葉記林，吳愛蓮，王冬艷，彭建明，于有江，劉延慶

1. 揚(yáng)州市職業(yè)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；

2. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)藥研究所，江蘇 揚(yáng)州 225001

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）能選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞，提高荷瘤動(dòng)物生存率。然而，包括人結(jié)腸癌在內(nèi)的多種腫瘤對(duì)TRAIL耐藥［1］。雖然文獻(xiàn)［2-3］報(bào)道多種化療藥物能部分克服TRAIL的耐藥問題，但尋找與低價(jià)高效、不良反應(yīng)小的藥物聯(lián)合進(jìn)行抗癌非常迫切。藤黃酸（gambognic acid，GA）是從中藥藤黃中提取的有效成分，作為一種具有廣譜抗腫瘤作用的天然藥物備受關(guān)注，對(duì)正常組織損傷較小，尤其是對(duì)造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的安全性高［4］。我們的前期研究［5］表明，GA在體外通過誘導(dǎo)活性氧（reactive oxygen species，ROS）升高能增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡，GA可能是TRAIL良好的耐藥逆轉(zhuǎn)劑。而GA能否在體內(nèi)逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥現(xiàn)象及其逆轉(zhuǎn)TRAIL耐藥的作用機(jī)制仍不清楚。

細(xì)胞內(nèi)ROS升高會(huì)導(dǎo)致核因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）的活化，Nrf2活化后啟動(dòng)抗氧化應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)，使細(xì)胞能抵抗氧化應(yīng)激，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用，故Nrf2可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性［6］。因此，Nrf2可能成為天然抗癌藥物的潛在靶點(diǎn)［7］。Sadeghi等［8］最近報(bào)道Nrf2在結(jié)腸癌中的高表達(dá)是結(jié)腸癌耐藥的重要機(jī)制，抑制Nrf2表達(dá)可能是治療結(jié)腸癌的一條潛在合理的途徑。本研究通過GA與TRAIL聯(lián)合作用干預(yù)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞皮下移植瘤負(fù)荷小鼠，觀察GA能否在體內(nèi)逆轉(zhuǎn)TRAIL抗結(jié)腸癌的耐藥現(xiàn)象，并探討GA聯(lián)合TRAIL抗結(jié)腸癌的作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

4周齡BALB/c裸小鼠由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)，人重組TRAIL蛋白購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，GA單體購(gòu)自美國(guó)Biomol公司，McCoy’s 5A培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，小牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司，H-E染色試劑盒、DAPI細(xì)胞染色液購(gòu)自南京建成生物工程研究所，原位末端標(biāo)記法（TUNEL）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自瑞士Roche公司，Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。siNrf2順義鏈為5’-GCUUUUGGCGCAGACAUUCTT-3’，反義鏈為5’-GAAUGUCUGCGCCAA AAGCTG-3’，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒購(gòu)自德國(guó)BM公司，二氯熒光二乙酰酯檢測(cè)試劑盒（DCFHDA）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與裸小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型的建立

HT-29細(xì)胞用含10%小牛血清的McCoy’s 5A培養(yǎng)液，在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%、飽和濕度條件下培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞，制成濃度為1.0×107個(gè)/mL的單細(xì)胞懸液，無菌條件下接種于32只裸鼠左背部，每只皮下注射0.2 mL。接種HT-29細(xì)胞15 d后，HT-29結(jié)腸癌裸鼠移植瘤直徑約為5 mm。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、處理與移植瘤測(cè)量

將裸鼠隨機(jī)分為4組（n=8）：TRAIL組，單用20 μg/kg重組人TRAIL蛋白；GA組，單用5 mg/kg GA；TRAIL+GA組，聯(lián)合使用TRAIL蛋白（20 μg/kg）和GA（5 mg/kg）；對(duì)照組，給予0.9%NaCl溶液0.5 mL。給藥方式均采用腹腔注射，每隔3天給藥1次，共8次。最后1次給藥3 d后終止實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)終止后取移植瘤，測(cè)量其體積及質(zhì)量，體積的計(jì)算公式為：腫瘤體積 =ab2/2，其中a、b分別表示瘤體的長(zhǎng)、寬；計(jì)算其抑瘤率，抑瘤率=（1-用藥組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量）×100%。

1.2.3 腫瘤組織H-E染色、TUNEL法測(cè)定凋亡情況

腫瘤組織經(jīng)4%多聚甲醛固定、石蠟包埋和切片處理后，行脫蠟水化、常規(guī)H-E染色、復(fù)染、封片，由顯微鏡觀察荷人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。石蠟切片經(jīng)脫蠟水化后，參照試劑盒說明進(jìn)行TUNEL染色處理，完成后加入DAPI工作液室溫濕盒避光溫育5 min，去離子水室溫洗滌3次，每次5 min。每張染色切片選取5個(gè)視野，通過倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡狀況。

