熊忠良 溫文生 史小娜 丁凡 程敏華 楊純杰 王肆玖 呂長軍

摘要?[目的]優(yōu)化免疫接種程序，減少疫苗接種次數(shù)以及減輕豬場疫苗接種工作量。[方法]對豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病以及豬喘氣病5種豬場常見豬病的疫苗按照不同組合采用混合注射、分點注射以及單苗注射等接種方式進(jìn)行免疫試驗。[結(jié)果]通過田間16輪次的重復(fù)試驗和效果觀察發(fā)現(xiàn)，3種不同免疫方式對豬群不同時期的抗體水平、日增重以及育成率等沒有顯著差異。[結(jié)論]5種疫苗不同組合混合接種在臨床上具有可行性，為豬場因地制宜地制定免疫程序提供參考。

關(guān)鍵詞?疫苗;不同組合;免疫效果

中圖分類號?S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識碼?A文章編號?0517-6611（2018）33-0061-04

豬瘟（CSF）、藍(lán)耳?。≒RRS）、豬偽狂犬（PR）、豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）以及豬支原體肺炎（MPS，又稱“喘氣病”）是我國豬場臨床最常見的5種傳染性疾病。為了預(yù)防以上疾病，豬場通常采用疫苗免疫接種，但由于豬場豬病復(fù)雜繁多，需要接種的疫苗也很多，往往在制訂免疫程序時發(fā)生時間上的沖突，另外在免疫接種時需要多次注射，這樣不但會造成豬群的多次應(yīng)激，不利于豬的生長，而且增加了防疫人員的工作量。為了減少免疫接種次數(shù)，又能達(dá)到同樣的免疫效果，筆者在一普通規(guī)?；B(yǎng)豬場的商品豬群中將豬瘟等五種豬病疫苗按照不同組合進(jìn)行免疫接種試驗。

1?材料與方法

1.1?試驗地點

湖北漢川市某規(guī)?；i場，生產(chǎn)母豬800頭，自繁自養(yǎng)，封閉式管理，豬群總體健康狀況良好，為CSF陰性豬場。雖然該場是PRRSV陽性豬場，部分母豬也檢測到PRVgE-Ab陽性，但各項生產(chǎn)成績和技術(shù)指標(biāo)正常。供試豬為該場母豬所產(chǎn)的健康仔豬，每頭試驗仔豬打耳標(biāo)，做好標(biāo)記。

1.2?疫苗

豬圓環(huán)病毒2型桿狀病毒滅活疫苗（CP08株），簡稱亞單位圓苗，批號為20170606;豬瘟活疫苗（細(xì)胞源），簡稱豬瘟苗，批號為20170703;豬偽狂犬病耐熱保護劑活疫苗（C株），簡稱偽狂苗，批號為20170402;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），簡稱藍(lán)耳苗，批號為20170204，以上疫苗均由武漢中博生物股份有限公司生產(chǎn)。豬支原體肺炎復(fù)合佐劑滅活疫苗（P株），又稱喘泰克，雙針型（簡稱喘氣雙針），批號為MHB-17014，一針型（簡稱喘氣單針），批號為MHB-17017，由美國普泰克公司生產(chǎn)。

1.3?檢測試劑?CSFV-Ab檢測試劑盒、PRRSV-Ab檢測試劑盒、PRVgE-Ab檢測試劑盒均為韓國金諾（MEDIAN）診斷試劑盒;PRVgB-Ab檢測試劑盒為愛德士（IDEXX）診斷試劑盒;PCV2-Ab檢測試劑盒由武漢中博生物股份有限公司研制提供。操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)均按照各試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4?試驗分組

每輪次試驗使用仔豬90頭，分為3組，每組30頭。Ⅰ組為疫苗混合接種組，Ⅱ組為疫苗兩側(cè)接種組，對照組（CK）為單苗接種組，對照組除“圓+喘”2種滅活苗為混合接種外，藍(lán)耳苗、豬瘟苗及偽狂苗均按照不同時間先后單苗接種。試驗時間為2017年8月16日至2018年3月28日，共完成16輪次的重復(fù)接種試驗，共使用仔豬1 440頭。

