阮 強(qiáng)，余金海，李 琪

（1.龍川東瑞農(nóng)牧發(fā)展有限公司，廣東 河源 517000；2.廣東省動(dòng)物源性人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642）

流行性腹瀉近年在國內(nèi)眾多養(yǎng)殖場發(fā)生，給養(yǎng)殖場帶來巨大損失。對于哺乳仔豬，7日齡內(nèi)一旦發(fā)生流行性腹瀉，死亡率高達(dá)95%～100%。被動(dòng)乳汁免疫被認(rèn)為是保護(hù)新生哺乳仔豬免受豬流行性腹瀉（PED）等腸道疾病危害的最有希望和有效的方法[1]。已有研究證明微生態(tài)制劑具有增加免疫器官指數(shù)以及增強(qiáng)機(jī)體對疫苗的抗體應(yīng)答的功能[2]?！柏S強(qiáng)生泰”是一種四聯(lián)活菌微生態(tài)制劑，含雙歧桿菌、乳酸菌、糞鏈球菌、酵母菌。本次試驗(yàn)，在腹瀉疫苗免疫期間，添加“豐強(qiáng)生泰”，通過測定母乳中IgA的含量，用于評(píng)價(jià)使用微生態(tài)產(chǎn)品對于PED免疫效果的提升作用，為PED免疫提供新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

20頭經(jīng)產(chǎn)2～3次已妊娠3個(gè)月的長大二元雜種豬流行性腹瀉病毒陰性母豬，由廣東省河源東瑞公司提供。試驗(yàn)于2017年11—12月在廣東河源市龍川縣豐稔鎮(zhèn)十二排村龍川東瑞農(nóng)牧發(fā)展有限公司豬場進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)藥品

微生態(tài)制劑“豐強(qiáng)生泰”由江蘇恒豐強(qiáng)生物技術(shù)有限公司提供；豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）-豬流行性腹瀉病毒（PEDV）-豬輪狀病毒（PoRV）三聯(lián)弱毒疫苗（簡稱“TPR”三聯(lián)弱毒疫苗）由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司提供；豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）-豬流行性腹瀉病毒（PEDV）二聯(lián)滅活疫苗（簡稱“PT”二聯(lián)滅活苗）由武漢科前生物股份有限公司提供。

1.3 主要試劑

豬PED-IgA抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測試劑盒購自韓國安捷公司。

1.4 試驗(yàn)?zāi)肛i群分組及免疫程序

PED免疫組母豬20頭，每組10頭分為兩組。試驗(yàn)組與對照組一免接種PED二聯(lián)滅活苗1.5頭份，二免接種PED三聯(lián)弱毒疫苗1頭份，三免接種PED二聯(lián)滅活苗1頭份。試驗(yàn)組在二免和三免注射疫苗前2 d開始至注射后5 d飼喂“豐強(qiáng)生泰”2 g/（頭·d）。對照組不飼喂“豐強(qiáng)生泰”。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)組與對照組的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同。

1.5 乳汁及血液采集

PED免疫組中的試驗(yàn)組和對照組母豬分娩后0、1、2、3、5、7、10、14 d 收集乳汁，放入密封瓶內(nèi)，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 PEDV組乳汁中IgA測定

使用前，先將采集的乳汁樣品和試劑盒進(jìn)行回溫，回溫結(jié)束，并輕輕混勻乳汁和試劑，乳汁樣品10 000 r/min離心2 min。參照說明書進(jìn)行測定。

1.7 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2010軟件進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)及整理，用其SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用ANOVA、LSD進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)和多重比較，SAS軟件進(jìn)行協(xié)方差分析（analysis of covariance），試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示[3]。

2 結(jié)果

按試劑盒說明書判斷推薦S/P值大于0.6認(rèn)為是有保護(hù)力的乳汁，低于或等于0.6是不具備保護(hù)力。按每個(gè)處理組為因子，各個(gè)采集天數(shù)為因變量進(jìn)行方差分析，兩組在 0、1、3、5、7、10、14 d 組群之間，豐強(qiáng)生泰組PEDV-IgA的S/P值均高于對照組，但經(jīng)單因素方差分析顯示差異不顯著（圖1）。但豐強(qiáng)生泰組 0、5、7、10、14 d 的 S/P 值均高于 0.6 的保護(hù)閾值，而對照組的S/P值僅在5 d時(shí)高于0.6的保護(hù)閾值，其它時(shí)間均低于0.6的保護(hù)閾值。

圖1 豐強(qiáng)生泰組和對照組IgA變化

3 討論與小結(jié)

PED疫苗免疫期間使用微生態(tài)制劑豐強(qiáng)生泰能夠提高母乳中PEDV的IgA的抗體水平，說明豐強(qiáng)生泰能明顯促進(jìn)免疫過程中IgA抗體的產(chǎn)生，增強(qiáng)對仔豬的免疫保護(hù)。

近年來，由于病毒的變異，PED疫苗的保護(hù)力逐漸降低，流行性腹瀉的防控越來越棘手，需要提高PED免疫效果，從而增強(qiáng)豬群對于流行性腹瀉病毒的抵抗力。而使用微生態(tài)制劑豐強(qiáng)生泰可以提高母豬母乳中IgA抗體水平，仔豬獲得更高水平的母源抗體，降低流行性腹瀉暴發(fā)可能性。此次試驗(yàn)證明免疫流行性腹瀉疫苗期間添加微生態(tài)制劑可以提高免疫效果，可為臨床上防控流行性腹瀉提供一種新的方法和思路。

[1]陳靜，劉德清，張寧，等.7種常用豬流行性腹瀉疫苗臨床免疫效果觀察和評(píng)估[J].養(yǎng)豬，2013（2）：106-108.

[2]Langel Stephanie N,Paim Francine Chimelo,Lager Kelly M,et al.Lactogenic Immunity and Vaccines for Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV)：Historical And Current Concepts[J].Virus Research,2016,226(11)：93-107.

[3]Lilly D M,Stillwell R H.Probiotics-Growth promoting factor produced by microorganisms[J].Science,1965(147)：747-748.