李雯瑋,姜鳳華,袁玄嫻,郭駿前,王禮麗,楊春白雪,侯洪烈

(1.遼東學(xué)院農(nóng)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系,遼寧 丹東 118003;2.遼寧省丹東市動物疫病控制中心,遼寧 丹東 118000)

雞新城疫是由新城疫病毒引起的雞和火雞的一種急性高度接觸性傳染病,常呈敗血過程,主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、黏膜和漿膜出血。家禽的巴氏桿菌病是由禽源多殺性巴氏桿菌引起的急性敗血性高度接觸性傳染病,又稱禽霍亂。急性型呈高發(fā)病率和高病死率,表現(xiàn)為敗血癥。慢性型病死率比較低,呈肉髯水腫、關(guān)節(jié)炎等。目前,臨床上常出現(xiàn)非典型雞新城疫或混合感染其他細(xì)菌病。2017年4月,丹東市某規(guī)?；怆u場飼養(yǎng)的45日齡22 000羽肉雞突然發(fā)生以呼吸困難和稀糞為主要癥狀的疫病,發(fā)病率 7.1%,病死率80.5%。病死雞全身黏膜和漿膜點(diǎn)狀出血,出血性腸炎及肝臟的灰白色壞死點(diǎn)。經(jīng)臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗室檢驗確診為新城疫和巴氏桿菌混合感染,報告如下。

1　材料與方法

1.1主要儀器 Qiagen Rotor Gene Q 2plex熒光PCR儀(德國凱杰公司)。

1.2檢測試劑 新城疫/禽流感病毒熒光定量PCR檢測試劑盒(深圳匹基生物工程有限公司生產(chǎn),批號:20140702、20140602、20140101)。 麥康凱培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、鮮血平板、微量生化發(fā)酵管,購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原、抗體,購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。1%雞紅細(xì)胞懸液、藥敏片均為本實(shí)驗室制作。

1.3發(fā)病情況 丹東市某養(yǎng)殖場飼養(yǎng)45日齡肉雞22 000羽,2017年4月雞群突然出現(xiàn)精神不振、離群呆立、嗜睡,排綠色和白色稀糞現(xiàn)象,個別雞糞便中混有血液,雞冠紫紅色。病雞呼吸困難,口鼻有黏液,仰頭張口呼吸,站立困難,翅下垂,頭頸向一側(cè)扭轉(zhuǎn)。第1天發(fā)病1 562只,死亡1 258只,病死率80.5%,后經(jīng)多種藥物治療仍繼續(xù)死亡。

1.4病理變化 病死雞氣管黏膜水腫、多黏液、充、出血。心包積液,心內(nèi)外膜及心冠脂肪出血點(diǎn)。肝臟腫大、土黃色、有針尖大灰白色壞死點(diǎn)和壞死灶,脾臟腫大、暗黑色、有白色壞死灶,腎臟腫大,腺胃乳頭腫脹,乳頭間出血,腸道彌漫性出血,盲腸扁桃體出血、腫大。

1.5實(shí)驗室診斷

1.5.1細(xì)菌學(xué)檢查 無菌采取3只病死雞肝臟分別制成觸片,革蘭染色鏡檢。分別無菌采取心血、肝臟涂布于麥康凱平板、普通營養(yǎng)瓊脂平板和鮮血平板,37℃培養(yǎng)過夜。再挑取典型菌落抹片,革蘭染色鏡檢。

1.5.2生化試驗 分離典型菌落,接種于血清肉湯培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)48 h。再取血清肉湯培養(yǎng)物每次0.2 mL,分別接種于每個微量生化發(fā)酵管。

1.5.3熒光定量PCR檢測 于發(fā)病雞群隨機(jī)抽取20只雞,無菌采取其喉頭以及脾臟,提取其RNA,采用RT-PCR結(jié)合熒光探針擴(kuò)增檢測技術(shù)檢測禽流感/新城疫病毒RNA,操作按檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5.4血凝抑制試驗 發(fā)病場隨機(jī)采集血清樣品50份,按照SN/T1109-2002的新城疫診斷方法,進(jìn)行微量血凝抑制試驗(HI)。檢測抗原稀釋倍數(shù)采用4個血凝單位,以完全抑制檢測抗原的血清最高稀釋度作為HI滴度,并設(shè)陰、陽性對照。

1.5.5藥敏試驗 取分離純培養(yǎng)的細(xì)菌均勻涂布于鮮血平板,將各藥敏紙片均勻貼于平板表面,每個平板貼6片,37℃培養(yǎng)24 h,檢測抑菌圈大小。判斷標(biāo)準(zhǔn):抑菌圈＜10 mm的藥物為低敏;10 mm≦抑菌圈≦20 mm為中敏;抑菌圈＞20 mm為高敏。

1.5.6動物試驗 取14只體重15～20 g小鼠,隨機(jī)平均分成兩組。試驗組每只腹腔注射0.5 mL的100倍稀釋的血清肉湯培養(yǎng)物,對照組每只腹腔注射0.5 mL未經(jīng)接種的血清肉湯培養(yǎng)基,連續(xù)觀察7 d。

