侯艷茹，馬曉冰，蘇 琳，趙雅娟，羅玉龍，趙麗華，靳 燁*

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018）

蘇尼特羊是內(nèi)蒙古地區(qū)優(yōu)秀的肉羊種群，其肉質(zhì)具有細(xì)嫩、味美多汁、易消化等特點(diǎn)，受到廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)[1]。飼養(yǎng)方式是影響肉品品質(zhì)的重要因素，F(xiàn)luharty等[2]的研究表明，合理的舍飼育肥能夠提高動(dòng)物的生長(zhǎng)育肥性能，還可以改善肉質(zhì)。本團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，放牧條件下蘇尼特羊肉的色澤和嫩度都優(yōu)于圈養(yǎng)條件，且營(yíng)養(yǎng)成分更豐富[3-4]，這說(shuō)明飼養(yǎng)方式對(duì)肉品品質(zhì)有所影響。一磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是蛋白激酶級(jí)聯(lián)的下游組件，屬于代謝敏感的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其主要功能是根據(jù)機(jī)體的能量需求調(diào)節(jié)整個(gè)機(jī)體的能量平衡[5-6]。AMPK能夠調(diào)節(jié)機(jī)體的糖代謝，糖酵解是引起動(dòng)物宰后肌肉pH值下降的主要原因，而動(dòng)物宰后的pH值變化速度與幅度可以影響肌肉的色澤、嫩度、系水力、蒸煮損失等品質(zhì)指標(biāo)[7-9]，所以動(dòng)物宰后糖酵解的程度直接影響肉質(zhì)的好壞。飼養(yǎng)方式會(huì)對(duì)肉品品質(zhì)產(chǎn)生影響，而AMPK能夠通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物宰后糖酵解的程度而影響肉質(zhì)。所以，研究飼養(yǎng)方式對(duì)動(dòng)物宰后AMPK活性以及糖酵解指標(biāo)的影響，通過(guò)調(diào)控AMPK的活性來(lái)改變糖酵解的進(jìn)程進(jìn)而影響肉質(zhì)，無(wú)疑是改善肉品品質(zhì)的新思路。

本研究以不同飼養(yǎng)條件下（放牧和圈養(yǎng)）12 月齡蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)AMPK活力、AMPK基因mRNA相對(duì)表達(dá)量以及糖酵解指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，并分析了AMPK與糖酵解指標(biāo)之間的相關(guān)性，旨在為通過(guò)調(diào)控AMPK活性改善宰后肉品品質(zhì)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選取來(lái)自內(nèi)蒙古巴彥淖爾市海流圖鎮(zhèn)12 月齡蘇尼特羊放牧和圈養(yǎng)各10 只，其中每種飼養(yǎng)方式公母各半，體質(zhì)量（43.56±6.24）kg，胴體質(zhì)量（21.29±4.69）kg。宰后1 h內(nèi)取背最長(zhǎng)肌，切成100 mg小塊，立即放入無(wú)酶無(wú)菌凍存管中，投入液氮中冷凍保存，然后置于-80 ℃冰箱中，作為實(shí)驗(yàn)用材料。

RNAiso Plus RNA提取裂解液、PrimeScriptTMRT reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Premix Ex TaqTM實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒 大連寶生物工程有限公司；DNase/RNase-free無(wú)菌水 北京天根生物技術(shù)有限責(zé)任公司；綿羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒、己糖激酶測(cè)定試劑盒、乳酸測(cè)定試劑盒、肌/肝糖原測(cè)定試劑盒、總蛋白定量測(cè)定試劑盒（二喹啉甲酸比色法） 南京建成生物工程研究所；Tris-HCl緩沖液、D-甘露醇 美國(guó)Amresco公司；乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）、乙二醇雙（2-氨基乙基醚）四乙酸（ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid，EGTA） 美國(guó)Sigma公司；二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol，DTT） 德國(guó)Merck公司；氟化鈉、焦磷酸鈉 天津永大化學(xué)試劑廠；濃硫酸、氯化鈉國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

pH-STAR型胴體pH值直測(cè)儀 德國(guó)Matthaus公司；TC-P2A全自動(dòng)測(cè)色色差計(jì) 上海生物生化實(shí)驗(yàn)儀器公司；CL-M嫩度儀 上海精密科學(xué)儀器有限公司；5417R低溫臺(tái)式冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf生物公司；CFX96TM實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀、凝膠成像分析系統(tǒng) 美國(guó)Bio-Rad公司；BG-power 3500型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、水平電泳槽北京百晶生物技術(shù)有限公司；PCR擴(kuò)增儀 北京北方華奧貿(mào)易有限責(zé)任公司；TU-1810紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；LRH-250生化培養(yǎng)箱上海一恒科學(xué)儀器有限公司；XHF-DY高速分散器寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 AMPK的活力測(cè)定