1.5?接種方案

3組仔豬除1日齡使用偽狂苗1 mL滴鼻相同外，其余均不相同。另外，藍(lán)耳苗、豬瘟苗以及偽狂苗等活疫苗接種前均要進(jìn)行稀釋，按照以下方案進(jìn)行配苗。具體接種方案見表1。

1.6?采血及抗體檢測

每輪次每組30頭仔豬中各選擇10頭仔豬進(jìn)行采血，分別在7、21、35、42、56、63、77、91日齡連續(xù)采血，分離血清后檢測CSFV-Ab、PRRSV-Ab、PRVgE-Ab、PRVgB-Ab以及PCV2-Ab等抗體水平，再從每組10份血樣中再隨機選擇具有完整檢測數(shù)據(jù)的5頭仔豬血樣進(jìn)行跟蹤分析，統(tǒng)計16輪試驗中各組仔豬的80頭豬血樣分別在不同日齡各種抗體水平和陽性率。

1.7?日增重計算

分別在28和91日齡對每組30頭仔豬中未采血的20頭仔豬逐頭稱重，采用自由采食的飼喂方式，計算各組試驗仔豬在28～91日齡的平均日增重。

1.8?臨床觀察

1.8.1

免疫副反應(yīng)。副反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)如下：疫苗接種前后體溫變化1.0 ℃以上，接種20 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐、呼吸困難、臥地不起、尖叫、口吐白沫、四肢抽搐、全身皮膚紫癜以及休克死亡等癥狀，發(fā)生任何一種癥狀即判定為副反應(yīng)。

1.8.2?育成率計算與病原學(xué)檢測。觀察仔豬的生長發(fā)育情況，統(tǒng)計發(fā)病死亡情況，計算各組育成率，另外對部分病樣進(jìn)行病原學(xué)檢測。

2?結(jié)果與分析

2.1?血清抗體檢測結(jié)果

2.1.1?豬瘟抗體檢測結(jié)果。

從圖1可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組豬瘟抗體平均阻斷率分別為33.41%、45.83%和46.07%，對照組（CK）的平均阻斷率較高，這可能是因為對照組仔豬在28、63日齡分別用豬瘟單苗接種，而Ⅰ組和Ⅱ組則分別用幾種疫苗同時分點或混合注射，從而對抗體整齊度產(chǎn)生一定影響。

從圖2可以看出，7日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬CSF抗體平均陽性率分別為66.3%、73.8%和68.8%，此后逐漸下降，28日齡豬瘟初免后Ⅰ組仍呈下降趨勢，56日齡降至17.5%，但在63日齡經(jīng)過“瘟+偽”混合接種加強后，豬瘟抗體陽性率明顯上升，91日齡Ⅰ組豬瘟抗體陽性率明顯高于Ⅱ組和對照組（CK）。

2.1.2?豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果。

在豬藍(lán)耳病疫苗的免疫豬群中，可以通過抗體水平的離散度，抗體值的高低等間接評價疫苗的免疫效果[1]。從圖3可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRSV抗體S/P值分別為1.14、1.52和1.55，雖然Ⅰ組S/P值相對較小，免疫效果不如Ⅱ組和對照組（CK）。

從圖4可以看出，7日齡后PRRS抗體陽性率先下降再逐漸上升，91日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRS抗體陽性率分別為94%、100%和98%，結(jié)合抗體S/P值、陽性率及臨床表現(xiàn)可知，試驗后期PRRSV陽性率高可能是疫苗和野毒感染共同作用的結(jié)果。

