涂慶華

[摘 要]隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)與生物科學(xué)技術(shù)的迅猛推進(jìn)，植物組織培養(yǎng)技術(shù)在當(dāng)今人們的生產(chǎn)生活中得以廣泛推廣與應(yīng)用。該技術(shù)屬于一項(xiàng)經(jīng)濟(jì)效益較高的生物性技術(shù)，同時(shí)也是植物新品種迅速繁殖的創(chuàng)新手段，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大、苗木整齊、節(jié)約成本等特征。因此，文章圍繞黃梔子組培苗的瓶外生根研究，具有至關(guān)重要的實(shí)用價(jià)值與研究意義。

[關(guān)鍵詞]梔子組;培苗;瓶外生根;栽培技術(shù);植物繁殖

[中圖分類號(hào)]S567.239 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

黃梔子又被稱之為林蘭、山梔，系茜草科梔子屬植物。近年來，試管苗瓶外生根技術(shù)被成功研發(fā)，尤其是在組培工廠化育苗快速發(fā)展的帶動(dòng)下，試管苗瓶外生根的相關(guān)研究愈來愈廣泛，如技術(shù)方法、解剖學(xué)、生根生理等，但目前針對(duì)觀賞類與藥用類的黃梔子組培苗瓶外生根的研究較少。為此，文章擬以黃梔子為例，通過采用瓶外無(wú)土生根實(shí)驗(yàn)，深入研究無(wú)土栽培對(duì)黃梔子組培苗生根的影響，旨在最大程度壓縮黃梔子組培苗的生產(chǎn)成本，并為相關(guān)研究或產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供可供參考的意見或建議。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)的材料

采用本實(shí)驗(yàn)室黃梔子無(wú)菌叢生苗，并用帶有葉片的黃梔子莖段作為本次實(shí)驗(yàn)材料。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黃梔子組培苗增殖及生根的外部因子影響。BA與KT的影響。將MS作為基本的培養(yǎng)基，并加入5g/L的瓊脂粉、30㎎/L的蔗糖和0.1㎎/L的NAA，把pH值定位5.8;注入40ml培養(yǎng)基到150ml的培養(yǎng)瓶之后封蓋，并用高溫滅菌。然后取2片葉單體接入到瓶中，并培養(yǎng)觀察40天，且每個(gè)處理均設(shè)置3次重復(fù)。其中，BA與KT的濃度依次為0.2㎎/L、0.5㎎/L、1.0㎎/L。培養(yǎng)的溫度范圍為23OC-27OC，濕度為70%，光照強(qiáng)度1600Lux，且每天的光照時(shí)長(zhǎng)達(dá)16h。

糖濃度的影響。在瓊脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培養(yǎng)基中（pH值為5.8），分別加入0g/L、10g/L、20g/L的蔗糖。培養(yǎng)的條件與方法同上。

光照強(qiáng)度的影響。從瓊脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培養(yǎng)基中（pH值為5.8）中取出40ml，并注入到150ml的培養(yǎng)瓶之中，將光照強(qiáng)度設(shè)置為800Lux、1600Lux、2400Lux。培養(yǎng)的條件與方法同上。

1.2.2 梔子生物反應(yīng)器的具體培養(yǎng)。把15個(gè)外植體均接入到3L的柱形體生物反應(yīng)器中，培養(yǎng)基為蔗糖307g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS的培養(yǎng)基中（pH值為5.8），1L的注入量。具體分為浸沒式的黃梔子生物反應(yīng)器培養(yǎng)、接觸式與間歇浸沒式的梔子生物反應(yīng)器培養(yǎng)，其中空氣的注入量要達(dá)到0.1vvm，溫度在23°C-27°C，光照強(qiáng)度保持在2400Lux，且每天的光照時(shí)長(zhǎng)為16h，培養(yǎng)40天，每個(gè)處理要重復(fù)3次。

1.2.3 黃梔子瓶外生根及幼苗的馴化。在黃梔子的瓶外生根培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，選擇25.2㎝（長(zhǎng)）、18.2㎝（寬）、6.0㎝（高）為1.6L的四方形容器，并將1L的營(yíng)養(yǎng)液倒入其中。支持物質(zhì)為珍珠巖與泡沫板。

