王宏宇，馬梓承，孟凡亮，劉照虎，劉思當(dāng)

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271000）

豬瘟（Classical swine fever,CSF），是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種高度接觸性熱性傳染病。以全身性出血和發(fā)熱為主要特征，并引起妊娠母豬流產(chǎn)、免疫抑制、繼發(fā)或并發(fā)感染等臨床表現(xiàn)，呈急性或慢性，是一種對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)危害極大的傳染病。1984年被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類(lèi)傳染病。因此豬瘟的診斷防治歷來(lái)是全世界豬瘟存在國(guó)家極為重視的課題，我國(guó)每年都投入大量人力、物力進(jìn)行豬瘟的免疫防控及科研工作。疫苗免疫防控是控制豬瘟的重要的手段，使該病在很大程度上得到了控制，但因種種原因，近年來(lái)仍有豬瘟發(fā)生。因此，定時(shí)進(jìn)行豬瘟病原和抗體檢測(cè)，不僅可以了解豬場(chǎng)的感染狀態(tài)及免疫效果，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)群體免疫狀況，而且能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)免疫存在的問(wèn)題及潛在風(fēng)險(xiǎn)，以便更好地做好豬瘟的防控工作。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來(lái)源與處理 2017年 2月至 2018年1月，從山東泰安、濟(jì)寧、青島、臨沂、煙臺(tái)、萊蕪和濰坊等地送檢的579份檢測(cè)豬瘟病原的病料及4 554份檢測(cè)豬瘟抗體的血清。于山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院臨床病理學(xué)研究室進(jìn)行檢測(cè)前處理，將病料研磨后9 000 r/min，離心3 min，置于-20℃待檢；血清置于 1.5 mL 離心管中，6 000 r/min，離心 5 min，吸取上清液至新的離心管中，-20℃待檢。

1.1.2 主要儀器與試劑 EasyPure Viral DNA/RNA Kit和 EasyScript One-Step RT-PCR SuperMix均購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司，豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自韓國(guó)MEDIAN公司，Eppendorf移液器，酶標(biāo)儀等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 檢測(cè)方法 病原檢測(cè)參照 EasyPure Viral DNA/RNA Kit說(shuō)明書(shū)對(duì)組織研磨液進(jìn)行RNA提取，PCR擴(kuò)增體系按照One Step RT-PCR試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠檢測(cè)；抗體嚴(yán)格按照抗體檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品的OD450，按照說(shuō)明書(shū)中的計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。

1.2.2 結(jié)果判斷 本實(shí)驗(yàn)室豬瘟特異性引物擴(kuò)增的序列長(zhǎng)度為599 bp，瓊脂糖凝膠上在599 bp處有條帶的為豬瘟陽(yáng)性；豬瘟抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率≥40%為陽(yáng)性，阻斷率＜40%為陰性。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 病原檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)瓊脂糖凝膠檢測(cè)，在579份樣品中，43份豬瘟陽(yáng)性，檢出率為7.43%，全年檢出率按月份分布如圖1。5份同時(shí)檢出豬圓環(huán)病毒2型（PCV2），1份與豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）共感染，1份CSFV、PRRSV、PCV2三重感染，另1份CSFV、PRRSV、偽狂犬病病毒（PRV）三重感染，分別占陽(yáng)性檢出數(shù)的11.63%、2.33%、2.33%、2.33%。

圖1 豬瘟病毒年檢出率月份分布

2.2 抗體檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)，CSFV抗體的總體陽(yáng)性率為76.46%，其分群的抗體檢測(cè)數(shù)、陽(yáng)性率及抗體免疫水平結(jié)果匯總?cè)绫?。

表1 豬瘟抗體分群結(jié)果匯總

3 結(jié)果分析

3.1 病原檢測(cè)結(jié)果分析

經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)室2017年在579份送檢病料中豬瘟陽(yáng)性檢出率為7.43%，陽(yáng)性檢出率較高，檢出月份主要集中在1月、5月和7月，分別占年總檢出的15.00%、12.73%和14.63%。同時(shí)，豬瘟作為免疫抑制病，與圓環(huán)病毒2型感染、藍(lán)耳病和偽狂犬病的混感現(xiàn)象較為普遍，尤其是存在二重或三重感染，使病情復(fù)雜化。目前，我國(guó)豬瘟的免疫防控和監(jiān)測(cè)凈化工作仍面臨不少困難和挑戰(zhàn)。

3.2 抗體檢測(cè)結(jié)果分析

2017年豬瘟抗體的總體陽(yáng)性率為76.46%，據(jù)《2018年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》指示，存欄豬群豬瘟的抗體陽(yáng)性率大于70%為免疫合格，總體而言山東省豬瘟免疫水平尚屬合格。如表1所示，種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬的陽(yáng)性率分別為88.92%、88.01%、76.20%，免疫效果較好；而哺乳仔豬和肥育豬的陽(yáng)性率分別為69.10%和67.71%。對(duì)于哺乳仔豬，母源抗體水平較高，仍能持續(xù)給予仔豬一定的免疫保護(hù)，但對(duì)于肥育豬而言，整體陽(yáng)性率不高，阻斷率較低，懷疑免疫程序、免疫操作或疫苗質(zhì)量等可能存在問(wèn)題，問(wèn)題豬場(chǎng)需要篩查原因，選取高質(zhì)量疫苗，優(yōu)化免疫程序，加強(qiáng)免疫監(jiān)測(cè)評(píng)估，提高豬瘟免疫效果。

4 討論

當(dāng)前，我國(guó)豬場(chǎng)的疾病防控現(xiàn)象依然嚴(yán)峻，豬瘟暴發(fā)的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，尤其是中小規(guī)模的豬場(chǎng)。根據(jù)病原檢測(cè)及抗體檢測(cè)結(jié)果分析，對(duì)造成這種現(xiàn)象的主要因素提出幾條建議：第一，選擇高效的豬瘟疫苗，根據(jù)豬場(chǎng)的實(shí)際情況制定科學(xué)的免疫程序并嚴(yán)格執(zhí)行，避免因操作失誤而造成免疫失敗現(xiàn)象的出現(xiàn)；第二，及時(shí)做好哺乳仔豬的疫苗免疫，在其抗體下降期及時(shí)免疫，重視肥育豬的疫苗免疫情況；第三，定期抽取一定比例的血清樣品進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，這樣不但能實(shí)時(shí)監(jiān)控豬瘟抗體的免疫動(dòng)態(tài)，而且能夠?qū)ζ涿庖咝ЧM(jìn)行評(píng)估，不斷地優(yōu)化豬瘟免疫程序，取得良好的免疫效果；第四，加強(qiáng)豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理，改善養(yǎng)殖環(huán)境，完善生物安全措施，尤其要做好其他疫病的免疫檢測(cè)工作。