取保存于-80 ℃冰箱的樣品約0.3 g，按照1∶5（m/V）的比例加入保存于4 ℃冰箱的冷凍勻漿液（0.25 mol/L的D-甘露糖、5 mmol/L的焦磷酸鈉、0.05 mol/L的Tris-HCl緩沖液（pH 7.4）、1 mmol/L的DTT、1 mmol/L的EGTA、1 mmol/L的EDTA、50 mmol/L的氟化鈉），在3 000 r/min的條件下冰浴勻漿。4 ℃、10 000 r/min冷凍離心5 min，取上清液用于AMPK活力的測(cè)定。AMPK活力的測(cè)定步驟以及計(jì)算參照綿羊p-AMPK酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 AMPK基因相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定

1.3.2.1 總RNA的提取及檢測(cè)

依據(jù)RNAiso Plus試劑盒的說(shuō)明書(shū)對(duì)肌肉中總RNA進(jìn)行提取[10]。將提取的總RNA置于核酸蛋白分析儀上檢測(cè)其質(zhì)量濃度和純度（A260nm/A280nm）。并用1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所提取的總RNA的完整性。

1.3.2.2 反轉(zhuǎn)錄

按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄操作，將合成的cDNA質(zhì)量濃度稀釋至50 ng/μL。將反轉(zhuǎn)錄得到的產(chǎn)物置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆肹11]。

1.3.2.3 引物序列來(lái)源及合成

PRKAA1、PRKAA2、PRKAG3以及GAPDH（內(nèi)參基因）基因引物序列參照馬曉冰的設(shè)計(jì)[12]，由華大科技基因有限公司合成（表1）。

表1 實(shí)時(shí)熒光PCR引物序列Table 1 Primers used for real-time PCR

1.3.2.4 實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增

本實(shí)驗(yàn)按照CFX96TM實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng)的二步法進(jìn)行操作。以1.3.2.2節(jié)所合成的cDNA為模板，使用實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增[11]。反應(yīng)體系為：SYBR Premix Ex Taq II（2×）12.5 μL；上、下游引物（10 μmol/L）各1.0 μL；DNA模板（50 ng/μL）2.0 μL；dH2O 8.5 μL；共25.0 μL。實(shí)時(shí)熒光PCR條件為：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10min。產(chǎn)物保存于4 ℃冰箱。

1.3.2.5 實(shí)時(shí)熒光PCR產(chǎn)物檢測(cè)

使用1%的瓊脂糖凝膠電泳，在120 V的電壓下進(jìn)行電泳檢測(cè)，使用凝膠成像儀拍照分析。

1.3.2.6 基因相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算

本實(shí)驗(yàn)采用2?ΔΔCt計(jì)算法對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，2?ΔΔCt為相對(duì)表達(dá)量，ΔΔCt＝（處理組目的基因Ct值-處理組內(nèi)參基因Ct值）-（未處理組目的基因Ct值-未處理組內(nèi)參基因Ct值）[13]。

1.3.3 糖酵解指標(biāo)的測(cè)定

己糖激酶活力的測(cè)定按照己糖激酶測(cè)定試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；乳酸含量的測(cè)定按照乳酸測(cè)定試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；肌糖原含量測(cè)定按照肝/肌糖原測(cè)定試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3.4 肉品品質(zhì)相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

1.3.4.1 pH值的測(cè)定

在屠宰后45 min時(shí)，使用胴體直測(cè)式pH計(jì)測(cè)胴體初pH值，記為pH1；靜置排酸24 h后測(cè)胴體最終pH值，記為pH24。

1.3.4.2 色澤的測(cè)定

使用TC-P2A全自動(dòng)色差儀對(duì)肉色進(jìn)行測(cè)定，L*值表示亮度，b*值為黃度，a*值表示紅度。每個(gè)樣品選取3 個(gè)位置，重復(fù)測(cè)定后取平均值。

