周 龍 譚玉潔*

（1 重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科，重慶 萬州 404000；2 貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院中心實驗室，貴州 貴陽 550001；3 貴州醫(yī)科大學附屬白云醫(yī)院檢驗科，貴州 貴陽 550014）

檢驗儀器和項目的性能評價備受檢驗醫(yī)學界關注[1]。檢測系統(tǒng)的分析性能驗證是臨床檢驗質量管理和實驗室認可的重要內容之一。我國臨床實驗室管理辦法和ISO15189：2012[2-3]均對性能驗證做了相應的規(guī)定和要求。為提高實驗室質量管理目標和籌備ISO15189實驗室認可，本文參照美國臨床和實驗室標準協(xié)會（Clinical And Laboratory Standards Institute，CLSI）頒布的標準化文件[4-5]及其他文獻方法與要求[6-9]，對羅氏cobas 8000全自動生化分析儀部分檢測項目的準確度、精密度性能指標進行驗證和評價。驗證的檢測項目包括總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、三酰甘油（TG）、膽固醇（CHOL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）和血糖（GLU）共10項。

1 資料與方法

1.1 一般資料：實驗用質控品、校準品均來自德國羅氏公司原裝進口，且與檢測儀器、試劑相配套。實驗用樣本來自衛(wèi)生部臨檢中心2016年9月配發(fā)的5個水平的室間質量評價（External Quality Assessment，EQA）干粉樣品。以上實驗用品均-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑：儀器為羅氏cobas 8000全自動生化分析儀，儀器經專業(yè)技術工程師安裝、調試、校準后，各項指標正常，確定正常工作。試劑為羅氏公司配套的試劑、校準品和質控品，且都在有效期內，同一批次的試劑、校準品和質控品均足量。

1.3 方法：按照本實驗室的儀器和項目標準操作程序文件，對儀器定期進行維護保養(yǎng)、校準和質量控制。整個實驗過程均有常規(guī)質量控制并在控，嚴格按照儀器及試劑說明檢測標本，同時在檢測過程中監(jiān)測標本結果，以確保整個分析過程中儀器處于在控的良好狀態(tài)。

1.3.1 精密度驗證：參考CLSI指南文件EP15-A2要求[4]。批內精密度驗證[10]：將已準備好的足量的PCCC1、PCCC2兩個濃度的質控品各分成20份，隨機插入患者樣本中，連續(xù)測定待驗證的10個項目，2 h內完成，分別計算其均值（）、標準差（SD）和變異系數(shù)（CV），評價批內精密度；批間精密度驗證[10]：將已準備好的足量的PCCC1、PCCC2質控品各分裝成20份，-20 ℃保存。每天各取1份，待標本完全溶解平衡至室溫后混勻，進行上機檢測，結果存檔。待20天檢測完，分別計算其x-、SD和CV，評價批間精密度。對于計算的x-、SD和CV，以我國衛(wèi)生行業(yè)標準制定的質量指標（允許總誤差 TEa≤15%）為依據(jù)[11]，批內CV≤1/4TEa，批間CV≤1/3TEa，同時比對廠家聲稱的精密度要求，以驗證精密度性。

1.3.2 準確度驗證：EP15-A3 建議臨床實驗室用定值參考物質進行正確度驗證[12]，采用衛(wèi)生部2016年9月發(fā)放的第三批5個水平的室間質控品進行檢測，對待驗證的10個項目進行測定，將測定值與衛(wèi)生部臨檢中心給定的靶值進行比較[11]，結果以小于衛(wèi)生部臨檢中心室間質量評價檢驗項目及可接受性能準則規(guī)定的允許偏差為合格。同時將實測值與靶值繪制散點圖，得出相關方程進行數(shù)據(jù)分析。

1.4 統(tǒng)計學處理：采用Office 2010 Excel軟件對數(shù)據(jù)進行處理和統(tǒng)計分析，進行t或χ2檢驗，P＜0.05差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 精密度：檢測的批內精密度CV小于1/4TEa，批間精密度CV小于1/3TEa，符合《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明》中對分析性能的要求，也符合廠家規(guī)定的精密度要求，見表1。

