張俊波　印雙紅　陸安法　白明　任品開　吳橙耀　陳鳳

摘要[目的]了解銅仁地區(qū)山羊布魯氏菌病血清流行病學(xué)情況。[方法]通過平板凝集試驗和試管凝集試驗，對2012-2015年從銅仁地區(qū)8縣2區(qū)54家養(yǎng)羊場采集的8640份血清樣品進(jìn)行了檢測。[結(jié)果]銅仁地區(qū)羊群中存在布魯氏菌病的感染；2012-2015年的陽性率分別為3.56%、4.72%、11.25%和8.33%，春季平均陽性率為7.57%，秋季平均陽性率為6.18%。[結(jié)論]此次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果為銅仁市布魯氏菌病的防控提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 布魯氏菌?。谎尻栃月?；流行病學(xué)調(diào)查

中圖分類號 S855.1⁺2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）11-0063-03

布氏桿菌病是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體引起世界性人獸共患病。貴州省于2010年首次從貴州省山羊血液分離到山羊種布氏桿菌，證實了布氏桿菌病在畜禽中的存在。2012年從1例患者全血中分離到山羊種布氏桿菌，表明貴州省布氏桿菌病疫情在人群中的存在，隨后布氏桿菌病疫情在貴州省迅速擴(kuò)散，直至2012年疫情已覆蓋貴陽、黔南、黔東南、銅仁等州（市），防控形勢非常嚴(yán)峻。該病的臨床特征是引起動物的生殖器官和胎膜發(fā)炎，引起流產(chǎn)、不孕、睪丸炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀，其中牛、山羊、豬最易受到感染。動物布氏桿菌病的報告病例遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于人布氏桿菌病報告病例。該病對畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康都有極大的危害性。

布氏桿菌病的血清學(xué)檢測方法主要包括凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)等。平板凝集試驗與試管凝集試驗是檢測該病的常用方法，平板凝集試驗假陽性的現(xiàn)象較多。平板凝集試驗對受檢山羊血清進(jìn)行初檢，出現(xiàn)陽性者再用試管凝集試驗進(jìn)行復(fù)檢，得出更加精確的結(jié)果。環(huán)境因素對于控制畜禽疾病的發(fā)生與流行具有重要作用。銅仁市存在山羊感染布氏桿菌病和發(fā)病率呈增高趨勢。筆者對貴州省銅仁地區(qū)山羊布氏桿菌血清學(xué)流行情況進(jìn)行了調(diào)查。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1血清來源。2012-2015年從貴州省銅仁市10個縣（區(qū)）德江（7個）、思南（7個）、碧江（5個）、松桃（6個）、印江（5個）、石阡（5個）、萬山（4個）、沿河（6個）、江口（4個）、玉屏（5個）采集血清樣品。共54個規(guī)模養(yǎng)殖場，每個養(yǎng)殖場隨機(jī)抽取20份山羊血清，春、秋2個季節(jié)共采集8640份血清樣品。

1.1.2主要儀器及耗材。主要儀器有ZPD-2050型全自動新型恒溫培養(yǎng)箱、海爾冰箱等；主要耗材有棉簽，清潔、無油脂的一次性試驗紙板（5×10孔/板），50、100、250μL微量移液器，試管架，記號筆，凝集反應(yīng)的試管，稀釋抗原用的玻璃瓶（杯）等。

1.1.3主要試劑。布氏桿菌病試管凝集試驗抗原與陰、陽性血清（青島易邦生物工程有限公司）；布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗（RBT）抗原（青島易邦生物工程有限公司）；0.5%石碳酸生理鹽水（青島易邦生物工程有限公司）；10%生理鹽水。

1.2方法 根據(jù)國家（GB/T18646-2002）、省級監(jiān)測方案及銅仁市農(nóng)業(yè)局的《布氏桿菌病診斷技術(shù)》說明書的方法進(jìn)行操作。

