李培源等

摘要 ?[目的]研究細(xì)葉石仙桃石油醚部位的抗氧化能力，探討其抗氧化活性和總酚含量之間的關(guān)系。[方法]采用冷浸法得到細(xì)葉石仙桃石油醚部位，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定其總酚含量，并采用ABTS體系和還原能力體系研究其抗氧化效果。[結(jié)果]細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基清除能力與作用時(shí)間有關(guān)，還原能力與提取物濃度呈正相關(guān)。[結(jié)論]細(xì)葉石仙桃石油醚部位具有較好的抗氧化性能。

關(guān)鍵詞 ??細(xì)葉石仙桃;ABTS;還原能力;抗氧化;總酚含量

中圖分類(lèi)號(hào)R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2018）36-0166-02

抗氧化劑可以防止和延緩食品以及生物系統(tǒng)中自由基和活性氧（ROS）引起的氧化過(guò)程。ROS與許多疾病的病因有關(guān)，包括炎癥疾病、癌癥、糖尿病和衰老[1-3]。為了減少活性氧的氧化損傷，目前廣泛使用的合成抗氧化劑有丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、叔丁基對(duì)苯二酚和沒(méi)食子酸丙酯等。然而，由于副作用多且有致癌風(fēng)險(xiǎn)，它們的應(yīng)用受到限制。因此，通過(guò)天然和安全的抗氧化劑增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化防御能力，成為降低氧化應(yīng)激水平并延緩許多慢性疾病發(fā)展的方法[4-8]。該試驗(yàn)通過(guò)冷浸法得到細(xì)葉石仙桃石油醚部位，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定其總酚含量，采用ABTS體系和還原能力體系，來(lái)評(píng)估其抗氧化能力，尋找新的天然抗氧化劑。

1材料與方法

1.1試材與儀器

UV1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析電子科技有限公司）。藥材購(gòu)于廣西百色，經(jīng)鑒定為蘭科石仙桃屬植物細(xì)葉石仙桃。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于百靈威試劑公司（北京）。所有試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1細(xì)葉石仙桃石油醚部位制備。

稱(chēng)取20 g細(xì)葉石仙桃粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h。重復(fù)上述操作3次，合并提取液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得到細(xì)葉石仙桃石油醚部位。

1.2.2ABTS·+自由基清除能力測(cè)定。

將2，2-聯(lián)氨-雙

1.2.3還原能力測(cè)定[5]。

取細(xì)葉石仙桃石油醚部位溶液，加入2.5 mL PBS溶液（pH=7.4）、2.5 mL KFe（CN）4（1%）。上述混合物于50 ℃恒溫20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（10%），離心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水、0.5 mL FeCl3（1%），混勻。在700 nm處測(cè)定吸光度，以蒸餾水為參比。

1.2.4總酚含量測(cè)定。

1.2.4.1Folin-ciocalteu試劑的配制。稱(chēng)取80 g鎢酸鈉和20 g鉬酸鈉于圓底燒瓶中，用560 mL蒸餾水溶解，加入40 mL 磷酸溶液（85%）和80 mL濃鹽酸，文火回流10 h，然后加入12 g硫酸鋰及60 mL雙氧水，加熱沸騰15 min至溶液呈亮黃色。冷卻，移入1 000 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，貯于棕色瓶中。

1.2.4.2總酚標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制。精確稱(chēng)取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品

1.2.4.3提取液中總酚含量的測(cè)定。將各提取物溶液測(cè)定吸光度，多次測(cè)量求平均值。根據(jù)回歸方程計(jì)算總酚的沒(méi)食子酸當(dāng)量，總酚含量以1 g干物質(zhì)的沒(méi)食子酸當(dāng)量

2結(jié)果與分析

2.1細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除能力

2.1.1不同濃度提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力。

考察細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除能力與藥液濃度之間的關(guān)系（圖1）發(fā)現(xiàn)，細(xì)葉石仙桃石油醚部位在較低濃度即表現(xiàn)出較好的ABTS自由基的清除能力，在藥液濃度為0.2 mg/mL時(shí)，清除率為21.7%。此外，細(xì)葉石仙桃石油醚部位的ABTS自由基的清除能力與藥液濃度關(guān)系不大，在藥液濃度為0.8 mg/mL時(shí)，清除率為25.1%;在藥液濃度為

2.1.2不同時(shí)間下提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力。

考察細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除率與作用時(shí)間的關(guān)系（圖2）發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)時(shí)間為1 min時(shí)，細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除率為17.3%。隨著作用時(shí)間增加，細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除率增加。反應(yīng)時(shí)間為3和5 min時(shí)，細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除率分別增加了14.5%和22.0%。細(xì)葉石仙桃石油醚部位對(duì)ABTS自由基的清除率從大到小的順序依次為反應(yīng)時(shí)間10、5、3、1 min。

2.2細(xì)葉石仙桃石油醚部位的還原能力

考察細(xì)葉石仙桃石油醚部位的還原能力與藥液濃度之間的關(guān)系（圖3）發(fā)現(xiàn)，隨著藥液濃度增大，細(xì)葉石仙桃石油醚部位測(cè)得的吸光度迅速增大。藥液濃度為0.2 mg/mL時(shí)，吸光度為0.07;藥液濃度為0.5和0.8 mg/mL時(shí)，吸光度增加為藥液濃度為0.2 mg/mL時(shí)吸光度的1.45和1.82倍;藥液濃度為2.0 mg/mL時(shí)，吸光度為藥液濃度為0.2 mg/mL時(shí)吸光度的2.29倍。

2.3細(xì)葉石仙桃石油醚部位的總酚含量測(cè)定結(jié)果

采用沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)測(cè)定細(xì)葉石仙桃石油醚部位的總酚含量，細(xì)葉石仙桃石油醚部位的總酚含量為8.7 mg/g。結(jié)果表明，細(xì)葉石仙桃石油醚部位所具有的ABTS·+自由基的清除能力和還原能力可能與其所含酚類(lèi)物質(zhì)有關(guān)。酚類(lèi)化合物作為次生植物代謝物，已被證明能防御內(nèi)源性ROS和自由基的氧化應(yīng)激。酚類(lèi)化合物具有抗氧化、抗增殖、抗菌、抗炎、抗過(guò)敏等多種生物學(xué)特性。

3結(jié)論

該試驗(yàn)通過(guò)冷浸法得到細(xì)葉石仙桃石油醚部位，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定其總酚含量，并采用ABTS和還原能力體系來(lái)評(píng)估其抗氧化能力，探索細(xì)葉石仙桃石油醚部位總酚含量和其抗氧化能力之間的關(guān)系。結(jié)果表明，細(xì)葉石仙桃石油醚部位在較低濃度即表現(xiàn)出較好的ABTS自由基的清除能力，清除能力與藥液濃度關(guān)系不大，與作用時(shí)間有關(guān)。細(xì)葉石仙桃石油醚部位的還原能力與藥液濃度相關(guān)，隨著藥液濃度增大，細(xì)葉石仙桃石油醚部位的還原能力迅速增大。細(xì)葉石仙桃石油醚部位表現(xiàn)出較好的抗氧化作用。

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