施育華，劉小兵，龔建平

(1 鹽城市第三人民醫(yī)院，江蘇鹽城 224001；2江蘇省腫瘤醫(yī)院)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，是婦女惡性腫瘤死亡的主要原因[1]，因此乳腺癌的早期診斷尤為重要。靶基因在乳腺癌預(yù)防、診斷和治療中的作用是目前研究熱點(diǎn)[2]。SGT是一種細(xì)小病毒NS1蛋白的結(jié)合伴侶，可參與細(xì)胞周期調(diào)控、蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)運(yùn)輸以及蛋白質(zhì)泛素化等細(xì)胞生物過程[3]。SGT能夠參與激素受體或其他途徑的蛋白質(zhì)之間的相互作用[4]。SGT與β-淀粉樣肽相互作用有關(guān)[5]。SGT與細(xì)胞有絲分裂有關(guān)，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞分裂，細(xì)胞凋亡和基因調(diào)控中發(fā)揮作用[6]。小谷氨酰胺三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α(SGTA)是SGT家族中的重要成員，與SGT具有60%的氨基酸序列同源性。SGTA是一個(gè)新的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，SGTA的過表達(dá)與肺癌、肝癌和食管鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有關(guān)[7～9]。但目前SGTA在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義尚未明確。增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)是一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，目前臨床將其作為標(biāo)記細(xì)胞增殖狀態(tài)的抗原。本研究觀察了乳腺癌組織中的表達(dá)變化，分析其與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2002年6月～2012年06月間鹽城市第三人民醫(yī)院和江蘇省腫瘤醫(yī)院收治的90例女性乳腺癌患者，均行腫瘤切除術(shù)，術(shù)中留取乳腺癌組織及相應(yīng)癌旁組織(距離癌組織≥5 cm)的石蠟包埋標(biāo)本?；颊咧心挲g29～78 歲，中位年齡50歲；所有患者在術(shù)前均未接受過任何治療，病理診斷由病理科高級(jí)職稱專家經(jīng)雙盲法確認(rèn)，臨床病理資料完整。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 乳腺癌組織及癌旁正常組織SGTA、Ki-67檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)法。取乳腺癌組織、癌旁正常組織將石蠟組織切4 μm片, 4 %甲醛和梯度酒精脫蠟, 0.3 %過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶的活性。雙蒸水沖洗后100 ℃烤箱5 min ,自然冷卻；PBS沖洗3遍,加入10 %小牛血清封閉非特異性抗原, PBS沖洗后,滴加多克隆兔抗人SGTA抗體、Ki-67抗體(1∶100，均購自Santa Cruz, USA)，36 ℃孵育120 min，PBS沖洗3遍；滴加生物素抗兔IgG PBS二抗孵育30 min，用PBS緩沖液沖洗3遍；DAB顯色，蘇木精復(fù)染，明膠甘油封片。鏡下觀察判斷。SGTA以乳腺癌細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核(極少數(shù))出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性表達(dá)，Ki-67陽性細(xì)胞指細(xì)胞核染色為淡黃至棕黃色或棕褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)有代表性的高倍視野(×400)，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。陽性細(xì)胞百分率≤32%者為低表達(dá)，>32%者為高表達(dá)。

1.3 乳腺癌患者生存情況隨訪 對(duì)90例患者進(jìn)行隨訪，采用門診或住院復(fù)查與電話隨訪相結(jié)合的方式進(jìn)行。生存時(shí)間按患者手術(shù)時(shí)間為起始點(diǎn)，以月為單位進(jìn)行計(jì)算?？偵鏁r(shí)間(OS)定義為從手術(shù)之日開始至死亡或末次隨訪時(shí)間，隨訪時(shí)間為18～120個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為64個(gè)月。

2 結(jié)果

乳腺癌組織、癌旁正常組織中SGTA的陽性表達(dá)率分別為76.7%(69/90)、35.5%(32/90)，二者比較，P<0.05。乳腺癌組織、癌旁正常組織中Ki-67的陽性表達(dá)率分別為80.0%(72/90)、32.2%(29/90)，二者比較，P<0.05。