1.2.1平板凝集試驗。采用虎紅平板凝集試驗（RBT）對采集的血清樣品進(jìn)行初檢，用已知的抗原與山羊血清發(fā)生反應(yīng)，觀察是否含有抗體，觀察抗原抗體異性反應(yīng)是否生成顆粒狀的沉積物。對血清樣品進(jìn)行布氏桿菌病初篩，具體操作見說明書。

1.2.2試管凝集試驗。對虎紅平板凝集試驗（RBT）檢驗結(jié)果呈陽性的血清樣品，再進(jìn)行試管凝集試驗（SAT），做進(jìn)一步血清學(xué)判斷，具體操作見說明書。

1.2.3結(jié)果判定。

（1）虎紅平板凝集試驗（RBT）結(jié)果的判定方法。①受檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象者判為陽性，無凝集現(xiàn)象；呈均勻粉紅色者判為陰性。②以“+”表示凝集的程度。++++，菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；+++，菌體差不多完全凝集，且上層液體75%清亮；++，菌體凝集顯著，液體50%清亮；+，凝集物有沉淀，液體在25%清亮；-，凝集物無沉淀，液體混合均勻渾濁。

（2）試管凝集試驗（SAT）結(jié)果判定。若凝集度為1：100（++）以上，判定為陽性。比濁管溶液的配制如表1所示。

2結(jié)果與分析

2.1山羊布氏桿菌病的檢測結(jié)果 通過對2012-2015年從銅仁市各縣養(yǎng)殖場隨機(jī)抽取采集的8640份山羊血清樣品進(jìn)行檢測，以凝集度為1：100（++）為陽性血清，共檢測出陽性血清602份，平均陽性率為6.97%。其中，2014年銅仁市布氏桿菌病的發(fā)病率最高，為11.25%。2012-2014年逐年呈上升趨勢，2014年銅仁市布氏桿菌病陽性率為11.25%，2015年降至8.33%。印江縣布氏桿菌病發(fā)病率最高（表2）。

2.2不同季節(jié)（春、秋）山羊布氏桿菌病檢測結(jié)果 2012-2015年通過對銅仁市10個縣（區(qū)）定點山羊場的山羊進(jìn)行調(diào)查，包括春、秋2次山羊血清檢測，共采集山羊血清4320份，春季檢測出陽性血清樣品327份，平均陽性率7.57%；秋季檢測陽性血清267份，平均陽性率6.18%，春季陽性率比秋季要高（表3），這可能是因為春季氣候較為溫和，給布氏桿菌病創(chuàng)造良好的條件，而布氏桿菌病在秋季抵抗力不強。

2.3不同縣（區(qū)）山羊布氏桿菌病檢測結(jié)果 在所有縣（區(qū)）中，印江縣陽性率最高，陽性數(shù)101份，陽性率達(dá)12.63%；江口縣次之，陽性數(shù)59份，平均陽性率9.22%。印江縣和江口縣是銅仁市發(fā)生布氏桿菌病的高發(fā)地區(qū)。萬山區(qū)是銅仁市陽性率最低的地區(qū)，陽性血清數(shù)30份，陽性率4.69%，其他縣（區(qū)）的陽性率相差不大，呈無規(guī)律零星分布（表4）。

