孫臻，張影，汪杰，陳明聰，黃祖光，高華宏（1.三亞市婦幼保健院，海南三亞57000；.三亞市中醫(yī)院，海南三亞 57000；3.廣東省中藥研究所，廣州 510095）

參芪婦康顆粒為純中藥復(fù)方制劑，原方為三亞市婦幼保健院周玉海主任中醫(yī)師臨床經(jīng)驗(yàn)方，有多年臨床應(yīng)用史。該方由黃芪、黨參、當(dāng)歸、赤芍、紅藤、敗醬草、川楝子、香附、益母草、丹參、三棱、甘草等12味中藥材組合而成，具有益氣化瘀、清熱祛濕之功效。臨床研究表明，該方能顯著降低人體血液黏稠度，改善微循環(huán)，提高免疫功能，用于治療慢性盆腔炎的總有效率達(dá)93.33%[1]。

該方原為湯劑給藥，易吸收、起效快，但口感差，不方便服用、攜帶和貯存。為提高患者用藥依從性，本課題組以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)代制藥技術(shù)，采用干法制粒技術(shù)將其改制為顆粒劑[2]，在保持湯劑優(yōu)勢(shì)的前提下，克服其不足，達(dá)到服用劑量小、療效穩(wěn)定、使用方便的目的。為確保制劑的提取效果，保證成品質(zhì)量和療效，本課題組根據(jù)處方藥材的主要有效成分性質(zhì)、藥理作用、中藥配伍原則和臨床用藥特點(diǎn)，確定采用全方水提取的方法，以干膏得率和75%乙醇浸出物含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)對(duì)該藥的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，以期為其工業(yè)化生產(chǎn)提供一定參考。

1 材料

1.1 儀器

TC20KA型電子稱、JJ300型電子分析天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）；DHG-9036A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）；HHS-2型電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海虞龍儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 試劑

試驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 飲片

黃芪（批號(hào)：20160401）、黨參（批號(hào)：20160401）、當(dāng)歸（批號(hào)：20160501）、赤芍（批號(hào)：20160401）、紅藤（批號(hào)：20160501）、敗醬草（批號(hào)：20151102）、川楝子（批號(hào)：20151101）、香附（批號(hào)：20160501）、益母草（批號(hào)：20151103）、丹參（批號(hào)：20160401）、三棱（批號(hào)：20151101）、甘草（批號(hào)：20160401）均購(gòu)自海南健鵬藥業(yè)有限公司，經(jīng)三亞市中醫(yī)院藥檢室張影副主任中藥師鑒定為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 指標(biāo)的測(cè)定

2.1.1 干膏得率 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下樣品溶液20 mL，分別置于干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，濃縮、干燥，得干膏。按2015版《國(guó)家藥典》（四部）通則0831“干燥失重測(cè)定法”[3]測(cè)定質(zhì)量，計(jì)算干膏得率。干膏得率（%）=浸膏質(zhì)量×200/（藥材質(zhì)量×20）×100%。

2.1.2 75%乙醇浸出物含量 精密量取“2.1.1”項(xiàng)下干膏，粉碎，過(guò)2號(hào)篩，得干膏細(xì)粉，備用。稱取上述干膏細(xì)粉2～4 g，精密稱定，置于250 mL錐形瓶中，加75%乙醇溶液100 mL，密塞，稱定質(zhì)量，靜置1 h；連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h；放冷，取下錐形瓶，密塞，稱定質(zhì)量，用75%乙醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻；用干燥濾器濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，置于干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h；移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量。以干燥品計(jì)算供試品中75%乙醇浸出物含量（%）[3]。浸出物含量（%）＝（m/M）×（100/25）×100%，其中，m為蒸發(fā)皿中干膏質(zhì)量，M為干燥樣品質(zhì)量。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 藥材吸水率考察 按處方的2倍量稱取藥材，共3批，分別加10倍水量（L/kg，下同）浸泡藥材至透心，6 h后棄去多余水分，稱定藥材質(zhì)量，計(jì)算藥材吸水率[4]。結(jié)果，藥材吸水率為170%（RSD＝1.59%，n＝3）。因此，在第1次提取時(shí)應(yīng)加1.7倍水量。