1.2.4 siRNA轉(zhuǎn)染HT-29細(xì)胞

轉(zhuǎn)染前將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HT-29細(xì)胞接種于6孔板，每孔細(xì)胞總數(shù)約2×105個(gè)，待細(xì)胞達(dá)到80%融合時(shí)，按照LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑說明書，分別用siNrf2和陰性對(duì)照siRNA同步進(jìn)行轉(zhuǎn)染，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行溫育，24 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 AnnexinⅤ-FITC/PI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，設(shè)空白對(duì)照組、TRAIL組（40 ng/mL）、GA組（1 μg/ mL）和40 ng/mL TRAIL + 1 μg/mL GA聯(lián)合組，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)復(fù)孔，分組處理細(xì)胞12 h后收集細(xì)胞，按AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒說明書處理細(xì)胞樣品，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率。

1.2.6 RT-PCR法檢測(cè)Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5的mRNA表達(dá)水平

取新鮮移植瘤組織或經(jīng)分組處理（分組處理方法同AnnexinⅤ-FITC/PI實(shí)驗(yàn)）后的HT-29細(xì)胞，用TRIzol提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，取適量cDNA為模板，PCR法檢測(cè)Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5的mRNA表達(dá)情況。Nrf2基因上游引物為5’-TCTCCATATCCCATTCCC-3’，下游引物為5’-A A G G T G C T G A G T T G T T T T-3’；B c l-2基因上游引物為5’-AGGCACCCAGGGTGATGCAA-3’，下游引物為5’-G T G G A G G A G C T C T T C AAGGA-3’；Bax上游引物為5’-ATGTCA A A C G T G C G A G T G T C-3’，下游引物為 5’-T C T G T A G T A G A A C T C G G G C AA-3’；DR5上游引物為5’-TCTCCCATCCAACA T C A C-3’，下游引物為5’-G A C AT C C C AAACCAAATC-3’；β-actin基因上游引物為5’-G T G G G G C G C C C C A G G C A G G CACCA-3’，下游引物為5’-CTCCTTAATGT CACGCACGATTTC-3’。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像儀掃描產(chǎn)物，并應(yīng)用凝膠圖像系統(tǒng)分析條帶，以β-actin作為內(nèi)參照，計(jì)算目的基因/β-actin的比值，表示目的基因相對(duì)水平。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定胞內(nèi)ROS水平

分組處理細(xì)胞12 h，0.25%胰蛋白酶消化，1 500r/min離心5 min，收集細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌2次，加200 μL PBS重懸細(xì)胞，用DCFH-DA（終濃度為5 μmol/L）對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的ROS進(jìn)行標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光（激發(fā)光波長(zhǎng)為 488 nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為 530 nm）。

1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，兩樣本比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組荷人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況比較

與對(duì)照組比較，GA組和TRAIL+GA組移植瘤的體積和重量明顯減?。≒＜0.05），抑瘤率分別為30.3%和67.0%；TRAIL組瘤體體積和重量較對(duì)照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；TRAIL+GA組分別與TRAIL組和GA組比較，移植瘤的體積和重量均明顯減?。≒＜0.05），抑瘤率明顯提高（圖1和表1）。

2.2 各組荷人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變與凋亡情況

通過顯微鏡觀察H-E染色病理切片，與對(duì)照組相比，經(jīng)GA或TRAIL+GA干預(yù)治療后移植瘤組織細(xì)胞呈現(xiàn)皺縮、核染色質(zhì)邊集、片狀壞死等病理性改變（圖2）。經(jīng)TUNEL/DAPI染色，綠色為凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，表現(xiàn)為核體積固縮及破碎，正常陰性細(xì)胞呈藍(lán)色均勻熒光。與對(duì)照組相比，經(jīng)GA干預(yù)治療后移植瘤組織凋亡細(xì)胞數(shù)量增多，而TRAIL+GA聯(lián)合作用后凋亡細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步顯著增多，說明在體內(nèi)GA能增敏TRAIL誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。

圖 1 各組小鼠治療24 d后移植瘤的大體形態(tài)Fig. 1 Gross morphology of tumors excised from each group of mice 24 days after treatment

表 1 各組腫瘤生長(zhǎng)情況比較Tab. 1 Comparison of the tumor growth in different groups(x±s)

圖 2 H-E染色觀察各組腫瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、TUNEL法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡狀況(×100)Fig. 2 The histopathological changes of tumor tissue in different groups were observed by H-E staining, and apoptosis in different groups was detected by TUNEL test

