劉紅霞,烏云,高增麗,楊永龍,劉彥紅,曹文慧,孫濤,李洪亮,母智深
(內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團(tuán))股份有限公司,內(nèi)蒙古呼和浩特011500)
伴隨著中國經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展,人們的消費(fèi)水平得到大幅提高,對(duì)食物的口味和營養(yǎng)要求也越來越高。酸奶的口感、風(fēng)味、營養(yǎng)及健康功能越來越被消費(fèi)者追捧[1]。酸奶產(chǎn)量以年平均25%的速度增長,已經(jīng)成為我國第一大發(fā)酵乳制品,是最具盈利和發(fā)展?jié)摿Φ漠a(chǎn)業(yè)[2-3]。
近年來,褐色乳飲料因具有抑制腫瘤、抗氧化、抗衰老等多種生理功效及良好風(fēng)味而風(fēng)靡世界,生產(chǎn)量逐年攀升,越來越受消費(fèi)者青睞[4]。褐色乳飲料是以發(fā)生輕微褐變的發(fā)酵乳為基料,再經(jīng)稀釋、調(diào)配等工藝生產(chǎn)的呈淺褐色的乳酸菌飲料,以其特有的風(fēng)味和色澤吸引消費(fèi)者[5]。
國外相關(guān)的類似加工技術(shù)的產(chǎn)品有日本的養(yǎng)樂多,俄羅斯的格瓦斯,養(yǎng)樂多產(chǎn)品是采用牛奶中的蛋白質(zhì)和葡萄糖經(jīng)過美拉德反應(yīng),接種乳酸菌發(fā)酵再調(diào)配的一種乳飲料[6-7]。格瓦斯則是面包屑接種酵母菌、乳酸菌發(fā)酵的一種生物飲品[8]。國內(nèi)褐色乳飲料主要有蒙牛優(yōu)益C和伊利的每益添等產(chǎn)品,產(chǎn)品的加工過程與日本的養(yǎng)樂多產(chǎn)品相似,也取得了良好的銷售成績。
目前,市場上的褐色發(fā)酵乳飲料,發(fā)酵劑基本選擇干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌為基礎(chǔ)發(fā)酵菌種,發(fā)酵的時(shí)間基本在72 h以上。為提高褐色發(fā)酵乳飲料生產(chǎn)效率,在基本不影響傳統(tǒng)發(fā)酵風(fēng)味的前提下縮短發(fā)酵時(shí)間,需要進(jìn)行菌株的篩選和復(fù)配,發(fā)酵時(shí)間控制在40 h~50 h 范圍內(nèi),發(fā)酵奶酸度達(dá)到 230 °T~280 °T,pH值達(dá)到3.20~3.65。提高褐色乳飲料發(fā)酵速率,對(duì)于生產(chǎn)效率和降低能耗具有較好的理論及實(shí)踐意義。
L.h1、L.h2和L.h3為瑞士乳桿菌,Lb46為乳酸乳球菌乳脂亞種,以上菌種均從新疆樣品中自行分離并經(jīng)過生理生化及分子生物學(xué)鑒定,副干酪乳桿菌Lpc-37:杜邦公司提供,菌株發(fā)酵特征見表1。
表1 菌株發(fā)酵特性Table 1 The bacterial fermentation characteristic
脫脂乳粉、葡萄糖和白砂糖蒙牛公司研發(fā)中心提供。發(fā)酵基料:10%脫脂乳+3%葡萄糖+5%白砂糖。
AMS-Alliance乳品發(fā)酵監(jiān)控儀:法國愛利安斯儀器公司;IKA EUROSTAR高速分散機(jī):德國IKA;HITACHI CT6E離心機(jī):日本日立;梅特勒MS603電子天平:瑞士梅特勒;均質(zhì)機(jī)APV-1000:德國APV;LRH-250A生化培養(yǎng)箱:泰宏醫(yī)療器械有限公司。
1.3.1 發(fā)酵試驗(yàn)
1)檢測4株輔助發(fā)酵菌株的發(fā)酵特性,取適量乳基,巴氏殺菌(90℃~95℃,5 min~10 min),冷卻至43℃。依據(jù)試驗(yàn)方案設(shè)置的接種量,靜置于43℃發(fā)酵。發(fā)酵過程中監(jiān)測乳體系pH值變化情況,pH值接近4.5時(shí)即可停止發(fā)酵,取出,冷卻于4℃條件下后酸化12 h~24 h后,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測定,并進(jìn)行感官品評(píng)。
