常 波，鄭錫明，李 晶，高 暢，孫玉霞，姚婷婷，李 歌，衣雪潔

（1．沈陽體育學(xué)院國家體育總局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 沈陽 110102；2．沈陽體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)學(xué)院，遼寧 沈陽 110102；3．沈陽體育學(xué)院研究生部，遼寧 沈陽 110102）

近年來，國內(nèi)外患有生育障礙的患者數(shù)目急劇升高，其中肥胖導(dǎo)致的生殖功能低下的現(xiàn)象已引起大家的廣泛關(guān)注。最近對人類和其他物種的研究表明，長期肥胖會(huì)使雄性性腺機(jī)能減退（secondary hypogonadotropic），表現(xiàn)為雄性激素分泌不足、雌激素水平升高、精子質(zhì)量參數(shù)下降和生殖功能出現(xiàn)障礙［1－2］，但其作用的機(jī)制尚不清楚。有研究顯示肥胖引起的雄性生殖功能障礙與生精細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，雄性動(dòng)物睪丸內(nèi)生精細(xì)胞凋亡是正常的生理狀態(tài)［2］，但由于一些特殊的理化因素導(dǎo)致其大量凋亡，直接影響精子的生成數(shù)量和質(zhì)量。調(diào)控細(xì)胞凋亡的主要途徑有3種：死亡受體途徑、線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的一類蛋白水解酶，是細(xì)胞凋亡過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，在細(xì)胞凋亡中起著不可替代的作用，參與了細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)，是CTL細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分。作為死亡受體途徑中最后的公共凋亡效應(yīng)因子，可引發(fā)生殖細(xì)胞程序性死亡，一旦被大量激活，凋亡就不可避免。研究發(fā)現(xiàn)肥胖可影響睪丸組織中Caspase-3的水平，進(jìn)而導(dǎo)致生殖細(xì)胞大量凋亡。

運(yùn)動(dòng)作為目前公認(rèn)的治療肥胖最為有效的手段之一，對雄性激素的影響還有很大的爭議，運(yùn)動(dòng)形式、運(yùn)動(dòng)量和運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的差異可能會(huì)帶來不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有關(guān)有氧運(yùn)動(dòng)對緩解肥胖個(gè)體的生殖細(xì)胞凋亡的影響報(bào)道還較少，進(jìn)一步研究引發(fā)的凋亡機(jī)制則更少。為此，通過施加有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)改善大鼠的肥胖狀態(tài)，并通過中樞和外周兩條途徑探討肥胖狀態(tài)下有氧運(yùn)動(dòng)對雄性生殖機(jī)能作用機(jī)制，力圖為揭示有氧運(yùn)動(dòng)影響精子質(zhì)量的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為探究防治肥胖引起的生殖機(jī)能低下的有效途徑提供理論參考。

1 研究對象與方法

1．1 研究對象

24只5周齡雄性SD大鼠，購于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部。依據(jù)北京大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物倫理標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)督執(zhí)行。飼養(yǎng)溫度為（22±2）℃，分籠飼養(yǎng)，自由飲水。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 肥胖模型的制備

24只SD雄性大鼠隨機(jī)分成2組，各12只，即正常飲食組（普通飼料）和高脂飲食組（高脂飼料）。分別為大鼠提供普通飼料和高脂飼料，飼養(yǎng)12周。高脂飲食組肥胖鼠建模成功后，將正常飲食組和肥胖（高脂飲食）組大鼠分別按照體重分層抽樣再各自分為兩組，即正常對照組（NC，6只）、正常飼料運(yùn)動(dòng)組（NE，6只）和肥胖組（OC，6只）、肥胖運(yùn)動(dòng)組（OE，6只）。高脂組大鼠的體重均在正常組大鼠平均體重的120%以上，肥胖建模成功［3］。

1．2．2 分組運(yùn)動(dòng)干預(yù)

