白穎　張鋼　郭咚　蔣義

[摘要] 目的 分析2017年度長沙血液中心所有無償獻(xiàn)血者的血液樣本HBV項(xiàng)目的酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合核酸檢測篩查結(jié)果。 方法 對該站2017年1—12月采集的159 228份血液的相應(yīng)標(biāo)本，先采用2種不同廠家試劑進(jìn)行2遍包括HBsAg等4項(xiàng)感染性標(biāo)志物的酶聯(lián)免疫檢測以及轉(zhuǎn)氨酶的血清學(xué)檢測，后對所有血清學(xué)檢測結(jié)果合格的進(jìn)行包括HBV DNA等3項(xiàng)經(jīng)血傳播病毒的核酸檢測。 結(jié)果 在159 228份獻(xiàn)血者樣本中，共3 552份樣本血清學(xué)檢測項(xiàng)目不合格，其中1 259份HBsAg的結(jié)果為不合格。對血清學(xué)檢測合格的155 676份樣本進(jìn)行核酸檢測后，71份為HBV DNA陽性。結(jié)論 對無償獻(xiàn)血者的樣本采取酶聯(lián)免疫檢測和核酸檢測相結(jié)合的聯(lián)合檢測模式，使HBV的檢出率有明顯提高，有效避免因隱匿性乙肝、窗口期等因素造成的漏檢，降低輸血傳播乙肝風(fēng)險(xiǎn)，提高血站的血液質(zhì)量安全。

[關(guān)鍵詞] 酶聯(lián)免疫檢測；核酸檢測；HBsAg；HBV DNA

[中圖分類號] R446.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）07（a）-0171-02

血液安全是血站永恒的質(zhì)量主題，如何降低輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)是血站人不斷追求和持續(xù)改進(jìn)的目標(biāo)。我國采供血系統(tǒng)血液篩查的傳統(tǒng)檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，雖然方法靈敏度和特異性不斷提升，但是由于窗口期感染，免疫靜默，病毒變異，隱匿性感染等原因，檢測后依然存在較高的殘余風(fēng)險(xiǎn)[1]。乙肝在我國具有高流行率，有研究表明[2]，1～59歲人群中約5.84%為HBV攜帶者。無償獻(xiàn)血者標(biāo)本通過酶免試驗(yàn)篩查血液HBsAg后，血液中HBV仍然存在較大的漏檢風(fēng)險(xiǎn)。按照國家要求，近年來該中心實(shí)施在2遍酶免試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，全面增加一遍核酸檢測的檢測模式。現(xiàn)對該中心獻(xiàn)血者的HBsAg酶免檢測聯(lián)合HBV DNA核酸2017年1—12月檢測的篩查結(jié)果進(jìn)行比較分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該中心采集的159 228名無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本作為研究材料。所有獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前經(jīng)過ALT干式生化儀檢測和HBsAg、TP快速金標(biāo)法檢測合格，體檢符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011）。每位獻(xiàn)血者留取2管含EDTA-K2抗凝劑的血液標(biāo)本，各5 mL，一管用于血清學(xué)檢測，另一管還包含分離膠、無菌、無RNA酶的用于核酸檢測。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 酶免檢測試劑：HBsAg；核酸檢測試劑：HBV、HCV、HIV（1+2型）聯(lián)合試劑。所有試劑均為經(jīng)過國家批批檢合格產(chǎn)品，且在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 儀器 酶免檢測設(shè)備：EVO全自動加樣儀（奧地利帝肯）、STAR全自動加樣儀、FAME 24/20和FAME 24/30全自動酶聯(lián)免疫后處理系統(tǒng)；核酸檢測設(shè)備：德國羅氏Cobas S201核酸檢測系統(tǒng)、上?？迫A核酸檢測系統(tǒng)，二者互為備用系統(tǒng)。所有設(shè)備均在校驗(yàn)合格期內(nèi)使用。

1.3 方法

1.3.1 血清學(xué)檢測 所有標(biāo)本由不同工作人員采用兩種不同廠家試劑嚴(yán)格按照試劑說明書要求進(jìn)行2次HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的酶免檢測，以及不同廠家試劑的2遍ALT項(xiàng)目的速率法檢測。