2)依據(jù)單菌株發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)復(fù)配方案。
1.3.2 檢測方法
1)發(fā)酵曲線:借助Cinac酸度監(jiān)控儀檢測發(fā)酵樣品的pH值隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線。
2)感官品評(píng):挑選25名發(fā)酵奶質(zhì)檢人員(經(jīng)常性進(jìn)行酸奶感官評(píng)定培訓(xùn))對(duì)樣品進(jìn)行品評(píng)[9]。發(fā)酵乳冷卻至4℃~8℃過夜,觀察和品嘗發(fā)酵樣品,記錄酸奶狀態(tài)。
3)酸奶酸度的滴定方法:取10 g酸奶放入250 mL三角瓶中,加入20 mL蒸餾水,再加入2滴~3滴0.5%的酚酞酒精溶液,小心搖勻,用濃度為0.1 mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色,在30 s內(nèi)不消失為宜。消耗濃度為0.1 mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)乘以 10,即為酸度°T。
4)發(fā)酵乳持水力測定[7]:準(zhǔn)確稱取發(fā)酵乳樣品10 g置于離心管中,4 000 r/min離心10 min,稱重發(fā)酵乳上清(乳清),質(zhì)量記為 n,g。持水力/%=(m-n)/m×100,其中m為發(fā)酵乳樣品質(zhì)量,g[10-11]。試驗(yàn)結(jié)果取3次重復(fù)測定的平均值。
2.1.1 單菌株發(fā)酵酸奶的pH值變化情況
4株輔助菌株單獨(dú)發(fā)酵的添加量及其發(fā)酵酸奶24 h pH值見表2,單菌株發(fā)酵酸奶pH值隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線如圖1所示。
表2 菌株添加量及其發(fā)酵酸奶24小時(shí)pH值Table 2 The strain content and the pH value of the fermented yogurt for 24 hours
由圖1可以看出,發(fā)酵乳的pH值呈現(xiàn)出平臺(tái)(延滯期)-迅速下降(對(duì)數(shù)生長期)-緩慢下降(穩(wěn)定期)的變化趨勢(shì)。對(duì)比方案1和方案2,菌種添加量會(huì)影響發(fā)酵速度,發(fā)酵乳的pH值變化在延滯期和對(duì)數(shù)生長期出現(xiàn)較明顯的區(qū)別,增加瑞士乳桿菌L.h1的菌種添加量,可縮短延滯期,提高發(fā)酵速率,但隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,終點(diǎn)pH值相差不大,所以從成本節(jié)約的角度考慮,應(yīng)該選擇瑞士乳桿菌L.h1較低的添加濃度。
圖1 單菌株發(fā)酵酸奶pH值隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線Fig.1 The pH value of fermented yogurt with single strain changed with the fermentation time
單菌株的產(chǎn)酸速率各不相同,3支瑞士乳桿菌,只有L.h1發(fā)酵24 h可以把pH值降到3.60左右。3支瑞氏乳桿菌的添加量相同的情況下,L.h2的延滯期最短,發(fā)酵接近6 h后,pH值迅速下降,說明該階段菌體處于對(duì)數(shù)生長期,發(fā)酵接近16 h,pH值下降變緩,產(chǎn)酸速率降低,說明此時(shí)發(fā)酵已進(jìn)入平穩(wěn)階段(穩(wěn)定期)。持續(xù)發(fā)酵24 h,終點(diǎn)pH值達(dá)到3.75。