兩組運(yùn)動(dòng)組（正常運(yùn)動(dòng)組和肥胖運(yùn)動(dòng)組）共進(jìn)行為期8周的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)。正式運(yùn)動(dòng)開始前進(jìn)行為期一周的適應(yīng)性訓(xùn)練，以減少正式實(shí)驗(yàn)時(shí)的應(yīng)激反應(yīng)。起始時(shí)間為20 min，跑臺(tái)速度設(shè)定為26 m／min，以后每天增加10 min，逐漸增加到60 min／d為止。保持這一負(fù)荷進(jìn)行8周跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，每周休息1 d。

1．2．3 樣品的取材及處理

8周運(yùn)動(dòng)干預(yù)結(jié)束后，在末次運(yùn)動(dòng)后36～40 h取材，取材前禁食12 h。麻醉處死，迅速取兩側(cè)睪丸，用生理鹽水沖洗后用濾紙吸干，轉(zhuǎn)入液氮冷凍，以備實(shí)驗(yàn)使用。

1．2．4 測試指標(biāo)及方法

1．2．4．1 睪丸組織重量、睪丸系數(shù)與精子活率測定

1）將大鼠的雙側(cè)睪丸從陰囊中分離提取出來，電子天平上稱量：睪丸系數(shù)（%）＝（睪丸重量／體重）×100%。2）動(dòng)物處死后，迅速取一側(cè)附睪置于37℃生理鹽水2 mL小燒杯中，剪碎，再加入同等濃度的鹽水，并與生理鹽水以1比1的比例混合，經(jīng)濾紙過濾后，提取濾液1 mL，加入生理常溫下的生理鹽水9 mL，混勻備用。取精子懸液中一滴放置于載玻片上，加蓋玻片后，光鏡觀察精子的活動(dòng)能力。依照世界衛(wèi)生組織，觀察精子的流動(dòng)狀態(tài)與形式，可把精子的活動(dòng)度大致分為4個(gè)級別：1級：精子可以保持直線運(yùn)動(dòng)水平并且活動(dòng)踴躍，觀察到活動(dòng)性優(yōu)良。2級：基本可以保持直線運(yùn)動(dòng)，但與1級比較活動(dòng)性略差。3級：精子保持直接向前運(yùn)動(dòng)的能力弱，只能在原處活動(dòng)或旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。4級：精子無任何運(yùn)動(dòng)能力。實(shí)驗(yàn)的每只大鼠都需要檢查大概200個(gè)精子，然后計(jì)算精子的活率：精子活率＝（1＋2＋3級精子數(shù)／1＋2＋3＋4級精子數(shù)）×100%。

1．2．4．2 組織提取和RT-PCR檢測 1）樣品RNA的提取。①將睪丸樣品從－80℃冰箱中取出，馬上在天平上進(jìn)行稱重。然后在正常室溫條件下放置5 min，待其充分溶解（將實(shí)驗(yàn)中所用的鑷子、剪刀、勻漿器均進(jìn)行無菌消毒后用DEPC水處理）。②分離RNA。③低溫離心。④RNA沉淀。⑤清洗RNA。⑥干燥RNA。⑦溶解RNA沉淀。2）檢測樣品濃度，使用微量分光光度計(jì)。3）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。依據(jù)Hiscript?IIOne Step qRT-PCR SYBR?Green試劑盒說明書，嚴(yán)格按照說明書完成整個(gè)設(shè)定步驟的實(shí)驗(yàn)工作。4）引物序列：實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增引物序列，從PubMed數(shù)據(jù)庫查詢得到。引物具體序列見表1。

表1 RT-PCR反應(yīng)相關(guān)引物的序列

1．2．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±S）表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析的Scheffe’s Post hoc comparisons test。OC、OE組采用雙因素方差分析來闡明運(yùn)動(dòng)和飲食干預(yù)對雄性肥胖大鼠生殖功能及睪丸組織基因表達(dá)的交互作用，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：P＜0．05為組間差異顯著，P＜0．01為組間差異極顯著。

2 研究結(jié)果

2．1 各組大鼠體重、脂體比、睪丸重量、睪丸系數(shù)

由表2可知，通過8周的有氧運(yùn)動(dòng)，大鼠的肥胖情況有所減輕，睪丸系數(shù)上升，說明有氧運(yùn)動(dòng)可以減重，緩解了肥胖對睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，同時(shí)有氧運(yùn)動(dòng)對于正常狀態(tài)下機(jī)體的睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)也有明顯的改善作用。

