楊艷艷

【摘 要】目的：制造家兔發(fā)熱模型，給予家兔不同劑量的熱必清顆粒灌胃后，檢測家兔血清中IL_1β含量及腸道雙歧桿菌影響的實驗研究，研究寒涼泄熱的熱必清顆粒對于小兒發(fā)熱的療效及對腸道副作用的影響，從而指導(dǎo)臨床上利用寒涼泄熱的方法達到中病即止、合理規(guī)范的使用效果。方法：將35只家兔隨機分為5組，除空白對照組，其余組經(jīng)家兔耳緣靜脈處注射大腸桿菌內(nèi)毒素（LPS），建立家兔發(fā)熱模型，造模成功后，空白組給予常規(guī)飼養(yǎng)，模型組給予生理鹽水10ml/kg灌胃，其余組給予熱必清大中小劑量4.618g/kg，9.327g/kg，12.932g/kg灌胃，每隔0.5h測1次體溫，連續(xù)監(jiān)測6h，取血清標(biāo)本測定相應(yīng)指標(biāo)含量及腸道雙歧桿菌的數(shù)量。結(jié)果：注射大腸桿菌的家兔體溫升高表現(xiàn)為雙相熱型，熱必清顆粒降低發(fā)熱家兔體溫效果明顯，小劑量組與中劑量組相比，中劑量組對于降低IL_1β含量有明顯差異（P<0.05），大劑量與中劑量組相比，未見明顯差異（P>0.05）。結(jié)論：小劑量的熱必清雖可使家兔體溫降低，但藥物作用短，易反彈，大劑量的效果好，但會影響腸道菌群，存在一定的副作用，中劑量效果好不存在一定的副作用，為最佳劑量。

【關(guān)鍵詞】發(fā)熱；大兔；熱必清顆粒；劑量 ；IL-1β；雙歧桿菌

【中圖分類號】 R749.053【文獻標(biāo)識碼】 B 【文章編號】 1672-3783（2018）04-03-073-01

發(fā)熱，在兒科臨床中是十分常見的癥狀，它不僅是多種疾病引起的重要病理過程和臨床表現(xiàn)，也是疾病的預(yù)警信號[1]，小兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不夠完全，自身抵御疾病的能力較差，且發(fā)展迅速，容易感受外邪或者內(nèi)傷而導(dǎo)致發(fā)熱，通過臨床觀察，熱必清是陜西中醫(yī)藥大學(xué)韓玲主任醫(yī)師30年經(jīng)驗方。臨床療效確切，能夠有效地改善癥狀，縮短病程。本文探討以寒涼泄熱為基本大法的熱必清顆粒對于小兒發(fā)熱的療效以及對于腸道副作用影響的實驗研究。

1 實驗材料

1.1 動物 本實驗為健康的新西蘭幼齡家兔，雌雄不拘，體重1800-2000g，共35只，購自西安交通大學(xué)實驗購物中心，證書編號為：SCXK（陜 2015-0017號）。

1.2 實驗藥品、試劑、儀器 熱必清免煎顆粒由陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥制劑中心提供。大腸桿菌內(nèi)毒素 純化LPS稀釋于生理鹽水，配成20ug/ml的液體，-15℃儲藏，于使用前用溫水預(yù)熱（哈藥集團制藥廠；80萬u/支，批號：A120406214.），0.9氯化鈉注射液 西安楊森制藥有限公司（250ml/瓶）生產(chǎn)，經(jīng)過醫(yī)藥學(xué)鑒定，符合2005版藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。大兔白介素（ IL-1β） ELISA 檢測試劑盒 、雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基（ 北京誠林生 物科技有限公司）。全自動酶標(biāo)儀：由美國Bio-Tek提供，批號為ELX808IU，離心機、電子臺秤、顯微鏡、恒溫箱、注射器等由陜西中醫(yī)藥大學(xué)南校區(qū)實驗中心提供使用。

2 實驗方法

2.1 實驗前動物準(zhǔn)備及分組 實驗前將大兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，飼育室室溫（ 25 ± 2） ℃，相對濕度 40%～60%，實驗前3d每天于喂養(yǎng)2h后，開始測家兔的肛溫，每隔1h測量一次，共測量6次，最高、最低體溫之差不超過0.4℃的新西蘭大兔，作為正式實驗[2]。然后隨機分組：空白組、模型組、熱必清小劑量組、熱必清中劑量組、熱必清大劑量組，每組7只。

2.2 造模 除空白組，其余組均注射15ug/kgLPS溶液之后，約30min后出現(xiàn)發(fā)熱的表現(xiàn)，即體溫與基礎(chǔ)體溫想比超過0.3℃，心率上升，并出現(xiàn)發(fā)抖、蜷縮、呼吸急促等發(fā)熱相關(guān)癥狀，說明造模成功[3]。

2.3 實驗干預(yù)治療 熱必清顆粒按《醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)》動物與人劑量的折算方法進行換算，即家兔的用藥劑量（mg/kg）=兒童單次用藥（mg/kgx3.08x0.965x1.036。

經(jīng)計算，A組空白對照組：不做任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)。B組造模成功后給予生理鹽水10ml/kg灌胃；C組熱必清小劑量組 造模成功后，給予熱必清顆粒4.618g/kg灌胃；D組熱必清中劑量組 造模成功后，給予熱必清顆粒9.327g/kg灌胃；E組熱必清大劑量組 造模成功后，給予熱必清顆粒12.932g/kg灌胃。