3支瑞士乳桿菌,菌株L.h1的延滯期最長,發(fā)酵約8 h以內(nèi),L.h1的pH值下降最慢,發(fā)酵8 h以后,菌株L.h1發(fā)酵進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期,pH值迅速下降階段,發(fā)酵大約9 h左右,pH值下降速度趕超菌株L.h3,發(fā)酵接近13 h左右,菌株L.h1的pH值下降速度又趕超菌株L.h2,說明瑞氏乳桿菌L.h1在對(duì)數(shù)生長期產(chǎn)酸速度快,快速將發(fā)酵乳pH值降到最低。發(fā)酵24 h后,瑞氏乳桿菌L.h1、L.h2和L.h3發(fā)酵酸奶的pH值分別為3.60、3.75 和 3.70。
乳酸乳球菌Lb46發(fā)酵的延滯期較長,發(fā)酵大約9 h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期,pH值開始迅速下降,與3支瑞士乳桿菌相比,對(duì)數(shù)生長期pH值下降速度比較平緩,一直到發(fā)酵22 h,pH值下降明顯變緩,發(fā)酵進(jìn)入穩(wěn)定期,持續(xù)發(fā)酵24 h,終點(diǎn)pH值達(dá)到3.88。選擇乳酸乳球菌Lb46的目的是補(bǔ)充褐色酸奶快速發(fā)酵過程中損失的香味和酸奶質(zhì)構(gòu),產(chǎn)酸速度不作為主要參考指標(biāo)。
2.1.2 單菌株發(fā)酵酸奶的感官結(jié)果
發(fā)酵酸奶品嘗結(jié)果見表3。
由表3可以看出,乳酸乳球菌Lb46產(chǎn)酸速度慢,但發(fā)酵奶的風(fēng)味和質(zhì)構(gòu)均比較理想,選擇乳酸乳球菌L46的目的就是改善發(fā)酵奶的風(fēng)味和質(zhì)構(gòu),這株菌滿足試驗(yàn)需求和目的。3支瑞士乳桿菌,同等濃度添加量發(fā)酵奶,酸奶質(zhì)構(gòu)和發(fā)酵風(fēng)味最好的是L.h2,其次為L.h1,L.h3的酸奶質(zhì)構(gòu)和風(fēng)味均不理想,但是菌株L.h2產(chǎn)酸速度較慢,不能滿足產(chǎn)品菌種復(fù)配需求。所以選擇發(fā)酵速度最快的瑞士乳桿菌L.h1和產(chǎn)香菌株Lb46與基礎(chǔ)發(fā)酵菌株Lpc-37(副干酪乳桿菌)進(jìn)行復(fù)配試驗(yàn),檢測發(fā)酵曲線、發(fā)酵奶的持水性和進(jìn)行感官品評(píng),以期確定單株瑞士乳桿菌L.h1對(duì)產(chǎn)酸和單株乳酸乳球菌Lb46對(duì)產(chǎn)香的影響程度,同時(shí)摸索出3株菌復(fù)配的理想比例,開發(fā)出提高褐色發(fā)酵乳飲料發(fā)酵效率的發(fā)酵劑。
表3 發(fā)酵酸奶品嘗結(jié)果Table 3 Fermented yoghurt tasted results
優(yōu)選出的3株乳酸菌復(fù)配方案見表4,菌種復(fù)配比例依據(jù)活力單位cfu/mL計(jì)算。
表4 菌種復(fù)配方案Table 4 Strain compounded scheme
2.2.1 不同復(fù)配比例發(fā)酵乳的pH值變化情況
不同復(fù)配方案發(fā)酵乳pH值隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線見圖2。
由復(fù)配方案和發(fā)酵曲線可以看出,方案1和方案3的區(qū)別在于觀察瑞士乳桿菌添加比例對(duì)發(fā)酵基料產(chǎn)酸速度的影響。在發(fā)酵40 h前,方案1的pH值下降速度明顯比方案3的速度慢,但隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,40 h后,2個(gè)方案的發(fā)酵乳pH值隨發(fā)酵發(fā)酵時(shí)間下降的曲線基本重合,說明瑞士乳桿菌L.h1添加比例會(huì)影響發(fā)酵基料前期的產(chǎn)酸速度,但是隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,發(fā)酵基料的pH值相近,發(fā)酵40 h后基本不影響發(fā)酵基料的終點(diǎn)pH值,綜合試驗(yàn)結(jié)果和成本優(yōu)化,選擇基礎(chǔ)發(fā)酵菌株Lpc-37和瑞士乳桿菌L.h1添加比例為100 ∶1。