表2 各組大鼠體重、睪丸重量、睪丸系數(shù)、脂體比情況（ˉX±S）

2．2 各組大鼠精子質(zhì)量參數(shù)

如表3所示，經(jīng)過20周高脂膳食喂養(yǎng)后的肥胖大鼠精子活性與精子數(shù)量明顯下降，說明肥胖會(huì)對生殖功能造成影響。8周有氧運(yùn)動(dòng)能夠較好地增強(qiáng)與改善正常和肥胖大鼠的精子活性，提高生殖能力。

表3 各組大鼠精子活動(dòng)率的變化情況（ˉX±S）

2．3 各組大鼠睪丸組織中的TNF-α、Fas、Caspase-3 mRNA的表達(dá)

如表4和圖1所示，與正常組的大鼠相比，正常運(yùn)動(dòng)組的大鼠睪丸中TNF-α、Fas、Caspase-3的基因轉(zhuǎn)錄水平均顯著性降低（P＜0．05）；肥胖組大鼠睪丸組織中的TNF-α、Fas、Caspase-3的基因轉(zhuǎn)錄水平均顯著性升高（P＜0．05、P＜0．01、P＜0．01）。同肥胖組的大鼠相比較，肥胖運(yùn)動(dòng)組的大鼠睪丸組織中的TNF-α、Fas、Caspase-3基因轉(zhuǎn)錄水平均明顯降低（P＜0．01、P＜0．05、P＜0．01）。同正常運(yùn)動(dòng)組相比，肥胖運(yùn)動(dòng)組的大鼠睪丸組織中的TNF-α、Fas、Caspase-3基因轉(zhuǎn)錄水平顯著性提升（P＜0．01、P＜0．01、P＜0．05）。

表4 各組大鼠睪丸組織TNF-α、Fas、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平（±S）

表4 各組大鼠睪丸組織TNF-α、Fas、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平（±S）

Fas Caspase-3 NC組組別N TNF-α 6 1±0．14 1±0．10 1±0．14 NE組6 0．81±0．14*0．86±0．08*0．82±0．12*OC組6 1．74±0．15*1．41±0．11**1．39±0．16**OE組6 1．43±0．12△△＃＃1．20±0．15△＃＃1．13±0．15△△＃

圖1 TNF-α、Fas、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平

3 分析與討論

3．1 有氧運(yùn)動(dòng)對肥胖大鼠生殖功能的影響

睪丸作為雄性動(dòng)物最重要的生殖器官，其發(fā)育與成熟狀況將對雄性生殖能力產(chǎn)生很大的影響［4－9］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肥胖組大鼠體重、脂體比明顯提高，前期研究發(fā)現(xiàn)肥胖組體內(nèi)血清睪酮、黃體生成素與卵泡刺激素水平明顯降低，雌二醇明顯升高［3］；睪丸系數(shù)、精子數(shù)目和精子活動(dòng)率顯著降低；而肥胖運(yùn)動(dòng)組大鼠的體重、脂體比明顯下降。前期研究還發(fā)現(xiàn)血清睪酮、黃體生成素與卵泡刺激素的含量有顯著性升高，雌二醇明顯下降［3］；睪丸系數(shù)、精子數(shù)目和精子活動(dòng)率均顯著上升，提示運(yùn)動(dòng)可改善睪丸的形態(tài)結(jié)構(gòu)。運(yùn)動(dòng)作為一種減脂的手段，不僅能通過增加能量消耗和基礎(chǔ)代謝來降低體重，可能還會(huì)因此而改善睪丸功能。