3結(jié)論與討論

通過對銅仁市的10個縣（區(qū)）布氏桿菌病進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2012-2015年陽性率分別為3.56%、4.72%、11.25%和8.33%。從2012年到2014年布氏桿菌病發(fā)病率呈逐年上升趨勢，說明2012-2014年布氏桿菌病的防控形勢并未得到好轉(zhuǎn)，相反防控形勢更加嚴(yán)峻。2014-2015年陽性率稍有下降，但形勢依然十分嚴(yán)峻，銅仁市應(yīng)引起高度重視。從2012-2015年布氏桿菌病人畜間的檢測數(shù)據(jù)可以看出，銅仁市布氏桿菌病疫情存在以下特點：①疫情覆蓋面逐年增加，年發(fā)病率有上升趨勢，與全國布氏桿菌病疫情形勢相一致。工作人員的自我防護(hù)意識薄弱，在作業(yè)過程中未進(jìn)行有效的個人防護(hù)。此外，銅仁市大量引進(jìn)的山羊得不到有效檢疫，養(yǎng)殖、交易和屠宰環(huán)境惡劣，出售轉(zhuǎn)賣病山羊，加重疫情傳播。②實驗室新感染病例不斷出現(xiàn)。從2007年浙江省首次張俊波等銅仁地區(qū)羊布氏桿菌病血清流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)了由于在試驗檢測過程中感染布氏桿菌的病例，2009和2011年又分別報告1例實驗室感染病例。因此，應(yīng)加強對實驗室的衛(wèi)生情況及布氏桿菌病的防控意識，保證實驗室無布氏桿菌病的病菌污染是減少病原體傳染的一個重要條件。

通過對2012-2015年銅仁市春、秋2季布氏桿菌病的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，春季采集山羊血清4320份，平均陽性率為7.57%；秋季平均陽性率為6.18%，可見春季布氏桿菌病的發(fā)病率比秋季要高，這可能與氣候、溫度、空氣質(zhì)量、土壤的濕度等因素有關(guān)，與秋季相比春季氣候更為適宜，氣溫適當(dāng)，且空氣質(zhì)量也與布氏桿菌病的繁殖有很大關(guān)系。2012-2015年檢測銅仁市存在布氏桿菌病陽性山羊發(fā)病例數(shù)呈逐年上升趨勢，疫情回升態(tài)勢明顯，這就要求對所有檢測出陽性血清的山羊進(jìn)行撲殺、消毒、深埋等無害化處理，并做好登記備案，達(dá)到凈化布氏桿菌病的目的。對布氏桿菌病的防控措施是以預(yù)防和撲殺病山羊為主，具體措施主要包括：①對布氏桿菌病防治知識進(jìn)行宣傳，提高自我防范意識；②嚴(yán)禁販賣病畜，從外引進(jìn)新畜時，必須經(jīng)檢疫證實無病后才可合群；③注意周邊的環(huán)境衛(wèi)生，與山羊接觸后要洗手，不在山羊養(yǎng)殖場內(nèi)吃東西，不吃沒有煮熟的肉和奶，不要玩山羊羔；④人畜房屋不要距離太近，與動物接觸時要穿工作服、戴口罩及橡膠手套等。

此次調(diào)查中山羊血清的來源不同，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性率最高的是印江縣，陽性率最高可達(dá)12.63%，江口縣次之，平均陽性率為9.22%。說明這2個縣對布氏桿菌病的防范意識有待提高，給布氏桿菌病的繁殖提供了良好的環(huán)境。印江縣是感染布氏桿菌病最嚴(yán)重的縣，可能受當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境和條件的限制，其管理比較松散，山羊群流動較大，檢疫和消毒制度不完善，才會給布氏桿菌病創(chuàng)造良好的環(huán)境。通過對2012-2015年銅仁市山羊群的布氏桿菌病檢測結(jié)果的分析，發(fā)現(xiàn)2012-2015年每年均檢測出陽性血清，說明該市的山羊感染布氏桿菌病情況比較嚴(yán)重。銅仁市布氏桿菌病的防護(hù)工作仍然十分艱難，在今后的工作實踐中必須要認(rèn)真貫徹“預(yù)防為主、防治結(jié)合”的方針，堅持預(yù)防策略，加強對病情的控制，早發(fā)現(xiàn)早治療，增強對布氏桿菌病傳播途徑的培訓(xùn)，提高對布氏桿菌病的防控水平，進(jìn)一步對布氏桿菌病的防控工作開展交流與合作，政府應(yīng)對防治工作進(jìn)一步加大資金投入，使布氏桿菌病得到有效控制。

科技論文寫作規(guī)范——數(shù)字

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