圖2 不同復(fù)配方案發(fā)酵乳pH值隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線Fig.2 The pH value of fermented milk with different scheme changed with the fermentation time
方案4和方案5的試驗(yàn)?zāi)康氖菍?duì)比乳酸乳球菌Lb46菌株添加比例對(duì)發(fā)酵速度的影響,由發(fā)酵曲線可以看出,從發(fā)酵開始到結(jié)束,這兩條曲線基本是重合的,說明Lb46菌株添加比例對(duì)發(fā)酵乳pH值下降速度影響不大。由方案6的發(fā)酵曲線可以看出,基礎(chǔ)發(fā)酵菌和乳酸乳球菌Lb46單獨(dú)復(fù)配不能滿足本次褐色乳飲料發(fā)酵劑復(fù)配目的,發(fā)酵終點(diǎn)pH值較高。對(duì)比方案1和方案2的發(fā)酵曲線,發(fā)現(xiàn)乳酸乳球菌Lb46會(huì)影響發(fā)酵基料前期的產(chǎn)酸速度,縮短發(fā)酵延滯期,加快產(chǎn)酸速度,同時(shí)可以補(bǔ)充發(fā)酵乳風(fēng)味和質(zhì)構(gòu)。
2.2.2 不同復(fù)配比例發(fā)酵乳的持水力比較
不同復(fù)配比例發(fā)酵乳的持水力見圖3。
圖3 不同復(fù)配方案發(fā)酵乳的持水力Fig.3 The water retention of fermented milk of different scheme
乳清的析出主要受到發(fā)酵乳中酪蛋白分子重排和膠質(zhì)鈣離子溶解速率的影響[12],有研究表明,發(fā)酵乳中的一些大分子物質(zhì),例如胞外多糖,由于其具有較強(qiáng)結(jié)合水分的能力,并能和乳蛋白相互結(jié)合形成較穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[13],從而能夠有效地降低乳清的析出,提高發(fā)酵制品的感官品質(zhì)和穩(wěn)定性。利用重力和離心力是測定發(fā)酵乳持水性能的經(jīng)典手段[14-15]。本研究采用離心測定析水力的方法分析了發(fā)酵乳的持水能力,結(jié)果如圖3所示,可以看出,方案1、方案2和方案6制備的發(fā)酵乳經(jīng)離心后,持水力較高,說明乳清析出量較少,制成的發(fā)酵乳體系比較穩(wěn)定。與之相比,方案3、方案4和方案5發(fā)酵乳的持水力較低,說明發(fā)酵乳上清析出量較高,同時(shí)也說明瑞士乳桿菌L.h1添加比例太高,會(huì)加快產(chǎn)酸速度,正是因?yàn)榘l(fā)酵速度快從而影響發(fā)酵乳的質(zhì)構(gòu),更容易析水,發(fā)酵奶體系相對(duì)不穩(wěn)定。由此可知,發(fā)酵劑菌株產(chǎn)酸的速率也會(huì)顯著影響乳清的析出,因此在復(fù)配發(fā)酵劑菌株時(shí),應(yīng)同時(shí)考慮菌株對(duì)發(fā)酵奶體系穩(wěn)定性和發(fā)酵風(fēng)味的影響。
2.2.3 不同復(fù)配比例發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值、滴定酸度和感官評(píng)價(jià)結(jié)果
不同復(fù)配比例發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值、滴定酸度和感官評(píng)價(jià)結(jié)果見表5。
表5 不同復(fù)配方案發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值、酸度和感官評(píng)價(jià)結(jié)果Table 5 The pH value,acidity and sensory evaluation results of fermentation milk of different scheme