李玲［10］在研究中發(fā)現(xiàn)肥胖使大鼠生精細(xì)胞大量下降且排列紊亂、結(jié)構(gòu)異常，同時(shí)還會(huì)影響生精功能，精子異常比率顯著高于普通組。徐慶陽［9］研究發(fā)現(xiàn)肥胖使精子數(shù)目與活動(dòng)力均有下降的現(xiàn)象。臨床研究也發(fā)現(xiàn)肥胖人群存在精子數(shù)目和質(zhì)量下降、生精功能受損等現(xiàn)象［12］。肥胖造成精子質(zhì)量下降的主要原因，在于肥胖會(huì)影響下丘腦—睪丸—性腺軸（HPT）的功能，長期的高熱量攝入使得雄性機(jī)體的脂肪組織大量聚集，過量堆積的脂肪能夠通過芳香化作用使雄性激素雌性化，導(dǎo)致雌激素含量上升，反饋性抑制HPT軸的功能，造成生精障礙。同時(shí)體內(nèi)精子的發(fā)生與睪酮有著重要的關(guān)系。在生精小管內(nèi)維持適量的睪酮水平能夠有助于精子的產(chǎn)生與成熟。有研究表明［6］，隨著BMI的上升，男性血清睪酮的水平有下降的趨勢，同時(shí)精子密度也相應(yīng)減少。

運(yùn)動(dòng)對機(jī)體是一種應(yīng)激刺激，會(huì)引起一系列神經(jīng)－內(nèi)分泌的改變。有研究發(fā)現(xiàn)［9］，運(yùn)動(dòng)雖不能顯著提升睪丸的重量，但可明顯提升睪丸系數(shù)。賈斯媛［13］發(fā)現(xiàn)游泳運(yùn)動(dòng)會(huì)使肥胖雄性小鼠黃體生成素和卵泡刺激素顯著增加，分析可能由于運(yùn)動(dòng)使肥胖雄性小鼠體內(nèi)的GnRH得到良性刺激，進(jìn)而促進(jìn)其分泌黃體生成素和卵泡刺激素。我們先前的研究發(fā)現(xiàn)［3］經(jīng)過中等負(fù)荷有氧運(yùn)動(dòng)后，肥胖運(yùn)動(dòng)組大鼠性激素水平有明顯上升，精子質(zhì)量顯著提高，提示運(yùn)動(dòng)使大鼠的促性腺激素釋放激素受到良性刺激，從而促進(jìn)黃體生成素和卵泡刺激素的合成與釋放，進(jìn)而刺激睪酮的分泌，改善了促進(jìn)精子發(fā)育的激素環(huán)境，提高了精子的質(zhì)量。

3．2 有氧運(yùn)動(dòng)對大鼠生精細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制

3．2．1 肥胖對大鼠生精細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制

已證實(shí)生殖細(xì)胞凋亡要借助兩大途徑：線粒體通路和死亡受體途徑，而Caspase-3作為死亡受體途徑中最后一個(gè)環(huán)節(jié)，在調(diào)控生殖細(xì)胞的凋亡上發(fā)揮了決定性的作用。目前，有關(guān)肥胖對Caspase-3的研究較少。郭銀謀［15］發(fā)現(xiàn)肥胖人群的乳腺癌組織Caspase-3的蛋白水平明顯高于正常體重組，且Caspase-3的水平與乳腺癌細(xì)胞凋亡之間存在正相關(guān)關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與正常組相比較，肥胖組大鼠的睪丸組織Caspase-3的水平顯著升高，精子數(shù)量明顯下降，提示肥胖可能會(huì)通過上調(diào)Caspase-3水平而增加生精細(xì)胞的凋亡。

腫瘤壞死因子（TNF-α）可激活死亡受體途徑，最終作用到Caspase-3，引發(fā)細(xì)胞凋亡。腫瘤壞死因子作為一種具有多種生物活性的細(xì)胞因子，除了脂肪組織是其主要來源外，近些年發(fā)現(xiàn)生殖細(xì)胞同樣也分泌腫瘤壞死因子，如支持細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞等。睪丸中的巨噬細(xì)胞、生精細(xì)胞能分泌大量TNF-α，可以影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮生物合成過程，通過參與精子的發(fā)生與凋亡，對生殖功能產(chǎn)生影響。目前研究證實(shí)［16］適宜水平的TNF-α可以正向調(diào)節(jié)睪丸的功能，而含量過高則容易抑制睪酮的生成，明顯降低睪丸生殖細(xì)胞的生存率，從而誘發(fā)其凋亡。有關(guān)肥胖對TNF-α的影響，多數(shù)認(rèn)為嚙齒類動(dòng)物脂肪中TNF-α都過量表達(dá)，肥胖可以促進(jìn)脂肪細(xì)胞表達(dá)釋放TNF-α。有學(xué)者［16］對單純性肥胖兒童的血液進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)TNF-α水平顯著高于正常兒童。動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)［7，15］與正常組大鼠相比較，肥胖組大鼠的TNF-α水平明顯升高，睪丸組織形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，可能與肥胖促進(jìn)TNF-α含量上升有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)同正常組相比，肥胖大鼠的睪丸組織中TNF-α的基因表達(dá)水平顯著上升，同時(shí)伴有睪酮水平下降和精子的數(shù)量、活力下降。