SGTA、Ki-67的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。SGTA的表達(dá)與乳腺癌的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及雌激素受體(ER)有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)類型、孕激素受體(PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)及p53等無關(guān)(P均>0.05)。Ki-67的表達(dá)與乳腺癌的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ER有關(guān)(P均<0.05)，而與患者年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)類型、p53等無關(guān)(P均>0.05)。

乳腺癌組織中SGTA和Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)(r2=0.356，P=0.003)。

組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ki-67高表達(dá)及SGTA高表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)(P均<0.05)，而與患者年齡、腫瘤直徑、ER、PR、HER2及p53無關(guān)(P均>0.05)。多因素分析進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，SGTA和Ki-67影響乳腺癌術(shù)后生存時(shí)間的危險(xiǎn)系數(shù)分別為3.303、2.468(P均<0.05)。SGTA高表達(dá)者與低表達(dá)者的OS分別為51.8月、74.6月,二者比較，P<0.05。 乳腺癌患者OS比較見圖1。

表1 SGTA 及Ki-67 的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖1 90例乳腺癌患者生存曲線

3 討論

在我國(guó)乳腺癌已經(jīng)成為女性惡性腫瘤患者死亡的主要原因之一[10]。乳腺癌早期診斷率的提高和女性患者生存和預(yù)后息息相關(guān)。目前臨床上有特異性能提高確診率及改善治療預(yù)后相關(guān)的靶向分子極少，雖然近年來乳腺癌的診斷方法有所改善，但早期乳腺癌患者診斷率依然較低，預(yù)后仍然很差[11]。

SGT最初被鑒定為病毒蛋白的結(jié)合蛋白，通過不同的結(jié)構(gòu)域廣泛參與細(xì)胞的各種生物進(jìn)程，進(jìn)一步產(chǎn)生相互作用。研究發(fā)現(xiàn)SGTA為其家族成員，它能夠參與激素受體或其他途徑蛋白相互作用，如可以與Bag-6/Bat-3等蛋白相互作用并且減少其蛋白水平，從而導(dǎo)致細(xì)胞有絲分裂停滯在早中期，進(jìn)而凋亡[9]。SGTA作為SGT家族中的重要成員，它可以作為雄激素受體共同伴侶之一，在細(xì)胞質(zhì)中，通過維持雄激素受體來限制相關(guān)信號(hào)通路[16]，參與某些細(xì)胞的發(fā)展進(jìn)程[6，12]。SGTA稱為有絲分裂觸發(fā)因子[8]，可能參與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[13,14]，因而研究其在乳腺癌中的發(fā)生發(fā)展具有重要的意義。本文通過分析乳腺癌中SGTA表達(dá)，探討其與乳腺癌相關(guān)參數(shù)及患者預(yù)后可能存在的關(guān)聯(lián)。通過免疫組化方法發(fā)現(xiàn)SGTA在乳腺癌組織與鄰近癌旁組織中的表達(dá)有顯著性的差異。

Ki-67已被證實(shí)是腫瘤細(xì)胞增殖活性的標(biāo)記物[15,16]，Ki-67在乳腺癌組織與鄰近癌旁組織中的表達(dá)也有顯著性的差異，結(jié)果提示SGTA與Ki-67的高增值活性可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)，SGTA過度表達(dá)可能代表乳腺癌發(fā)展的一個(gè)重要機(jī)制[17,18]。 本研究評(píng)估了患者SGTA與Ki-67的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果表明，SGTA與Ki-67表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、ER、淋巴轉(zhuǎn)移與否有關(guān)，患者組織學(xué)分級(jí)越差更容易顯示出高活性的SGTA。相關(guān)性分析結(jié)果顯示乳腺癌組織中SGTA的表達(dá)與Ki-67呈正相關(guān)，提示SGTA可能與腫瘤的增殖有關(guān)，SGTA可能通過調(diào)控乳腺癌組織中Ki-67表達(dá)或介導(dǎo)它們之間的某種通路發(fā)生作用。臨床病理參數(shù)與生存狀況的關(guān)系研究表明，組織分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ki-67高表達(dá)及SGTA高表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)，且SGTA和Ki-67的危險(xiǎn)系數(shù)分別達(dá)到3.303、2.468，SGTA高表達(dá)乳腺癌患者OS低于SGTA低表達(dá)者。提示SGTA和Ki-67對(duì)乳腺癌的侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移有重要的作用。

