程 晨 ，王燕萍 ，白瑞斌 ，張 靜 ，楊扶德 ，胡芳弟 △

1甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2蘭州大學(xué)藥學(xué)院

復(fù)方紅芪方主要功效為滋陰潛陽、交通心腎、養(yǎng)血安神。目前臨床使用該方僅限于按處方水煎服用，該使用方式在快節(jié)奏的現(xiàn)代生活方式下存在著諸多不便。復(fù)方紅芪方由紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、枸杞子、牡蠣、遠(yuǎn)志等8味藥組成，臨床使用證明在改善睡眠方面具有很好的療效。顆粒劑因攜帶、服用方便，生物利用度高，是近年發(fā)展最快的一種中藥固體制劑［1］。筆者為了研發(fā)一種既能達(dá)到改善睡眠，又能方便患者服用、質(zhì)量穩(wěn)定的制劑，研究該方的顆粒劑制備工藝，確定其生產(chǎn)工藝流程以及輔料的添加，制定含量測(cè)定方法。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、枸杞子、牡蠣和遠(yuǎn)志8味藥材均由蘭州大學(xué)藥學(xué)院周印所教授鑒定。紅芪為豆科植物多序巖黃芪(Hedysarum polybotrys Hand.Mazz.)的干燥根。酸棗仁為鼠李科植物酸棗［Ziziphus jujaba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou］的種子。熟地黃為玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)的塊根經(jīng)加工炮制而成。白芍為毛茛科植物芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根。女貞子為木犀科植物女貞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果實(shí)。枸杞子為茄科植物寧夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干燥成熟果實(shí)。牡蠣為牡蠣科動(dòng)物長(zhǎng)牡蠣(Ostrea gigas Thunberg)的貝殼。遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd.)的干燥根。甲醇為色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。冰醋酸為分析純。

1.2 儀器 Sartorius BT分析天平(德國Sartorius)；YLD-2000型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京興爭(zhēng)儀器設(shè)備廠)；Waters2695高效液相色譜儀，分析天平，Waters2998二極管陣列檢測(cè)器，KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。SF-1水分測(cè)定儀(天津國銘醫(yī)藥設(shè)備有限公司)；ZLB80旋轉(zhuǎn)制粒機(jī)(張家港市榮華機(jī)械設(shè)備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 主要功效成分及指標(biāo)成分的確定依據(jù) 通過查閱文獻(xiàn)，本研究選定的主要功效成分及指標(biāo)成分為總皂苷、總黃酮和芍藥苷。藥理學(xué)研究表明酸棗仁能延長(zhǎng)睡眠時(shí)間，與戊巴比妥等有協(xié)同作用，對(duì)多數(shù)失眠、入睡困難和睡眠易醒癥都有較好療效。酸棗仁促睡眠的主要活性成分是酸棗仁黃酮和酸棗仁總皂苷［2-5］。遠(yuǎn)志中含有的皂苷E、F、G等能非競(jìng)爭(zhēng)性抑制環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶，作用與罌粟堿相當(dāng)；目前從遠(yuǎn)志中分離得到的皂苷類成分達(dá)80多種，已證實(shí)其皂苷類成分為其鎮(zhèn)靜催眠的活性成分［6］。女貞子中樞抑制作用成分含有齊墩果酸、熊果酸等；女貞子能顯著縮短睡眠潛伏期且能顯著延長(zhǎng)睡眠持續(xù)時(shí)間［7］。鄧少玲［8］采用石蓮女貞湯(石蓮子、女貞子、五味子、酸棗仁、朱砂)治療頑固性失眠30例，取得了滿意的療效。研究發(fā)現(xiàn)白芍改善睡眠的活性成分主要是白芍總苷［9-11］，白芍所含的芍藥苷和丹皮酚均有鎮(zhèn)靜作用，有增強(qiáng)催眠的作用。

2.2 提取工藝的研究

2.2.1 提取方法依據(jù) 大量文獻(xiàn)證實(shí)酸棗仁［12］、白芍［9］、女貞子［13］、熟地黃［14］、遠(yuǎn)志［15］、牡蠣［16］、枸杞子［17］、紅芪水提取液具有鎮(zhèn)靜、協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)和促睡眠作用。依據(jù)配方藥物中功效成分的理化性質(zhì)，提取工藝設(shè)計(jì)為以上各藥采用共同水煎煮提取的方法。

