茶樹(shù)覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)改善夏秋茶品質(zhì)試驗(yàn)研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2014(18): 18.

[8] 付曉青, 陳佩, 秦志敏, 等. 遮蔭處理對(duì)丘陵茶園生態(tài)環(huán)境及茶樹(shù)氣體交換的影響[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2011,27(8): 40-46.

[9] 石元值, 方麗, 呂潤(rùn)強(qiáng). 樹(shù)冠微域環(huán)境對(duì)茶樹(shù)碳氮代謝的影響[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào), 2014(5): 1250-1261.

[10] 王玉花, 秦志敏, 肖潤(rùn)林, 等. 遮光水平對(duì)丘陵茶園茶葉生長(zhǎng)指標(biāo)和品質(zhì)的影響[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究, 2011, 29(2):48-53.

[11] 陳佩. 茶園遮光效應(yīng)及其對(duì)茶樹(shù)光合作用和茶葉品質(zhì)成分的影響[D]. 長(zhǎng)沙: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010: 8-24.

[12] Zhao T T, Liu S H, Yan S J et al. Effects of intercropping and shading systems on tea photosynthesis and respiration[J]. Agricultural Science & Technology, 2016, 17(10):2225-2227.

[13] 肖潤(rùn)林, 王久榮, 單武雄, 等. 不同遮蔭水平對(duì)茶樹(shù)光合環(huán)境及茶葉品質(zhì)的影響[J]. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2007,15(6): 6-11.

[14] 田紀(jì)春, 王學(xué)臣, 劉廣田. 植物的光合作用與光合氮、碳代謝的耦聯(lián)及調(diào)節(jié)[J]. 生命科學(xué), 2001, 13(4): 145-147.

[15] 陳錦強(qiáng), 李明啟. 高等植物綠葉中的氮素代謝與光合作用的關(guān)系[J]. 植物生理學(xué)報(bào), 1984(1): 3-10, 23.

[16] Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method [J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408.

[17] 施兆鵬. 茶葉審評(píng)與檢驗(yàn)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2010: 59-62.

[18] Liu M, Tian H L, Wu J H, et al. Relationship between gene expression and the accumulation of catechin during spring and autumn in tea plants (Camellia sinensisL.) [J].Horticulture Research, 2015, 2(1): 15011. Doi:10.1038/hortres.

[19] 李治鑫. CO2濃度升高和高溫脅迫對(duì)茶樹(shù)生長(zhǎng)發(fā)育的影響[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2016: 27.

[20] 林鄭和, 鐘秋生, 陳常頌. 茶樹(shù)葉片GDH、GS、GOGAT基因的克隆及熒光定量 PCR分析[J]. 茶葉科學(xué), 2012,32(6): 523-529.

[21] Deng W W, Ogita S, Ashihara H. Biosynthesis of theanine(γ-ethylamino- l -glutamic acid) in seedlings ofCamellia sinensis[J]. Phytochemistry Letters, 2008, 1(2): 115-119.

[22] 李金, 魏艷麗, 龐磊, 等. 茶樹(shù)咖啡堿合成途徑中TCS1、TIDH、SAMS的基因表達(dá)量差異及其與咖啡堿含量的相關(guān)性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(10): 21-24.

[23] Hao X Y, Horvath D P, Chao W S, et al. Identification and evaluation of reliable reference genes for quantitative real-time PCR analysis in tea plant (Camellia sinensis(L.)O. Kuntze) [J]. International Journal of Molecular Sciences, 2014, 15(12): 22155-22172.

[24] 孫君, 朱留剛, 林志坤, 等. 茶樹(shù)光合作用研究進(jìn)展[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2015, 30(12): 1231-1237.

[25] 王靜. 桂花凈光合作用與環(huán)境因子和生理因子的關(guān)系[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(20): 10985-10987.

[26] 李麗田. 光對(duì)茶樹(shù)兒茶素合成的影響[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2015: 17-26.

[27] Wang G, Cao F, Chang L, et al. Temperature has more effects than soil moisture on biosynthesis of flavonoids in Ginkgo (Ginkgo biloba, L.) leaves [J]. New Forests, 2014,45(6): 797-812.

[28] Pastore C, Santo S D, Zenoni S, et al. Whole plant temperature manipulation affects flavonoid metabolism and the transcriptome of grapevine berries [J]. Frontiers in Plant Science, 2017, 8: 1-16. DOI:10.3389/fpls.2017.00929.

[29] Baier M, Smith C, Rook F, et al. Characterization of mutants inArabidopsisshowing increased sugar-specific gene expression, growth, and developmental responses [J].Plant Physiology, 2004, 134(1): 81-91.

[30] Ohto M, Onai K, Furukawa Y, et al. Effects of sugar on vegetative development and floral transition inArabidopsis[J]. Plant Physiology, 2001, 127(1): 252-261.

[31] Solfanelli C, Perata P. Sucrose-specific induction of the anthocyanin biosynthetic pathway inArabidopsis[J]. Plant Physiology, 2006, 140(2): 637-646.

[32] 唐恬, 金榮花, 彭相瑜, 等. 2013年夏季我國(guó)南方區(qū)域性高溫天氣的極端性分析[J]. 氣象, 2014, 40(10):1207-1215.

[33] 陳曉晨, 徐影, 姚遙. 不同升溫閾值下中國(guó)地區(qū)極端氣候事件變化預(yù)估[J]. 大氣科學(xué), 2015, 39(6): 1123-1135.