2.3 各組荷人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5的mRNA的水平比較

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，GA組Nrf2、Bcl-2 mRNA的水平下降，而Bax和DR5的mRNA水平升高，Bcl-2/Bax比值下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與GA組相比，TRAIL+GA聯(lián)合用藥可促進(jìn)Nrf2、Bcl-2水平明顯下降，Bax和DR5水平明顯升高，Bcl-2/Bax比值顯著下降（P＜0.05，圖3）。

2.4 Nrf2干擾上調(diào)了TRAIL和（或）GA誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞的凋亡率

圖4中第四象限（AnnexinⅤ+/PI?）和第一象限（AnnexinⅤ+/PI+）分別代表早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞的百分率。將Nrf2干擾系列（Nrf2 siRNA）與陰性對(duì)照siRNA系列（Control siRNA）進(jìn)行比較，TRAIL組、GA組和TRAIL+GA組HT-29細(xì)胞凋亡率均明顯提高（P＜0.05），其中TRAIL組凋亡率提高最為顯著，由（7.4±1.8）%上升到（42.9±3.1）%，表明Nrf2干擾能有效地增敏TRAIL誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡的作用。

圖 3 RT-PCR法檢測(cè)各組移植瘤Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA表達(dá) (n=3)Fig. 3 Nrf2, Bcl-2, Bax and DR5 mRNA expressions of tumor xenografts in different groups determined by RT-PCR

圖 4 Nrf2干擾上調(diào)了TRAIL誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞的凋亡率 (n=3)Fig. 4 Nrf2 knockdown enhanced TRAIL-induced apoptotic rate in HT-29 cells

2.5 Nrf2干擾對(duì)TRAIL和（或）GA處理的HT-29細(xì)胞Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA表達(dá)的影響

結(jié)果顯示，在Control siRNA系列中，TRAIL組與空白對(duì)照組的Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA表達(dá)均無明顯差異；將Nrf2 siRNA系列與Control siRNA系列進(jìn)行比較，TRAIL組、GA組、TRAIL+GA組HT-29細(xì)胞Nrf2和Bcl-2 mRNA表達(dá)下降，而Bax和DR5 mRNA表達(dá)升高，其中TRAIL組各mRNA表達(dá)變化最為顯著。表明Nrf2干擾能有效地增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞Nrf2和Bcl-2 mRNA表達(dá)下降、Bax和DR5 mRNA表達(dá)升高（圖5）。

2.6 Nrf2干擾引起TRAIL和（或）GA處理的HT-29細(xì)胞的ROS的升高

結(jié)果顯示，將Nrf2 siRNA系列與Control siRNA系列進(jìn)行比較，TRAIL組、GA組和TRAIL+GA組細(xì)胞內(nèi)ROS水平均明顯升高（P＜0.05），其中TRAIL組ROS水平升高最為顯著，表明Nrf2干擾能有效地促進(jìn)了TRAIL處理的HT-29細(xì)胞ROS水平的升高（圖6）。

圖 5 Nrf2干擾對(duì)TRAIL和（或）GA誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA表達(dá)的影響（n=3）Fig. 5 Effects of Nrf2 knockdown on Nrf2, Bcl-2, Bax and DR5 mRNA expressions in HT-29 cells treated with TRAIL or/and GA

圖 6 Nrf2干擾引起TRAIL和（或）GA處理的HT-29細(xì)胞的ROS的升高（n=3）Fig. 6 Nrf2 knockdown enhanced ROS levels in HT-29 cells treated with TRAIL or/and GA

3 討 論

多種腫瘤抵抗TRAIL的機(jī)制與TRAIL相關(guān)凋亡信號(hào)通路中任何一個(gè)成員的缺陷有關(guān)，包括下調(diào)TRAIL死亡受體的表達(dá)、Bcl-2家族中的促凋亡成員Bax的功能缺失、過表達(dá)抗凋亡的Bcl-2家族成員等［2，9-10］。天然中草藥成分GA是一種多靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物，主要通過誘導(dǎo)ROS升高、上調(diào)促凋亡蛋白、下調(diào)抗凋亡蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白受體誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡［4］。本課題組前期研究［5］證實(shí)，GA能通過誘導(dǎo)ROS升高在體外逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥性。而GA能否在體內(nèi)逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥現(xiàn)象卻未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過建立BALB/c小鼠皮下人結(jié)腸癌HT-29移植瘤模型，分別應(yīng)用TRAIL和（或）GA進(jìn)行干預(yù)，證明在小鼠體內(nèi)單獨(dú)應(yīng)用TRAIL治療時(shí)，瘤體體積和重量較對(duì)照組均無明顯差異，而應(yīng)用GA與TRAIL聯(lián)合治療能明顯抑制移植瘤的生長(zhǎng)，抑瘤率達(dá)67.0%。通過H-E染色、TUNEL/DAPI染色實(shí)驗(yàn)，表明在體內(nèi)GA增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡是GA與TRAIL聯(lián)合抑制移植瘤生長(zhǎng)的主要原因。