2.2.2 提取工藝考察 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)得知影響提取的主要因素為加水量(A)、提取時(shí)間(B)和提取次數(shù)(C)，為進(jìn)一步優(yōu)選各因素最佳工藝水平，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，以出膏率、總黃酮含量、總皂苷含量以及芍藥苷含量等多個(gè)指標(biāo)，采用L9(34)正交表優(yōu)選水提復(fù)方紅芪方的最佳提取工藝條件。實(shí)驗(yàn)前首先進(jìn)行了藥材吸水量的考察，為確定液料比提供依據(jù)。吸水量：取1日量的處方，加10倍量水，浸泡24小時(shí)后，將浸泡液全部倒入另一帶刻度的容器中，測(cè)定其體積，以公式藥材吸水量=(原加水量-浸泡液體積)/原藥材總質(zhì)量。藥材的吸水量為1.2倍。以吸水量和最小浸沒藥材的水量作為因素水平設(shè)計(jì)依據(jù)。當(dāng)藥材吸水量為2倍，最小浸沒藥材水量為4倍時(shí)，因素水平表見表1。

表1 水提取工藝因素水平

2.2.3 考察方法及結(jié)果 按設(shè)定的工藝精密稱取處方比例的各藥，每個(gè)工藝平行2份，共18份，采用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，將各次提取濾液合并后，加熱濃縮至相對(duì)密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，減壓干燥(70℃)，得到干膏粉。并測(cè)定干膏粉中總黃酮、總皂苷和芍藥苷含量，分別通過干膏粉得率，芍藥苷含量、總黃酮、總皂苷以及上述各指標(biāo)加以權(quán)重后的綜合指標(biāo)(出膏率50%、芍藥苷10%、總黃酮20%、總皂苷20%)對(duì)水提工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選?？傸S酮、總皂苷和芍藥苷的測(cè)定方法參照《中國藥典》方法，結(jié)果見表7。

表2 平均出膏率的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

表3 平均芍藥苷含量的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

表4 平均總黃酮含量的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

表5 平均總皂苷含量的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

表6 歸一化、權(quán)重的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

表7 水提取工藝L9（34）正交實(shí)驗(yàn)

出膏率和芍藥苷含量的直觀分析見表7，在所選定的3個(gè)因素中，對(duì)出膏率的影響最大的為提取次數(shù)C，3個(gè)因素對(duì)出膏率的影響程度依次是C＞B＞A。對(duì)芍藥苷含量的影響最大的為提取時(shí)間B，3個(gè)因素對(duì)芍藥苷含量的影響程度依次是B＞C=A。平均出膏率最佳組合是A3B3C3。從芍藥苷含量的直觀分析中，最佳組合是A3B1C1?？傸S酮含量的直觀分析，影響最大的為提取次數(shù)C，3個(gè)因素對(duì)總黃酮的含量的影響程度依次是C＞A＞B。同樣從黃酮的含量的直觀分析可以看出，最佳組合是A1B1C3?？傇碥蘸康闹庇^分析中，在所選定的3個(gè)因素中，對(duì)其影響最大的為提取時(shí)間B，3個(gè)因素對(duì)總皂苷的含量的影響程度依次是A＞B＞C，最佳組合是A3B2C1。

從表2出膏率正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析，A(加水量)、B(提取時(shí)間)、C(提取次數(shù))對(duì)出膏率都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個(gè)因素的影響程度C＞B＞A。從表3平均芍藥苷含量正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析，A、B、C對(duì)芍藥苷含量都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個(gè)因素的影響程度B＞A＞C。從表4平均總黃酮含量正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析，A、B、C對(duì)總黃酮含量都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個(gè)因素的影響程度C＞A＞B。從表5平均總皂苷含量正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析，A、B、C對(duì)總皂苷含量都沒有顯著性的影響，從Ⅲ型平方和來看，3個(gè)因素的影響程度A＞B＞C。

從表7水提取工藝L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表的直觀分析中，在所選定的4個(gè)指標(biāo)出膏率、芍藥苷、總黃酮、總皂苷綜合考慮，給予出膏率50%權(quán)重、芍藥苷10%權(quán)重、總黃酮20%權(quán)重、總皂苷20%權(quán)重，數(shù)據(jù)歸一化后發(fā)現(xiàn)對(duì)該綜合指標(biāo)影響最大因素為為提取次數(shù)C，3個(gè)因素影響程度依次是C＞A＞B?？梢钥闯觯罴呀M合是A3B2C3。從表6歸一化、權(quán)重的正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析，A、B、C對(duì)歸一化、權(quán)重后的值都沒有顯著性的影響，從Ⅲ型平方和來看，3個(gè)因素的影響程度為C＞A＞B。