在哺乳動(dòng)物的睪丸組織中，TNF-α促進(jìn)生殖細(xì)胞程序性死亡，通過誘導(dǎo)死亡受體信號(hào)各級因子引發(fā)細(xì)胞凋亡。最典型的死亡受體是自殺相關(guān)因子（factor associated suicide，F(xiàn)as，也稱CD95或Apo1）。1989年Yonehara等發(fā)現(xiàn)了一株單克隆抗體，可以識(shí)別一種表達(dá)于髓樣細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞表面的未知分子，誘導(dǎo)多種人細(xì)胞系發(fā)生凋亡。這種新的膜分子被稱為Fas。同年，Trauth等也發(fā)現(xiàn)了一株可以誘導(dǎo)活化或惡性變淋巴細(xì)胞凋亡的單克隆抗體，他們將這株抗體所識(shí)別的蛋白稱為凋亡蛋白-1（Apo-1）。Fas屬于腫瘤壞死因子家族，是一個(gè)細(xì)胞表面分子，在凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。

Fasl是Fas的天然受體，能夠特異性地與靶細(xì)胞上的Fas結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Fas主要在胸腺及睪丸組織有所表達(dá)。有報(bào)道［19－20］若Fasl／Fas系統(tǒng)異常升高，TNF-α可通過生殖細(xì)胞膜上的Fas與其受體結(jié)合，形成能傳遞信號(hào)的三聚體。三聚體通過募集死亡結(jié)構(gòu)閾形成二聚體而發(fā)揮作用，凋亡作用明顯增強(qiáng)，最終通過激活Caspase-3引起生殖細(xì)胞大量凋亡，導(dǎo)致精子減少或發(fā)育障礙，甚至男性不育。馬?。?6］研究發(fā)現(xiàn)肥胖組大鼠睪丸組織中的Fas、Caspase-3水平顯著上升，生殖細(xì)胞凋亡率顯著升高。曹翔［19］等通過體外培育大鼠的內(nèi)皮細(xì)胞，并對其凋亡情況進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子可以提高內(nèi)皮細(xì)胞Fas的表達(dá)，在TNF-α作用下Fas表達(dá)加強(qiáng)，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在免疫性睪丸炎中，TNF-α可以提高Fas表達(dá)，引發(fā)生精細(xì)胞凋亡。可見生殖細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α可通過調(diào)節(jié)Fas水平從而控制其凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，肥胖組大鼠的睪丸組織中FasmRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，并且與TNF-α和Caspase-3 mRNA表達(dá)的增加相一致，推測肥胖可能會(huì)通過死亡受體途徑造成生殖細(xì)胞大量凋亡。武進(jìn)峰［20］等人對大鼠進(jìn)行10周的高脂喂養(yǎng)，造模成功后，對實(shí)驗(yàn)組大鼠的生殖細(xì)胞經(jīng)過RT-PCR和免疫組化測定后發(fā)現(xiàn)睪丸中Fas水平明顯大于對照組。李奇［17］也對肥胖大鼠睪丸中的Fas進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)同對照組進(jìn)行比較，F(xiàn)asmRNA含量顯著上升。

3．2．2 有氧運(yùn)動(dòng)對肥胖大鼠生精細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制