線粒體凋亡途徑與死亡受體途徑是TRAIL介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的主要途徑［11-12］。Bcl-2 家族促凋亡與抗凋亡成員之間特殊的比值在TRAIL介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑中起到關(guān)鍵性作用，Bax和Bcl-2分別是Bcl-2家族中最有代表性的促凋亡和抗凋亡成員，Bcl-2/Bax的比值下降將無法維持線粒體膜的完整性，從而導(dǎo)致細(xì)胞色素c等凋亡因子釋放，通過激活Caspase效應(yīng)因子最終導(dǎo)致凋亡［11］；非線粒體途徑即死亡受體途徑，細(xì)胞表面死亡受體（death receptor，DR）的表達(dá)水平是決定腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL敏感性的重要因素，TRAIL與DR（其中DR5對(duì)TRAIL的親和力最強(qiáng)）結(jié)合，招募Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（Fas-associated death domain protein，F(xiàn)ADD），并進(jìn)一步激活Caspase-8，形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物，最后將活化信號(hào)傳遞并激活Caspase-3，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［12］。RT-PCR檢測(cè)各組移植瘤Bcl-2、Bax和DR5的mRNA表達(dá)，結(jié)果顯示，GA聯(lián)合TRAIL用藥可促進(jìn)Bcl-2表達(dá)明顯下降，Bax和DR5表達(dá)明顯升高，Bcl-2/Bax比值顯著下降（P＜0.05）。提示線粒體凋亡途徑和死亡受體途徑可能在GA逆轉(zhuǎn)荷人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥性中起重要作用。

Nrf2是細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的感受器，在清除ROS、參與抗氧化應(yīng)激中起重要作用，且Nrf2的異常高表達(dá)是結(jié)腸癌耐藥的重要機(jī)制［6-8］。本課題組前期研究［5］表明，TRAIL干預(yù)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞后，ROS水平與對(duì)照組無明顯變化，HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL耐藥，而GA能通過誘導(dǎo)ROS升高來逆轉(zhuǎn)HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥性。鑒于Nrf2在清除ROS以及結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥中的重要地位，我們?cè)O(shè)想結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL耐藥可能與過表達(dá)Nrf2有關(guān)。RT-PCR檢測(cè)各組移植瘤Nrf2 mRNA的表達(dá)結(jié)果顯示，GA組和TRAIL+GA組Nrf2 mRNA的表達(dá)顯著下降，而GA組和TRAIL+GA組能明顯抑制移植瘤的生長(zhǎng)，提示Nrf2 mRNA表達(dá)的下降可能在GA增強(qiáng)TRAIL抑制HT-29移植瘤生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡中起重要作用。

為進(jìn)一步探討Nrf2在GA逆轉(zhuǎn)HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL耐藥性中的作用，我們研究Nrf2干擾是否能增強(qiáng)TRAIL對(duì)HT-29細(xì)胞的毒性作用。結(jié)果顯示，Nrf2干擾能有效增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡［凋亡率由（7.4±1.8）%上升到（42.9±3.1）%］，而GA能引起Nrf2 mRNA表達(dá)表達(dá)明顯下降且逆轉(zhuǎn)HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥性，提示下調(diào)Nrf2表達(dá)可能在GA逆轉(zhuǎn)HT-29細(xì)胞在TRAIL耐藥性中起重要作用。Nrf2 mRNA表達(dá)下降、ROS升高是誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡的早期信號(hào)［13-15］，ROS升高會(huì)導(dǎo)致Bcl-2/Bax比值下降而激活線粒體凋亡途徑［13-14］，同時(shí)也會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而激活死亡受體途徑［14-15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之相一致，Nrf2干擾能增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞ROS水平的升高、上調(diào)Bax和DR5 mRNA表達(dá)、下調(diào)Nrf2和Bcl-2 mRNA表達(dá)。表明下調(diào)Nrf2表達(dá)是逆轉(zhuǎn)HT-29細(xì)胞對(duì)TRAIL耐藥的早期信號(hào)。

綜上所述，GA可能是通過下調(diào)Nrf2表達(dá)，使細(xì)胞清除ROS能力降低，從而使ROS水平升高而激活線粒體凋亡途徑與死亡受體途徑來逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞體內(nèi)外對(duì)TRAIL的耐藥性，提示GA在體內(nèi)外都是TRAIL良好的耐藥逆轉(zhuǎn)劑，這為今后兩者聯(lián)合應(yīng)用于臨床治療結(jié)腸癌提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為今后開發(fā)作用于Nrf2靶點(diǎn)的抗癌藥物提供了參考。

［參 考 文 獻(xiàn)］

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