2.1.3?豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果。

從圖5、6可以看出，3組仔豬PRVgE-Ab S/N值絕大多數(shù)大于0.6，呈陰性，說明PRV野毒感染壓力小，7日齡PRVgE-Ab抗體平均陽性率分別為37%、21%和17%，應(yīng)屬于母源性抗體，隨著時間的推移，仔豬母源抗體逐步消失，91日齡絕大多數(shù)仔豬PRVgE-Ab為陰性，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRVgE-Ab抗體平均陽性率分別為5%、11%、12%。

從圖7、8可以看出，3組PRVgB-Ab S/N值均逐步增加，抗體陽性率也逐步降低。結(jié)合抗體檢測、臨床表現(xiàn)以及病原學(xué)檢測可知，91日齡PRVgB-Ab抗體陽性率應(yīng)該主要是由疫苗接種產(chǎn)生的。

檢測結(jié)果表明，63日齡豬瘟和偽狂犬2種活疫苗同時分點和混合注射均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，與單苗接種相比，3組間無明顯差異。

2.1.4?豬圓環(huán)病毒抗體檢測結(jié)果。

從圖9、10可以看出，對照組的PCV2-Ab抗體平均值相對較小，且PCV2-Ab抗體陽性率也相對較低，可能與Ⅰ組和Ⅱ組均接種圓環(huán)苗2次，而對照組只在14日齡接種1次有關(guān)。不管接種1次還是2次，91日齡各組PCV2-Ab抗體陽性率分別為75.8%、82.5%和71.3%，3組間沒有顯著差異（P>0.05）。

2.1.5?豬喘氣病觀察結(jié)果分析。

評價豬喘氣病疫苗的免疫效果主要從生長速度、日增重、飼料報酬、臨床病例、抗體水平及病理變化等方面著手，因條件有限未進(jìn)行飼料報酬和抗體水平測定。Ⅰ組和Ⅱ組先后接種2次雙針型喘氣苗，對照組只接種單針型喘氣苗1次，經(jīng)觀察3組試驗仔豬喘氣病臨床病例均很少，剖檢也很少發(fā)現(xiàn)肺臟上有典型的肉樣病變，在生長發(fā)育、日增重及育成率等方面3組間也沒有明顯差異，說明單針型和雙針型均能有效預(yù)防喘氣病的發(fā)生。

2.2?仔豬日增重結(jié)果

統(tǒng)計16輪試驗中的每輪每組試驗仔豬28～91日齡的平均日增重。Ⅰ組仔豬的平均日增重為（467.5±51.1）g，Ⅱ組仔豬的平均日增重為（485.9±47.0）g，對照組仔豬的平均日增重為（461.4±39.8）g。28～91日齡Ⅱ組仔豬的平均日增重最高，高于Ⅰ組和對照組，但差異不顯著（P>0.05）。

2.3?免疫接種副反應(yīng)情況統(tǒng)計

根據(jù)副反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)，分別統(tǒng)計16輪試驗中幾種疫苗組合接種所導(dǎo)致的副反應(yīng)頭數(shù)。由表2可知，幾種疫苗組合接種后引起1.1%～1.7%的應(yīng)激反應(yīng)，均在正常范圍內(nèi)，其余幾種單苗（豬瘟苗外）或組合苗接種后幾乎沒有觀察到明顯的應(yīng)激反應(yīng)，尤其是豬瘟苗和偽狂犬苗2種活苗在63日齡不管是混合接種還是分開兩側(cè)接種均沒有發(fā)現(xiàn)仔豬出現(xiàn)副反應(yīng)，說明豬瘟苗和偽狂苗同時接種是安全的。

2.4?仔豬死亡情況與育成率

統(tǒng)計7～91日齡16輪試驗各組仔豬的死亡情況及總的育成率。由表3可知，16輪仔豬初試總頭數(shù)1 440頭，7～91日齡共死亡仔豬143頭，主要是由于腹瀉及呼吸道疾病造成的，其中Ⅰ組死亡47頭仔豬，Ⅱ組死亡51頭仔豬，對照組死亡45頭仔豬，Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬育成率分別為90.2%、89.4%和90.6%，經(jīng)t檢驗發(fā)現(xiàn)3組間沒有顯著差異（P>0.05）。