本研究發(fā)現(xiàn)Caspase-3在正常運(yùn)動(dòng)組和肥胖運(yùn)動(dòng)組大鼠的睪丸組織中基因轉(zhuǎn)錄水平顯著低于對照組，同時(shí)精子的數(shù)量顯著性增加，推測8周的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)緩解了睪丸生殖功能障礙，下調(diào)Caspase-3的水平，降低精子細(xì)胞的凋亡率。有研究表明［4］，對大鼠進(jìn)行12周的腳踏車運(yùn)動(dòng)，發(fā)現(xiàn)Caspase-3及上游的幾種促凋亡、抗凋亡蛋白水平發(fā)生了改變，凋亡程序中的關(guān)鍵因子Caspase-3下調(diào)到原來的95%。陳小燕［21］對高脂膳食大鼠施加游泳運(yùn)動(dòng)，發(fā)現(xiàn)與肥胖組相比，肥胖運(yùn)動(dòng)組的Caspase-3的基因水平顯著下降，同時(shí)大鼠的精子凋亡率明顯下降。推測8周的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)緩解了睪丸生殖功能障礙的情況，下調(diào)Caspase-3的水平，降低了精子細(xì)胞的凋亡率。

TNF-α可以誘導(dǎo)死亡受體途徑，最終作用到Caspase-3而影響精子細(xì)胞凋亡。有關(guān)運(yùn)動(dòng)對TNF-α影響的結(jié)果不盡一致。有研究表明連續(xù)高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)能夠使血漿TNF-α水平顯著提升。但有研究表明［1－2］持續(xù)鍛煉會(huì)使肥胖個(gè)體TNF-α水平明顯下降。陳小燕發(fā)現(xiàn)［21］10周漸增游泳運(yùn)動(dòng)的大鼠與普通安靜組相比，血清中的TNF-α水平降低。畢業(yè)［16］和胡玉龍［9］的研究也得到了類此結(jié)果。但是目前對于肥胖狀態(tài)下有氧運(yùn)動(dòng)對睪丸組織內(nèi)的TNF-α的基因表達(dá)研究尚少。本研究結(jié)果顯示正常運(yùn)動(dòng)組與肥胖運(yùn)動(dòng)組相比，睪丸組織中的TNF-α的mRNA基因表達(dá)較低；正常運(yùn)動(dòng)組TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄水平要比正常組低；肥胖運(yùn)動(dòng)組的TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄水平較肥胖組顯著下降，精子質(zhì)量顯著提升。

大量研究顯示［13－14］有氧運(yùn)動(dòng)可以降低睪丸組織中的TNF-α水平。但是有關(guān)運(yùn)動(dòng)對Fas轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)結(jié)果還不一致。有報(bào)道證實(shí)［10］一次性力竭運(yùn)動(dòng)能夠使大鼠FasmRNA水平增加，從而使生殖細(xì)胞凋亡率顯著上升。李奇［17］對肥胖大鼠施加有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)睪丸中Fas水平明顯下調(diào)的同時(shí)，終末剪切酶Caspase-3含量也有所降低，檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)睪丸組織中生精細(xì)胞凋亡率顯著下降。Caspase-3水平的降低減輕了其對生殖細(xì)胞凋亡的促發(fā)作用。本研究結(jié)果顯示與正常組和肥胖組相比，正常運(yùn)動(dòng)組和肥胖運(yùn)動(dòng)組睪丸TNF-α、Fas、Caspase-3 mRNA水平都明顯下降，精子數(shù)量增加，改善了睪丸生殖細(xì)胞大量凋亡的現(xiàn)象。提示有氧運(yùn)動(dòng)可以降低死亡受體途徑各級因子水平，減少對細(xì)胞凋亡最重要的終末剪切酶的促發(fā)作用，緩解了肥胖引起的生精細(xì)胞凋亡和雄性生殖功能障礙。

4 結(jié)論

1）飲食性肥胖可通過上調(diào)睪丸TNF-αmRNA表達(dá)，啟動(dòng)死亡受體途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制睪丸的發(fā)育，對雄性生殖功能造成負(fù)面影響。

2）長期有氧運(yùn)動(dòng)可降低TNF-αmRNA表達(dá)，抑制死亡受體途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，改善肥胖雄性大鼠對睪丸功能的負(fù)面影響，提升了正常雄性大鼠的生殖功能。