表1 精密度實驗結果

2.2 準確度：衛(wèi)生部2016年9月發(fā)放的第三批5個水平的EQA樣品進行檢測，結果顯示準確度全部通過驗證，成績均為100%。用實測值與給定的靶值繪制散點圖，進行相關性分析，得出相關方程，結果顯示各檢測項目的均有較好的相關性（R2＞0.99），見表2。

表2 準確度驗證

3 討 論

檢驗程序的分析性能常通過分析儀器、校準品和試劑形成的組合即檢測系統(tǒng)而實現(xiàn), 故檢驗程序的分析性能?？衫斫鉃闄z測系統(tǒng)的分析性能[13]。為確保檢測系統(tǒng)的分析性能和檢驗結果的準確性，無論自建檢測系統(tǒng)還是配套檢測系統(tǒng)，在實驗室出具檢驗結果前，均要驗證廠家聲明的各種性能指標。ISO15189實驗室認可也要求申請實驗室應對設備、檢測系統(tǒng)或方法的主要分析性能進行驗證，證實其能夠達到臨床檢測所要求的標準[2-3]。本文對羅氏cobas 8000全自動生化分析儀檢測系統(tǒng)進行精密度和準確度性能驗證，為本實驗室配套檢測系統(tǒng)的方法學性能驗證提供簡單可行的方法和實驗方案。

由于大多數(shù)檢驗報告只檢測一次就發(fā)報告，故要求檢驗結果具有良好的重復性，即良好的精密度。沒有良好的精密度，準確度無從談起。精密度常用檢測結果的CV值來評估，CV值越小則精密度越高，說明試劑或者儀器越穩(wěn)定，重復性越好。評價精密度的方法有多種，包括Westgard推薦的簡易方案[14]，也有2014年最新發(fā)布的經典方法即EP5-A3方案[4]。本實驗室采用后者，檢測的各個項目也達到了嚴格的行業(yè)標準：批內CV≤1/4TEa，批間CV≤1/3TEa。橫向比較，不管是高濃度還是低濃度標本，其批內精密度均小于其批間精密度，這也與理論相符。通過精密度驗證，表明該檢測系統(tǒng)穩(wěn)定，重復性好。在確認檢測系統(tǒng)精密度符合要求的基礎上，進行準確度驗證實驗。準確度驗證方法包括：與參考方法比較、回收試驗和應用參考物質。雖前兩種是最好的驗證方法，但由于其方法實驗繁瑣，成本高，數(shù)據(jù)處理有難度等缺點，僅適合有條件的實驗機構、廠家或專業(yè)科研人員，故不適于大多數(shù)常規(guī)實驗室。本實驗室選用定值參考物質，即衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的EQA樣品，此類EQA物質，其均值可作為有權威的賦值[15]，同時具有很強的操作性和實用性。根據(jù)EP15-A3要求對5個EQA樣品進行檢測，結果顯示準確度全部通過驗證，成績均為100%。同時用實測值與給定靶值繪制散點圖，得出相關方程，顯示各檢測項目均有較好的相關性（R2＞0.99），有理由相信該系列配套檢測系統(tǒng)準確度均符合要求。

羅氏cobas 8000全自動生化分析儀作為一種最新的、最先進的生化分析儀，其自動化程度高、測試速度快、精確度好以及準確度高等優(yōu)點，被廣大實驗室和科研單位所接受和認可，適合樣本量大的大型實驗室用于臨床檢測。羅氏cobas 8000檢測系統(tǒng)有成熟的檢測方法，配套的原裝試劑、質控品和校準品，當然檢測成本相對比較高。通過驗證該檢測系統(tǒng)的精密度和準確度性能指標與廠商規(guī)定的分析性能一致，符合質量目標要求，可用于臨床檢測。 本研究選用質控品和EQA樣本，節(jié)省了一定的成本，選擇的驗證方案具有實用性和可操作性。通過驗證，為本實驗室的標準化和認可提供重要的實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

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