2.2.2 浸泡時(shí)間考察 稱取1/2處方量藥材，第1次以1.7倍水量浸泡，第2次以10倍水量浸泡，均浸泡0.5、1、1.5、2 h，提取2次，每次1 h；濾過(guò)，取續(xù)濾液，合并，濃縮，放冷，以水定容至200 mL，得樣品溶液。精密量取上述樣品溶液20 mL，分別置于干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。按2015版《國(guó)家藥典》（四部）通則0831“干燥失重測(cè)定法”[3]測(cè)定質(zhì)量，并計(jì)算干膏得率[5]。結(jié)果表明，浸泡時(shí)間對(duì)干膏得率影響不大，考慮節(jié)約時(shí)間和成本的原則，選擇浸泡0.5 h。

2.3 正交試驗(yàn)

采用水提取法制備本品。以單因素試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，確定第1次提取時(shí)加1.7倍水量，浸泡0.5 h。以干膏得率和75%乙醇浸出物含量為指標(biāo)，以提取時(shí)間（A）、加水倍量（B）和提取次數(shù)（C）[6-8]為因素，采用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝。采用加權(quán)綜合評(píng)分法對(duì)正交試驗(yàn)所得的干膏得率和75%乙醇浸出物含量（%）進(jìn)行綜合評(píng)分[9]，權(quán)重系數(shù)各為0.5。加權(quán)綜合評(píng)分＝（干膏得率×50/最高干膏得率）+（75%乙醇浸出物含量×50/最高75%乙醇浸出物含量）。因素與水平見表1，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素影響程度排序?yàn)镃＞A＞B，直觀分析得最優(yōu)提取工藝為A3B2C3；A因素和B因素的影響均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），C因素的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。故從省時(shí)、降低生產(chǎn)成本等角度綜合考慮，最后確定提取方案為A1B1C3，即加8倍水量，提取3次，每次1 h。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取1倍處方量藥材，加8倍水量，提取3次，每次1 h，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定干膏得率和75%乙醇浸出物含量，按“2.3”項(xiàng)下方法計(jì)算加權(quán)綜合評(píng)分。平行測(cè)定3批，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，本工藝穩(wěn)定可行。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 2 Design and results of orthogonal tests

表3 方差分析結(jié)果Tab 3 Analysis result of variance

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 4 Results of validation tests（n＝3）

3 討論

干浸膏是口服中藥復(fù)方制劑發(fā)揮臨床療效的最基礎(chǔ)的物質(zhì)，干膏得率高低直接影響制劑工藝和臨床療效，是水提工藝最有效、最直接的控制標(biāo)準(zhǔn)[10]。

本處方在臨床以湯劑的形式使用多年，療效顯著。本課題組結(jié)合醫(yī)院制劑室的生產(chǎn)條件，為盡量保持原方的療效優(yōu)勢(shì)，故選擇與湯劑相同形式的水提取法。

浸出物含量是復(fù)方中藥制劑質(zhì)量控制的另一個(gè)重要指標(biāo)，通過(guò)測(cè)定浸出物含量可對(duì)中藥復(fù)方制劑有效成分進(jìn)行控制，充分體現(xiàn)中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)治療疾病的整體觀，是保證中藥制劑藥效的重要手段[11]。方中黃芪、黨參為君藥，二者配伍使用，出自《脾胃論》中的補(bǔ)中益氣湯，黃芪主要有效成分為黃芪甲苷等黃酮苷類[12]，黨參主要有效成分為黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯、黨參苷類[13]；臣藥紅藤、敗醬草、益母草、香附、川楝子有效成分為生物堿[14-16]，上述有效成分均易溶于75%乙醇溶液。因此，本課題組以75%乙醇溶液為溶劑，對(duì)正交提取工藝水提液所得干膏進(jìn)行浸出物含量測(cè)定。

中藥復(fù)方制劑由于成分復(fù)雜、劑型多樣化，用單一的考察指標(biāo)篩選最佳提取工藝并不全面，亦不能代表中藥制劑的整體質(zhì)量和優(yōu)劣。故采用加權(quán)綜合評(píng)分方法，將干膏得率和75%乙醇浸出物含量作為提取工藝的考察指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)各設(shè)為0.5，按各指標(biāo)對(duì)有效成分產(chǎn)生的影響進(jìn)行權(quán)重分配，避免了考察指標(biāo)的片面性，使優(yōu)化的提取工藝更具科學(xué)性。

綜上所述，優(yōu)化的提取工藝操作穩(wěn)定、質(zhì)量可控，可為參芪婦康顆粒的工業(yè)化生產(chǎn)提供一定參考。

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