綜合考慮，選擇按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠(yuǎn)志藥材，浸泡2小時(shí)后水煮提取藥材，提取3次，每次1.5小時(shí)，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水。提取液減壓濃縮，濃縮溫度小于等于70℃至相對(duì)密度1.25～1.30（60℃）的稠膏，減壓干燥(真空干燥，溫度70℃)，得到干膏粉。該工藝參數(shù)既考慮了出膏率又兼顧了提取物中的促睡眠活性成分以及指標(biāo)成分的含量。

2.3 制劑工藝的研究

2.3.1 輔料的選擇

2.3.1.1 輔料種類的確定 蔗糖、糊精通常作為顆粒劑的輔料［18］。因水提取物含有多糖類成分，蔗糖質(zhì)地較黏稠，不利于制粒，糊精為顆粒劑常用稀釋劑，且溶化性良好，故本產(chǎn)品選用糊精作為輔料。

2.3.1.2 輔料用量的確定 按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠(yuǎn)志藥材，按最佳工藝參數(shù)進(jìn)行提取，制備干膏。取干膏粉，分別加入不同量的糊精混合均勻，制成顆粒。以制?，F(xiàn)象，所得顆粒性狀，顆粒溶化性為指標(biāo)，對(duì)輔料用量進(jìn)行比較，并確定干膏粉與糊精的比例為 1∶1.5。見表 8。2.3.2 制粒用乙醇濃度和用量的確定 取處方量的干膏粉及糊精，混合均勻，噴灑不同濃度的乙醇，制成軟材，以制粒過程中的現(xiàn)象為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度和用量進(jìn)行考察，以制粒過程中的現(xiàn)象，所得顆粒性狀，顆粒溶化性為指標(biāo)，確定采用85%乙醇制粒。見表9。

表8 輔料用量考察

表9 乙醇濃度的考察

2.3.3 顆粒劑的制備

2.3.3.1 制軟材 按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠(yuǎn)志藥材，按上述提取工藝參數(shù)進(jìn)行提取，制備干膏粉。取干膏粉，加入糊精混合均勻，干膏粉和糊精的比例為1:1.5。加85%的乙醇，并用手指不斷挫捏，混勻至“手捏成團(tuán)，壓之即散”。

2.3.3.2 制濕顆粒 將制好的軟材放入不銹鋼16目篩中，不停抖動(dòng)，搖晃鋼篩，讓顆粒成粒通過篩孔制成濕顆粒，重復(fù)操作直到軟材用完為止。

2.3.3.3 顆粒的干燥 將制好的濕顆粒鋪平放入瓷盤中，并于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(60℃)中干燥，制成干顆粒。

2.3.4 檢查 性狀為深棕黃色顆粒，味苦。粒度、水分、溶化性，裝量差異均按《中國藥典》2015版附錄要求進(jìn)行檢查，均符合要求。第一批含水量4.1%，第二批含水量4.3%，第三批含水量4.3%。裝量差異見表10。

表10 供試品10袋裝量差異

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)復(fù)方紅芪促睡眠顆粒劑的制備工藝進(jìn)行了研究。通過正交實(shí)驗(yàn)法，確定最佳提取條件，并為其制定了簡(jiǎn)便實(shí)用的質(zhì)量控制方法。通過總黃酮、總皂苷、芍藥苷等多個(gè)功效成分和指標(biāo)成分優(yōu)化的制備工藝，可保證制劑高活性成分的含量，一方面保證該顆粒的質(zhì)量，另一方面保證了制劑的療效。通過對(duì)顆粒劑的各項(xiàng)檢查，結(jié)果均符合《中國藥典》2015年版關(guān)于顆粒劑檢查項(xiàng)下的規(guī)定。所制得的復(fù)方紅芪促催睡眠顆粒劑水溶性好，既保證了傳統(tǒng)中藥的特點(diǎn)又保證了質(zhì)量及療效，同時(shí)為用藥提供了方便。為常用經(jīng)方的更進(jìn)一步推廣使用提供范例。

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