2.4 指標(biāo)的觀察 （1）各組動物予藥物干預(yù)治療后每0.5h測量體溫1次，連續(xù)記錄至實驗結(jié)束，并繪制體溫變化曲線。（2） IL-1β的檢測：各組大鼠靜脈采血 2mL送檢，樣品送檢、步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。（3） 在給予熱必清之前以及最后 1 次給予熱必清后 24 h，無菌采取家兔糞便約0.1g，加滅菌生理鹽水，以1：50稀釋，制成均勻懸液，再以此為第一稀釋度，依次10倍遞增稀釋成一系列不同稀釋度的含菌液至10-8，選擇2個合適的稀釋度接種在雙歧桿菌培養(yǎng)基上。培養(yǎng)后，鏡檢G+、無芽孢、形態(tài)不規(guī)則的所有菌落過氧化氫酶陰性等鑒定計數(shù)菌落，計算出每克濕便中的雙歧桿菌數(shù)，計算方法：雙歧桿菌（/g）=LOg10[平均菌落數(shù)/滴x50x稀釋倍數(shù)]，結(jié)果以LOgn10CFU/g[4]表示。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，數(shù)據(jù)均以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（x±s）表示，采用單因素方差分析，兩組間對比用t檢驗，若P<0.01有顯著差異；P<0.05為有明顯差異，P>0.05則無顯著性差異。

3 實驗結(jié)果

3.1 給予家兔熱必清干預(yù)治療后各組體溫變化（△T為家兔發(fā)熱時的最高體溫與基礎(chǔ)體溫的差值）如圖1所示。

由圖一可以看出，大劑量組約h降至正常，中小劑量分別是1.5h、2h；隨后大中劑量體溫基本保持恒定；小劑量約2h降至正常，于3h再次上升且持續(xù)升高。結(jié)論：模型組與空白組體溫升高表現(xiàn)為雙相熱型，兩組具有明顯差異（p<0.05），提示造模方法可行，經(jīng)治療后，C、D、E組與模型組相比。體溫降低，有明顯差異（P<0.05），C與D組有明顯差異（P<0.05），D與E未見明顯差異（P>0.05），提示大中劑量的熱必清顆粒退熱平穩(wěn)，未見反彈，降溫效果明顯。

從表1可以看出：A與B組相比，血清Il-1β含量升高，有明顯差異（P<0.05），說明Il-1β是導(dǎo)致家兔發(fā)熱的有效炎癥因子，給藥后，熱必清組與模型組相比，Il-1β含量下降，有明顯差異（P<0.05），C與D降低Il-1β含量更明顯（P<0.05），E與D組未見明顯差異（P>0.05），說明小劑量相比大中劑量，在相同時間內(nèi)對于發(fā)熱家兔體內(nèi)炎性介質(zhì)Il-1β的調(diào)控作用較弱，退熱效果一般且不持久。

由上表可以看出：給藥前：B、C、D、E與A組相比，其腸道雙歧桿菌數(shù)量無顯著差異（P>0.05）；給藥后：B、C、D與A相比，其腸道雙歧桿菌數(shù)量無顯著差異（P>0.05），而E與A組相比，腸道雙歧桿菌數(shù)量明顯升高（P<0.05）； E組給藥前后對比雙歧桿菌數(shù)量顯著升高（P<0.05），說明以寒涼泄熱為基本大法的熱必清顆粒隨藥物計量的增加，會對家兔腸道菌群造成一定的影響，引起腸道菌群紊亂，造成相應(yīng)的副作用。

4 討論

發(fā)熱，是指由于致熱原直接作用于機體的體溫調(diào)節(jié)中樞、機體自身體溫中樞功能紊亂或其他原因等引起的產(chǎn)熱增多、散熱減少，導(dǎo)致體溫調(diào)定點上移而引起調(diào)節(jié)性體溫升高[5]，小兒生長快、免疫力低、發(fā)育不全，極易出現(xiàn)發(fā)熱的癥狀，尤其是年齡越小的嬰兒，皮下脂肪含量低，更加容易發(fā)病。

本次實驗選用新西蘭幼兔的正常體溫為38.0-39.5℃，對于熱源的反應(yīng)與人基本相同，家兔對制熱物質(zhì)反應(yīng)敏感，并且發(fā)熱反應(yīng)典型、恒定，給予家兔耳緣經(jīng)脈注射內(nèi)毒素的方法可以引起家兔感染性發(fā)熱，且發(fā)熱明顯，易于觀察，常作為各項制熱性研究的實驗動物，在實驗動物學(xué)中廣泛認(rèn)可。并且家兔價格合理，購買途徑方便可靠，因此選用家兔做本實驗最合適不過。

本實驗LPS造模成功地家兔經(jīng)熱必清顆粒灌胃治療后，發(fā)熱、蜷縮、呼吸急促、寒戰(zhàn)等癥狀均有改善，家兔血清中IL-1β含量降低，這可能是熱必清顆粒解熱作用的機制之一。而小劑量的熱必清雖然可以使發(fā)熱家兔的體溫下降，但藥物作用時間短，易反彈，大劑量的熱必清降溫效果好，但會造成腸道菌群的紊亂，存在副作用的風(fēng)險，中劑量退熱好且持久，并不會引起腸道菌群紊亂，可作為最佳劑量，指導(dǎo)臨床用藥，為治療小兒發(fā)熱提供一定的臨床依據(jù)。

參考文獻

[1] 李增宏，王瑞東.發(fā)熱信號傳導(dǎo)途徑及診斷程序研究.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2007；3：43-45.

[2] 李蓉，任美萍，陳海霞.復(fù)爾康注射液熱原檢查試驗.四川生理科學(xué)雜志，2010，2：77-78

[3] 劉瑞東.內(nèi)毒素制熱的熱型和熱限研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2003；4（13）：5.

[4] 施珊珊，江振友，等.參苓散調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群作用的實驗研究[J].廣東醫(yī)學(xué)，2015，8：1420-1421.

[5] 戴萬亨，閆平慧.診斷學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2009：7-8.