1.3.4.3 嫩度的測(cè)定

沿肌肉方向取2.5 cm×3.0 cm×5.0 cm的肌肉塊，用自封袋密封后水浴加熱（75 ℃、45 min），冷卻至室溫后沿著肌纖維的方向?qū)⑷鈮K切成3 cm×1 cm×1 cm的條狀，使用CLM-3型嫩度儀對(duì)剪切力值進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

利用SPSS 19.0數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)值以表示。以P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼養(yǎng)方式對(duì)肉質(zhì)指標(biāo)的影響

表2 不同飼養(yǎng)方式下的肉質(zhì)指標(biāo)（n＝10）Table 2 Meat traits under different feeding conditions (n= 10)

由表2可知，放牧條件下蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的剪切力值顯著大于圈養(yǎng)條件（P＜0.05），這可能與不同飼養(yǎng)方式下骨骼肌肌纖維的發(fā)育、肌肉脂肪的含量以及水分含量有關(guān)[3,14]。放牧條件下蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的L*值、a*值以及b*值均大于圈養(yǎng)條件，其中L*值和b*值差異顯著（P＜0.05）。兩種飼養(yǎng)方式的pH1值和pH24值差異不顯著（P＞0.05），研究表明不同飼養(yǎng)方式下18 月齡衛(wèi)山羊羯羊的pH24值差異不顯著[15]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，這可能是因?yàn)閜H值還受到其他因素的共同影響。

2.2 飼養(yǎng)方式對(duì)蘇尼特羊AMPK活力和基因相對(duì)表達(dá)量的影響

2.2.1 飼養(yǎng)方式對(duì)AMPK活力的影響

本實(shí)驗(yàn)用AMPK磷酸化水平代表AMPK活力，不同飼養(yǎng)方式12 月齡蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的AMPK活力分別為：放牧條件（8.83±1.07）ng/mL、圈養(yǎng)條件（9.51±1.30）ng/mL。結(jié)果表明，放牧條件下蘇尼特羊AMPK活力低于圈養(yǎng)條件下，但兩種飼養(yǎng)方式差異不顯著。AMPK活力會(huì)受到運(yùn)動(dòng)、缺氧、缺血、應(yīng)激等多種因素的影響[16-18]，圈養(yǎng)條件下，蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌AMPK活力高于放牧條件，推測(cè)原因可能是由于圈養(yǎng)的羊和放牧的羊相比，宰前應(yīng)激反應(yīng)比較大，導(dǎo)致AMPK的活力升高。但兩種飼養(yǎng)方式AMPK活力差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明飼養(yǎng)方式對(duì)AMPK活力影響較小。

2.2.2 AMPK基因相對(duì)表達(dá)量測(cè)定結(jié)果

2.2.2.1 總RNA提取結(jié)果

背最長(zhǎng)肌肌肉組織中提取的總RNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，凝膠成像結(jié)果如圖1所示（以其中3 個(gè)樣品為例）。

圖1 總RNA電泳圖Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of total RNA

如圖1所示，提取的總RNA 3 條條帶（28S、18S、5S）完整且清晰明亮，說(shuō)明所提取的總RNA并無(wú)降解。經(jīng)核酸蛋白分析儀檢測(cè)，A260nm/A280nm均在1.8～2.1之間，說(shuō)明提取的總RNA的純度高，并未被污染，可用于后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。

2.2.2.2 實(shí)時(shí)熒光PCR產(chǎn)物結(jié)果

圖2 各基因PCR產(chǎn)物電泳圖Fig. 2 Agarose gel electrophoresis of the genes

內(nèi)參基因和各目的基因經(jīng)實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)后，得到大量擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，凝膠成像結(jié)果如圖2所示。圖中4 個(gè)基因的條帶單一且清晰明亮，說(shuō)明經(jīng)PCR反應(yīng)后得到的擴(kuò)增產(chǎn)物單一，沒(méi)有引物二聚體和非特異性產(chǎn)物，將目的基因的片段與DL1000 DNA Marker比較，其條帶大小與所設(shè)計(jì)的引物目的產(chǎn)物片段大小相一致，說(shuō)明所設(shè)計(jì)的引物反應(yīng)性能良好，符合實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)要求，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光PCR后的產(chǎn)物為本實(shí)驗(yàn)所需產(chǎn)物。