黃梔子生根的營(yíng)養(yǎng)液pH值影響。分別將營(yíng)養(yǎng)液的pH值調(diào)節(jié)為3、4、5、6，并保持10天更換一次，用電導(dǎo)率儀和pH計(jì)測(cè)量營(yíng)養(yǎng)液的EC和pH。培養(yǎng)的條件與方法同上。

黃梔子生根的營(yíng)養(yǎng)液電導(dǎo)率影響。分別將電導(dǎo)率調(diào)節(jié)成0.5、1.0、1.5、2.0，pH值定位5.0，且10天更換一次液體，并對(duì)營(yíng)養(yǎng)液的EC和pH進(jìn)行測(cè)定。培養(yǎng)的條件與方法同上。

1.3 數(shù)據(jù)的處理

實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)均采用SAS程序進(jìn)行分析，并配置以鄧肯氏新復(fù)極差法予以比較，p≤0.05為顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃梔子組培苗增殖與發(fā)根的BA與KT的影響

把黃梔子無(wú)根組培苗接種到濃度不同的BA與KT的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)5到7天時(shí)黃梔子葉片的切口處出現(xiàn)愈傷組織，當(dāng)培養(yǎng)至18天左右，梔子切口處的腋芽出現(xiàn)萌動(dòng)。根據(jù)40天培養(yǎng)期的結(jié)果調(diào)查顯示，BA與KT的黃梔子增殖成效十分明顯，尤其是BA的成效更優(yōu)。

2.2 黃梔子組培苗增殖與發(fā)根的蔗糖濃度的影響

把黃梔子的幼苗接種到MS培養(yǎng)基之中，并添加濃度不同的蔗糖予以增殖培養(yǎng)，結(jié)果如下圖1所示。諸如，蔗糖濃度為零時(shí)，梔子組培苗的腋芽部位膨大、葉片窄小、不定芽且葉片呈淡黃色;蔗糖濃度為10-30g/L時(shí)，梔子幼苗數(shù)量隨著蔗糖的濃度增加而不斷增加;蔗糖濃度超過30g/L時(shí)，梔子的不定芽分化明顯處于被抑制狀態(tài)。從中可見，蔗糖的濃度對(duì)梔子培苗增殖有重要影響。

2.3 黃梔子組培苗增殖與發(fā)根的光照強(qiáng)度的影響

光照強(qiáng)度顯著對(duì)黃梔子組培苗增殖與生長(zhǎng)產(chǎn)生影響（如圖2所示）。譬如，當(dāng)光照強(qiáng)度在1600Lux-4800Lux之間時(shí)，不定苗數(shù)沒有顯著性的差異，且都高于800Lux的處理;隨著光照強(qiáng)度的不斷增加，株高也呈遞增態(tài)勢(shì)，其中3200Lux與4800Lux分別是處理過程中的株高最大值。與此同時(shí)，通過對(duì)葉綠素含量的測(cè)定發(fā)現(xiàn)，在1600Lux與2400Lux的光照強(qiáng)度時(shí)，梔子組培苗的葉片顏色呈現(xiàn)深綠色，且葉綠素含量明顯較高。

3 結(jié)論

（1） 黃梔子組培苗增殖培養(yǎng)的過程中，當(dāng)培養(yǎng)基設(shè)置為瓊脂粉7g/L+NAA0.1㎎/L+BA1.0㎎/L+MS+蔗糖30g/L （pH值為5.8），光照強(qiáng)度達(dá)到2400Lux時(shí)，黃梔子組培苗的增殖率不僅僅高，而且植株的成長(zhǎng)十分健壯。另外，將0.1㎎/L的NAA加入到MS培養(yǎng)基中，有助于黃梔子的生根。

（2）在運(yùn)用生物反應(yīng)器對(duì)黃梔子進(jìn)行大量擴(kuò)繁時(shí)，采用完全的浸沒式培養(yǎng)明顯更具優(yōu)勢(shì)，但葉片卷曲較少。對(duì)此，可以采用調(diào)節(jié)供液的時(shí)間與次數(shù)進(jìn)行改善。

（3）通過運(yùn)用泡沫板促進(jìn)黃梔子瓶外生根培養(yǎng)時(shí)，將營(yíng)養(yǎng)液的pH值定位5.0，能夠更加高質(zhì)量、高效率地促進(jìn)梔子的生根及生長(zhǎng)。同時(shí)，與瓶?jī)?nèi)生根進(jìn)行對(duì)比，瓶外生根能夠節(jié)約超過47%的生產(chǎn)成本。

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