綜合終點(diǎn)pH值、滴定酸度和品評(píng)結(jié)果,首先排除方案6,因終點(diǎn)pH值和滴定酸度不能滿足本次復(fù)配褐色發(fā)酵乳飲料發(fā)酵劑的試驗(yàn)?zāi)康模瑫r(shí)發(fā)酵乳的風(fēng)味也比較差;其余方案發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值和滴定酸度均滿足試驗(yàn)需求,但是只有方案2發(fā)酵乳的發(fā)酵奶風(fēng)味最好,滿足試驗(yàn)需求,其余4個(gè)方案的發(fā)酵風(fēng)味均不太愉快,所以從感官品評(píng)試驗(yàn)結(jié)果選擇試驗(yàn)方案2的復(fù)配比例。
復(fù)配比例不同,對(duì)發(fā)酵的酸奶的產(chǎn)酸速率、酸奶持水力(質(zhì)構(gòu)或穩(wěn)定性)和發(fā)酵奶風(fēng)味的影響程度不同。乳酸乳球菌Lb46與基礎(chǔ)菌株Lpc-37單獨(dú)復(fù)配,發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值、滴定酸度和發(fā)酵風(fēng)味均不能滿足試驗(yàn)需求;瑞士乳桿菌L.h1和基礎(chǔ)菌株Lpc-37單獨(dú)復(fù)配,發(fā)酵乳的終點(diǎn)pH值和滴定酸度可以滿足復(fù)配發(fā)酵劑對(duì)產(chǎn)酸要求,但發(fā)酵乳的持水力和發(fā)酵風(fēng)味均不太理想;瑞士乳桿菌L.h1比例的增加,產(chǎn)酸速率明顯提高,酸奶的持水力和發(fā)酵風(fēng)味均下降,所以,瑞士乳桿菌L.h1的復(fù)配比例不宜太高。
依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,結(jié)合本次復(fù)配發(fā)酵劑的目的,基礎(chǔ)發(fā)酵菌株基礎(chǔ)菌株Lpc-37,需適量搭配產(chǎn)酸能力較強(qiáng)的瑞氏乳桿菌L.h1和產(chǎn)香乳酸乳球菌Lb46。綜合評(píng)價(jià)復(fù)配方案,2號(hào)方案比較理想,所以選擇基礎(chǔ)菌株Lpc-37、瑞士乳桿菌L.h1和乳酸乳球菌Lb46的復(fù)配比例為 100∶1∶2。
試驗(yàn)結(jié)果表明,可以通過菌種篩選和不同菌種間的合理復(fù)配提高褐色發(fā)酵乳飲料的發(fā)酵速度,進(jìn)而提高產(chǎn)品的生產(chǎn)效率。
依據(jù)復(fù)配發(fā)酵劑試驗(yàn)?zāi)康?,結(jié)合不同菌種和菌株的發(fā)酵特性,合理選擇基礎(chǔ)發(fā)酵菌種副干酪乳桿菌Lpc-37,通過單菌株發(fā)酵實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出水解能力較強(qiáng)的瑞氏乳桿菌L.h1,用以提高基礎(chǔ)發(fā)酵菌株Lpc-37的發(fā)酵速度,選擇產(chǎn)香菌株乳酸乳球菌Lb46,用以補(bǔ)充和改善因快速發(fā)酵產(chǎn)酸損失的褐色發(fā)酵奶特有的風(fēng)味和質(zhì)構(gòu)。
依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,提高褐色發(fā)酵乳的發(fā)酵速度,發(fā)酵時(shí)間控制在40 h~50 h,在不影響褐色發(fā)酵乳飲料特有的風(fēng)味和同時(shí)兼顧發(fā)酵奶的穩(wěn)定性的前提下,通過單菌株和復(fù)配菌株發(fā)酵試驗(yàn),優(yōu)選出的發(fā)酵劑復(fù)配比例為:基礎(chǔ)菌株Lpc-37:瑞士乳桿菌L.h1:乳酸乳球菌Lb46為100∶1∶2。試驗(yàn)結(jié)果顯示篩選和復(fù)配方案均比較理想,基本達(dá)到本次復(fù)配發(fā)酵劑的目的。