綜上所述，乳腺癌組織中SGTA高表達(dá)，SGTA參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。SGTA是影響乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。SGTA可能成為乳腺癌一個(gè)新的靶向檢測(cè)指標(biāo)，但其具體作用機(jī)制以及對(duì)患者預(yù)后的影響尚需進(jìn)一步臨床驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

[1] Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al. Global cancer statistics, 2002[J]. CA Cancer J Clin, 2005,55(2):74-108.

[2] Kelloff GJ, Sigman CC. Cancer biomarkers: selecting the right drug for the right patient[J]. Nat Rev Drug Discov, 2012,11(3):201-214.

[3] Cziepluch C, Lampel S, Grewenig A, et al. H-1 parvovirus-associated replication bodies: a distinct virus-induced nuclear structure[J]. J Virol, 2000,74(10):4807-4815.

[4] D′Andrea LD, Regan L. TPR proteins: the versatile helix[J]. Trends Biochem Sci, 2003,28(12):655-662.

[5] Fonte V, Kapulkin WJ, Taft A, et al. Interaction of intracellular beta amyloid peptide with chaperone proteins[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002,99(14):9439-9444.

[6] Winnefeld M, Grewenig A, Schnolzer M, et al. Human SGT interacts with Bag-6/Bat-3/Scythe and cells with reduced levels of either protein display persistence of few misaligned chromosomes and mitotic arrest[J]. Exp Cell Res, 2006,312(13):2500-2514.

[7] Xue Q, Lv L, Wan C, et al. Expression and clinical role of small glutamine-rich tetratricopeptide repeat (TPR)-containing protein alpha (SGTA) as a novel cell cycle protein in NSCLC[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2013,139(9):1539-1549.

[8] Lu C, Liu G, Cui X, et al. Expression of SGTA correlates with prognosis and tumor cell proliferation in human hepatocellular carcinoma[J]. Pathol Oncol Res, 2014,20(1):51-60.

[9] Yang X, Cheng L, Li M, et al. High expression of SGTA in esophageal squamous cell carcinoma correlates with proliferation and poor prognosis[J]. J Cell Biochem, 2014,115(1):141-150.

[10] Wilson CM, Tobin S, Young RC. The exploding worldwide cancer burden: the impact of cancer on women[J]. Int J Gynecol Cancer, 2004, 14(1):1-11.

[11] Wang H, Shen H, Wang Y, et al. Overexpression of small glutamine-rich TPR-containing protein promotes apoptosis in 7721 cells[J]. FEBS Lett, 2005,579(5):1279-1284.

[12] Buchanan G, Ricciardelli C, Harris JM, et al. Control of androgen receptor signaling in prostate cancer by the cochaperone small glutamine rich tetratricopeptide repeat containing protein alpha[J]. Cancer Res, 2007,67(20):10087-10096.

[13] Moritz A, Li Y, Guo A, et al. Akt-RSK-S6 kinase signaling networks activated by oncogenic receptor tyrosine kinases[J]. Sci Signal, 2010, 3(136):64.

[14] Mann CD, Neal CP, Garcea G, et al.Prognostic molecular markers in hepatocellular carcinoma: a systematic review[J]. Eur J Cancer, 2007, 43(6):979-992.

[15] Schantl JA, Roza M, De Jong AP, et al. Small glutamine-rich tetratricopeptiderepeat-containing protein (SGT) interacts with the ubiquitin-dependent endocytosis (UbE)motif of the growth hormone receptor[J]. Biochem J，2003，373( 3):855-863.

[16] 李靜平，張香梅．乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織FOXP3表達(dá)及其預(yù)后意義[J]．中華腫瘤防治雜志，2017，24(1)：23-29．

[17] 陳萬青，鄭榮壽．中國(guó)女性乳腺癌發(fā)病死亡和生存狀況[J]．中國(guó)腫瘤臨床，2015，42(13)：668-674．