2.2.2.3 AMPK基因表達(dá)規(guī)律

AMPK以異源三聚體的形式存在于生物體中，由α、β、γ3 種亞基構(gòu)成，其中α是催化亞基，β和γ是調(diào)節(jié)亞基[19]。每個(gè)亞基又存在不同的亞型，如α1和α2，β1和β2，γ1、γ2和γ3[20]。由于α是催化亞基，所以目前對(duì)AMPK α1和α2這兩個(gè)亞基的功能等方面的相關(guān)研究比較多，因?yàn)棣?亞基在骨骼肌中具有高表達(dá)[21]，且有研究表明PRKAG3基因與糖代謝有關(guān)[22-23]，所以本實(shí)驗(yàn)選擇分別編碼α1、α2和γ3亞基的PRKAA1、PRKAA2和PRKAG3基因來(lái)分析AMPK的mRNA相對(duì)表達(dá)量。不同飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊的PRKAA1、PRKAA2以及PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量如圖3所示。

圖3 AMPK部分亞基基因表達(dá)水平Fig. 3 Gene expression of some subunits of AMPK

如圖3所示，不同飼養(yǎng)條件下，蘇尼特羊PRKAA1和PRKAG3基因的相對(duì)表達(dá)量均為圈養(yǎng)條件高于放牧條件，且差異顯著（P＜0.05），而PRKAA2基因相對(duì)表達(dá)量為放牧條件顯著大于圈養(yǎng)條件（P＜0.05）。AMPK α1亞基主要在脂肪細(xì)胞中表達(dá)[24]，由于圈養(yǎng)蘇尼特羊比放牧蘇尼特羊含有更多的脂肪組織，這可能導(dǎo)致編碼AMPK α1亞基的PRKAA1的相對(duì)表達(dá)量增高。研究表明耐力訓(xùn)練會(huì)導(dǎo)致AMPK α2亞基蛋白和基因相對(duì)表達(dá)量顯著增加[25]。較圈養(yǎng)羊而言，放牧的蘇尼特羊處于長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)的生長(zhǎng)狀況下，可能會(huì)導(dǎo)致編碼AMPK α2亞基的PRKAA2基因相對(duì)表達(dá)量顯著增加。放牧條件PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量顯著小于圈養(yǎng)條件，可能是由于PRKAG3基因在ⅡB型肌纖維中表達(dá)量較高[26]，而圈養(yǎng)條件下蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的ⅡB型肌纖維數(shù)量要高于放牧條件[3]。以上結(jié)果表明，飼養(yǎng)方式對(duì)AMPK的基因相對(duì)表達(dá)量有顯著影響。

2.3 飼養(yǎng)方式對(duì)蘇尼特羊宰后糖酵解指標(biāo)的影響

表3 不同飼養(yǎng)方式糖酵解指標(biāo)（n＝10）Table 3 Glycolysis indicators under different feeding conditions (n= 10)

不同飼養(yǎng)條件下蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌宰后糖酵解指標(biāo)測(cè)定結(jié)果如表3所示，蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌己糖激酶的活力為圈養(yǎng)條件高于放牧條件，但兩種飼養(yǎng)方式差異不顯著（P＞0.05）；乳酸含量也為圈養(yǎng)條件大于放牧條件，且差異顯著（P＜0.05）；放牧條件下肌糖原含量高于圈養(yǎng)條件，但差異不顯著（P＞0.05）。不同飼養(yǎng)方式會(huì)對(duì)AMPK的活力以及基因相對(duì)表達(dá)量有所影響，研究表明AMPK活力會(huì)進(jìn)一步影響糖酵解指標(biāo)[27]，這就造成了糖酵解指標(biāo)在不同飼養(yǎng)方式下的差異。

2.4 AMPK與糖酵解指標(biāo)及肉品品質(zhì)的相關(guān)性

2.4.1 AMPK活力與糖酵解指標(biāo)及肉品品質(zhì)的相關(guān)性

表4 AMPK活力與糖酵解指標(biāo)及肉品質(zhì)的相關(guān)性Table 4 Correlation coefficients between relative AMPK activity and glycolysis indices and meat quality