2　結(jié)果

2.1細(xì)菌學(xué)檢查 肝臟觸片鏡檢可見兩極濃染的卵圓形、革蘭陰性短桿菌。心血、肝臟接種麥康凱和普通營養(yǎng)瓊脂平板均未長菌,鮮血平板見表面光滑露珠樣小菌落,邊緣整齊,無溶血。挑取典型菌落抹片鏡檢可見大量革蘭陰性兩極濃染卵圓陰性短桿菌。

2.2熒光定量PCR 隨機(jī)抽取20只雞的病毒檢測結(jié)果:其中6只雞檢出新城疫病毒陽性,所有雞H5和H9亞型禽流感病毒均陰性。

2.3生化試驗 生化試驗結(jié)果:觸酶氧化酶反應(yīng)(+),吲哚試驗(+),脲酶試驗(-),分解葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇;不分解乳糖、麥芽糖、山梨醇。

2.4血凝/血凝抑制試驗(HA/HI) 血凝抑制試驗結(jié)果見表1,其中6個抗體滴度(分別是7、9、10、11、12、13)有樣本分布,平均值為 11.37。 滴度超過11(包括11、12、13)的樣本占總樣本數(shù)的72%,標(biāo)準(zhǔn)差 1.47,離散度為 12.9%。

表1　血凝抑制試驗結(jié)果(log2)

2.5動物試驗 7只試驗組小鼠在注射后2～3 d全部死亡。7只對照組小鼠觀察7 d均正常。

2.6藥敏試驗 藥敏試驗結(jié)果:強(qiáng)力霉素、磺胺嘧啶、環(huán)丙沙星、氧氟沙星高敏;頭孢噻呋、頭孢噻肟、阿奇霉素、氟苯尼考中敏;阿米卡星、黏桿菌素、紅霉素低敏。

2.7治療 嚴(yán)格飼養(yǎng)管理,建立生物安全體系,場外建消毒間或消毒池,對來往人員和車輛有效消毒。對雞舍和周圍50 m距離1～2次/周消毒。盡量降低飼養(yǎng)密度,做好病死雞及其排泄物的無害化處理。保證雞舍空氣流通,保持適宜溫濕度范圍。

用0.5%二氯異氰尿酸鈉溶液對雞舍內(nèi)外噴霧消毒,2次/d,連續(xù)5 d,養(yǎng)殖區(qū)域撒生石灰2次/d,連續(xù)5 d。同時注意雞舍溫濕度變化,保證通風(fēng)換氣。

中藥治療:采取清熱解毒、燥濕、止瀉原則,組方:穿心蓮、金銀花各80 g,黃芩50 g,桔梗、大青葉各40 g,黃連須30 g,甘草30 g作為100只雞1天量,1劑/d,煎汁拌料,連用3 d。

西藥治療:雞群強(qiáng)力霉素拌料,磺胺嘧啶飲水,2次/日,連用5 d。對于有癥狀雞肌肉注射環(huán)丙沙星注射液。劑量5 mg/kg·bw,1次/日,連用3 d。此外,平日飲水中添加電解多維和維生素C,供自由飲用,以增強(qiáng)雞群抗病力。采取以上措施治療5 d后,疫情得到有效控制。

3　討論

熒光定量PCR檢測出雞群新城疫病毒陽性,H5和H9亞型禽流感病毒陰性。新城疫抗體滴度檢測結(jié)果為:免疫雞群在沒有補(bǔ)免的情況下,抗體滴度為27～213,平均值為11.37,最高抗體滴度達(dá)13,且整個雞群表現(xiàn)為非典型新城疫的臨床癥狀,說明該免疫雞群感染新城疫,可排除H5和H9亞型禽流感病毒感染。該規(guī)模場在常規(guī)接種新城疫的前提下仍然發(fā)生感染,說明疫苗沒有產(chǎn)生足夠的保護(hù)力導(dǎo)致發(fā)病。因此,若從根本上預(yù)防新城疫,除按時接種疫苗之外,還應(yīng)適時監(jiān)測的新城疫的抗體水平,分析其消長變化,確保雞群在新城疫高滴度抗體保護(hù)中。另外,在氣溫突降或接種疫苗時,事先連喂3～5 d電解多維、維生素C等抗應(yīng)激藥物。免疫前后2 d內(nèi),不使用抗生素、消毒藥等。

巴氏桿菌是一種條件病原菌,存在于某些雞的呼吸道中。一旦發(fā)生禽巴氏桿菌病,很難查出其傳染源,該病的發(fā)生既可外源性感染,也可內(nèi)源性感染。其感染途徑廣泛,呼吸道最易感,消化道以及傷損皮膚等也可以感染。感染雞群使用的器械以及自身排泄物、皮膚組織脫落物等都是傳染的主要媒介。該規(guī)模場的發(fā)病可能是由于雞群感染新城疫導(dǎo)致抵抗力降低而繼發(fā)巴氏桿菌感染所致。