2.5?臨床發(fā)病死亡仔豬病原學(xué)檢測

由表4可知，CSFV和PRV病原學(xué)檢測均呈陰性，PCV2也只有1頭仔豬呈陽性，說明這3種疾病的壓力較小，但送檢病樣中PRRSV病原檢測陽性率均較高，另外該場保育豬中副豬嗜血桿菌病較為突出，結(jié)合臨床表現(xiàn)、病理剖檢等，認(rèn)為試驗仔豬死亡可能與這2種疾病混合感染有關(guān)。

3?討論

為了優(yōu)化免疫接種程序，減少免疫接種次數(shù)，減輕基層獸醫(yī)的工作量，國內(nèi)許多專業(yè)人士對臨床常見的幾種豬苗進(jìn)行各種聯(lián)合試驗，其中豬瘟、豬口蹄疫和高致病性藍(lán)耳病3種疫苗聯(lián)合使用試驗最多[2-9]，試驗結(jié)果對臨床應(yīng)用均具有一定的指導(dǎo)意義。朱子健等[10]將PCV2滅活疫苗和豬瘟活疫苗同時分點注射和混合注射，結(jié)果表明2種免疫方式均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，但用2種滅活苗混合后稀釋活苗進(jìn)行接種試驗國內(nèi)尚未見報道。

“喘泰克”是美國PORTATEK公司產(chǎn)品，為第4代支原體肺炎疫苗，有雙針型（P株抗原60 μg/mL）和單針型（P株抗原80 μg/mL）2種，該苗物理滅活，不含滅活劑。亞單位圓苗（CP08株）是國內(nèi)首個桿狀病毒表達(dá)的基因工程亞單位疫苗，該苗采用的β-丙內(nèi)脂（BPL）滅活劑能在疫苗液體中完全水解為無毒性的β-羥基丙酸，因此成品苗中無殘留有害成分，臨床上常與喘泰克混合使用。由于2種疫苗均為滅活苗，且均為復(fù)合水性佐劑和成苗中無殘留滅活劑等特點，為2種疫苗混合接種甚至稀釋活苗提供了臨床應(yīng)用的可能性。

該試驗是將“圓+喘”2種滅活苗混合后分別稀釋藍(lán)耳病活苗和豬瘟活苗以及將豬瘟活苗和偽狂犬活苗進(jìn)行混合接種等，以期探索“死苗+活苗”和“活苗+活苗”混合使用的免疫效果，尤其是“圓+喘”2種滅活苗混合稀釋活苗的接種方式，雖然在一定時間段內(nèi)存在不同程度上影響活苗抗體水平的可能性，但是通過16輪次的重復(fù)田間試驗發(fā)現(xiàn)，混合接種、分點接種以及單苗接種對豬群日增重、生長狀況以及育成率等方面沒有顯著差異，為豬場因地制宜地制定免疫程序

提供一定的參考與借鑒。

關(guān)于疫苗混合接種的問題，尤其是多種疫苗或“死苗+活苗”混合接種的問題，有的學(xué)者持謹(jǐn)慎態(tài)度。該試驗通過16輪次田間的重復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)，某些特性疫苗按照一定的接種方式、免疫時間以及規(guī)范操作，進(jìn)行混合或分點同時接種，其免疫效果與單苗接種無明顯差異，而某些指標(biāo)還優(yōu)于單苗接種組，同時該試驗是在江漢平原上的一個普通的大型豬場進(jìn)行的，具有一定的代表性，不過由于該場是一個藍(lán)耳病陽性豬場，且豬場環(huán)境相對較差以及其他疾病的困擾等，對試驗產(chǎn)生一定的干擾和影響，其試驗結(jié)果可能具有一定的局限性，因此有必要與實驗室相關(guān)研究相結(jié)合，以便更好地在臨床上推廣應(yīng)用。

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