由表4可知，AMPK活力與己糖激酶活力以及乳酸含量均呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），與肌糖原含量相關(guān)程度很低（P＞0.05），與剪切力、色澤以及pH值均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。Shen Qingwu W.等[28]向小鼠體內(nèi)腹腔注射AMPK的抑制劑——復(fù)合物C，研究顯示復(fù)合物C抑制了宰后小鼠背最長(zhǎng)肌中AMPK的活力以及糖酵解進(jìn)程。這說(shuō)明AMPK可以調(diào)控宰后動(dòng)物肌肉的糖酵解。

2.4.2 AMPK基因相對(duì)表達(dá)量與AMPK活力、糖酵解指標(biāo)以及肉品品質(zhì)的相關(guān)性

表5 AMPK基因相對(duì)表達(dá)量與AMPK活力、糖酵解指標(biāo)及肉品質(zhì)的相關(guān)性Table 5 Correlation coefficients between relative expression of AMPK gene and AMPK activity, glycolysis and meat quality

由表5可知，PRKAA1、PRKAA2和PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量均與AMPK活力呈正相關(guān)，其中PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量均與AMPK活力呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），說(shuō)明這3 個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量與AMPK活力變化趨勢(shì)相一致。PRKAA1和PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量與己糖激酶活力呈正相關(guān)，其中PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量與己糖激酶活力呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），而PRKAA2基因相對(duì)表達(dá)量與己糖激酶活力呈負(fù)相關(guān)，但相關(guān)程度較低。PRKAA1和PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量均與乳酸含量呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。3 個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量與肌糖原含量均呈負(fù)相關(guān)，但相關(guān)程度較低。PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量與剪切力呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05），有研究對(duì)PRKAG3基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，表明T2885C這個(gè)SNP與剪切力有密切的聯(lián)系，可以作為未來(lái)肉牛選育的輔助標(biāo)記[29]，這說(shuō)明PRKAG3基因的相對(duì)表達(dá)量對(duì)肌肉的嫩度有所影響。

以上結(jié)果表明，PRKAA1和PRKAG3基因的相對(duì)表達(dá)量對(duì)糖酵解指標(biāo)有一定的影響，而PRKAA2基因的相對(duì)表達(dá)量對(duì)糖酵解指標(biāo)影響較小，即AMPK α1亞基和AMPK γ3亞基在機(jī)體內(nèi)相對(duì)表達(dá)量高時(shí)，AMPK活力增加，AMPK活化后促使糖酵解的關(guān)鍵酶己糖激酶的活力增加，從而加速動(dòng)物宰后糖酵解的進(jìn)程，使得乳酸大量堆積。乳酸是影響動(dòng)物宰后pH值的重要因素，pH值又是影響肉品品質(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)，這說(shuō)明AMPK可以通過(guò)調(diào)控動(dòng)物宰后糖酵解的進(jìn)程從而對(duì)肉品品質(zhì)產(chǎn)生影響。也有相關(guān)研究表明不同條件下肉質(zhì)會(huì)發(fā)生改變，可能是由于AMPK對(duì)糖酵解的關(guān)鍵酶己糖激酶、果膠酯酶和乳酸脫氫酶活力的調(diào)節(jié)，進(jìn)而改變了糖酵解的速率和程度，最終對(duì)肉品品質(zhì)產(chǎn)生影響[30-31]。

3 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)蘇尼特羊放牧和圈養(yǎng)兩種方式下AMPK活力、AMPK mRNA相對(duì)表達(dá)量以及糖酵解指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)圈養(yǎng)條件下PRKAA1以及PRKAG3基因表達(dá)均顯著高于放牧條件，并且AMPK的活力、己糖激酶活力和乳酸含量也高于放牧條件。說(shuō)明PRKAA1以及PRKAG3基因相對(duì)表達(dá)量升高會(huì)使AMPK的活力增加，AMPK被激活后直接磷酸化糖酵解通路中的關(guān)鍵酶己糖激酶，使己糖激酶活力增加，從而促進(jìn)糖酵解進(jìn)程，產(chǎn)生大量乳酸，導(dǎo)致宰后動(dòng)物肌肉的pH值下降，對(duì)肉品品質(zhì)產(chǎn)生一定影響。因此，未來(lái)可通過(guò)調(diào)控AMPK的活力以改善不同飼養(yǎng)方式下的肉質(zhì)。

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