［1］J．Samavat，I．Natali，S．Degl’Innocenti，et al．Acrosome reaction is impaired in spermatozoa of obesemen：a preliminary study［J］．Fertility and sterility，2014，102：1274－1281．

［2］F．Hammiche，J．S．Laven，J．M．Twigt，et al．Body mass index and central adiposity are associated with sperm quality inmen of subfertile couples［J］．Human reproduction，2012，27：2365－2372．

［3］常波，趙大林，康媛，等．8周跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)干預(yù)對雄性肥胖大鼠生殖功能的影響［J］．廣州體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2016（6）：90－93．

［4］Villance．Voluntary wheel running decreases Adiponectinse tissue mass and expression of leption mRNA in casbome-mendelrats［J］．lipid，2014（49）：85－96．

［5］BE Levin，AA Dunn-Meynel．Differential effects of exercise on body weight gain and adiposity in obesity proneand resistantrats［J］．International Journal of Obesity，2006（30）：722－727．

［6］馬智，王富蘭，胡敏．體質(zhì)量指數(shù)腰圍及腰臀比對精子的影響［J］．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2014，30（13）：1927－1928，1932．

［7］FuiMN，Dupuis P，Grossmann M．Lo were d testosterone inmale obesity：mechanisms，morbidity and management［J］．Asian J Androl，2014（16）：223－231．

［8］Kort H I，Massey JB，ElsnerCW，et al．Impact of body mass index values on sperm quantity and quality［J］．JAndro，2006，27（3）：450－452．

［9］胡玉龍，李寧川，李奇，等．有氧運(yùn)動(dòng)及消脂散對高脂膳食誘導(dǎo)的大鼠睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變干預(yù)作用的研究［J］．實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2012，16（22）：5－8，13．

［10］李玲，李寧川，陸偉，等．有氧運(yùn)動(dòng)對高脂膳食誘導(dǎo)雄性大鼠生殖機(jī)能的干預(yù)作用［J］．實(shí)用臨床醫(yī)用雜志，2014，18（11）：10－13．

［11］徐慶陽，方翔，許苑，等．營養(yǎng)性肥胖對大鼠精子的影響［J］．皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，26（4）：254－256．

［12］翟玲玲，趙劍，白英龍，等．肥胖對小鼠生殖功能影響及與性激素關(guān)系［J］．中國公共衛(wèi)生，2011，27（2）：204－205．

［13］賈斯媛．不同負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對肥胖雄性小鼠下丘腦脂聯(lián)素－吻素－GnRH的影響［D］．沈陽：沈陽體育學(xué)院，2015．

［14］田智謀．肥胖對大鼠生殖細(xì)胞線粒體凋亡途徑的影響［D］．太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2011．

［15］郭銀謀，高建芝．Caspase-3在肥胖患者乳腺癌組織中的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系［J］．臨床輔助檢查，2011，32（13）：233－234．

［16］畢業(yè)，李建設(shè)．有氧運(yùn)動(dòng)對單純性肥胖兒童血中瘦素、神經(jīng)肽、胰島素和腫瘤壞死因子的影響研究［J］．體育科學(xué)，2005，25（12）：37－39．

［17］李奇．有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合消脂散對高脂膳食雄性大鼠生殖機(jī)能的干預(yù)作用［D］．揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2012．

［18］馬丁．營養(yǎng)性肥胖對青春期大鼠睪丸生殖細(xì)胞中Fas／FasL凋亡途徑的影響［D］．太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2012．

［19］曹翔，金惠銘．Fas、NF-κB及Caspases在TNFα介導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用［J］．中國病理生理雜志，2001，17（8）：15－18．

［20］武進(jìn)峰，馬丁，李承勇，等．營養(yǎng)性肥胖對大鼠睪丸生殖細(xì)胞Fas／FasL基因表達(dá)及凋亡的影響［J］．中國藥物與臨床，2011，11（4）：404－406．

［21］陳小燕．有氧運(yùn)動(dòng)對雄性高脂膳食大鼠生殖細(xì)胞凋亡的研究［D］．揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2014．