隨著消費(fèi)意識(shí)的逐步提高,酸奶等發(fā)酵制品的營養(yǎng)功效已被廣大消費(fèi)者所認(rèn)知。要生產(chǎn)出具有優(yōu)良品質(zhì)的發(fā)酵制品,不僅取決于產(chǎn)品的原料、加工工藝,更依賴于發(fā)酵劑本身的發(fā)酵特性。中國擁有年銷售額上百億的酸奶市場,但是酸奶發(fā)酵劑這一酸奶發(fā)酵的源頭卻掌握在西方國家的手里[16]。我國擁有豐富的乳酸菌資源,完全可以篩選和復(fù)配出更好的功能性生產(chǎn)菌株。通過借鑒國內(nèi)外已有的理論成果和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),利用國內(nèi)豐富的菌種資源,篩選和復(fù)配自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的優(yōu)良酸奶發(fā)酵劑,為公司生產(chǎn)具有企業(yè)特點(diǎn)和個(gè)性化的發(fā)酵乳制品奠定基礎(chǔ)和提供技術(shù)儲(chǔ)備。
[1]宗憲峰.酸奶的營養(yǎng)價(jià)值與保健功能[J].中國食物與營養(yǎng),2008(9):60-61
[2]湯志慶.酸奶消費(fèi)者行為研究[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2006,116(1):23-24
[3]劉寧寧,郭紅敏,崔文靜,等.弱后酸化酸奶發(fā)酵劑菌株的篩選及復(fù)配[J].食品科技,2012,37(1):6-8
[4]陳健凱,陳健旋,林洵,等.養(yǎng)樂多飲料中影響干酪乳桿菌代田株活菌數(shù)因素的研究[J].中國釀造,2008,199(22):34-36
[5]彭新顏,于海洋,周夕冉,等.抗氧化活性褐色乳飲料的研制及其對(duì)肝臟的保護(hù)作用[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2016,42(3):156-16
[6]田建軍,張開屏,劉靜,等.養(yǎng)樂多酸奶配方的研究[J].中國釀造,2011(12):179-182
[7]徐致遠(yuǎn),吳艷,郭本恒,等.一種褐色益生菌乳飲料的研究[J].食品工業(yè)科技,2010(8):242-244
[8]隋春光,褚洋洋.格瓦斯生產(chǎn)工藝的研究現(xiàn)狀[J].包裝與食品機(jī)械,2013,31(2):60-62
[9]孫宏偉,林高超,葛克山,等.酸奶冰淇淋的發(fā)酵劑復(fù)配與益生菌存活率的測定[J].中國奶牛,2014(2):34-38
[10]趙謀明,盧延輝,林偉鋒,等.乳清蛋白對(duì)脫脂發(fā)酵乳的流變特性及貯存穩(wěn)定性的影響[J].中國乳品工業(yè),2006,34(2):4-6
[11]侯保朝,葛紅娟,趙建云,等.乳酸菌發(fā)酵劑制備發(fā)酵乳的特性研究[J].中國乳品工業(yè),2014,42(11):17-22
[12]LEE WJ,LUCEY JA.Structure and physical properties of yogurtgels:Effect of inoculation rate and incubation temperature[J].Journalof Dairy Science,2004,87(10):3153-3164
[13]DE VUYST L,DEGEEST B.Heteropolysaccharides from lactic acid bacteria[J].FEMS Microbiology Reviews,1999,23(2):153-177
[14]AMATAYAKUL T,SHERKAT F,SHAH NP.Syneresis in set yogurt as affected by EPS starter cultures and levels of solids[J].International Journal of Dairy Technology,2006,59(3):216-221
[15]HASSAN AN,FRANK JF,SCHMIDT KA,et al.Textural propertiesof yogurt made with encapsulated nonropy lactic cultures[J].Journal of Dairy Science,1996,79(12):2098-2103
[16]徐成勇,郭本恒,吳昊,等.酸奶發(fā)酵劑和乳酸菌生物技術(shù)育種[J].生物工程學(xué)雜志,2004,24(7):55-59