其中ALT>50U/L判為不合格；HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP酶免檢測S/CO值≥1.0判為有反應(yīng)性，進(jìn)口試劑0.7≤S/CO值≤1.0、國產(chǎn)試劑0.5≤S/CO值≤1.0判為灰區(qū)。2種試劑陽性/灰區(qū)，判為不合格；一種試劑陰性，另一種試劑陽性/灰區(qū)，采取雙孔復(fù)查，復(fù)查結(jié)果任意一孔為陽性/灰區(qū)即判為不合格。

1.3.2 核酸檢測 對血清學(xué)檢測結(jié)果合格的標(biāo)本采用一種核酸試劑進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、 HIV RNA（1+2型）的核酸檢測。羅氏檢測系統(tǒng)為6人份（167 uL/份）混樣成1份（1 mL）匯集池（pool），科華核酸檢測系統(tǒng)為8人份（180 μL/份）混樣成1份（1.44 mL）匯集池（pool），匯集后由該核酸檢測系統(tǒng)的相應(yīng)儀器進(jìn)行核酸提取和熒光-PCR試驗(yàn)。每批試驗(yàn)均設(shè)置試劑盒自帶的陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控、外部弱陽性質(zhì)控，每個(gè)pool均含內(nèi)對照（IC）。

匯集孔檢測為陰性，則此匯集池（pool）中所有的標(biāo)本合格；匯集池（pool）檢測為陽性，則需要對此匯集池（pool）中的所有標(biāo)本進(jìn)行拆分試驗(yàn)，拆分試驗(yàn)相應(yīng)標(biāo)本陽性即判為不合格，陰性即判為合格。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果

該站2017年1—12月共采集159 228份獻(xiàn)血者的血液樣本，經(jīng)過酶聯(lián)免疫檢測，共1 259份為HBsAg反應(yīng)性（0.79%），其中HBsAg雙試劑反應(yīng)性數(shù)為510份，HBsAg單試劑反應(yīng)性數(shù)為749份。酶免檢測結(jié)果見表1。

2.2 核酸檢測結(jié)果

經(jīng)過血清學(xué)檢測，所有項(xiàng)目不合格的總數(shù)為3 352份，所有項(xiàng)目合格的標(biāo)本為155 676份，這些標(biāo)本均做核酸檢測，共112個(gè)匯集池（pool）檢測結(jié)果呈HBV DNA反應(yīng)性，經(jīng)過拆分后，71例的核酸檢測結(jié)果為HBV DNA反應(yīng)性（0.456‰）。核酸檢測結(jié)果見表2。

3 討論

2017年度本中心159 228份獻(xiàn)血者樣本的酶免檢測HBsAg陽性標(biāo)本1 259例，檢出率為0.79%。而血清學(xué)檢測陰性的155 676份獻(xiàn)血者標(biāo)本中，經(jīng)過核酸檢測HBsAg陰性標(biāo)本HBV DNA反應(yīng)性達(dá)到了71例，HBV DNA陽性檢出率達(dá)到0.456‰，與上海、河南焦作、漯河等地文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)接近[3-5]。證明HBV經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)較高，這一方面與我國的HBV感染率高、感染基數(shù)大有關(guān)，另一方面與方法學(xué)局限性有關(guān)。即使經(jīng)過兩遍酶免檢測，且酶免檢測設(shè)置了灰區(qū)，仍然存在一定程度的漏檢。因此，對于酶免檢測HBsAg陰性的標(biāo)本增加核酸檢測十分必要，這樣可以更大限度地減少HBV的漏檢，降低輸血傳播乙肝風(fēng)險(xiǎn)。

乙肝的酶聯(lián)免疫檢測以HBsAg為檢測對象，有較長的窗口期。而核酸檢測技術(shù)是檢測乙肝病毒本身的DNA，窗口期較短，跟酶聯(lián)免疫檢測相比，平均可將HBV的檢測“窗口期”縮短40%[6]。同時(shí)，對于隱匿性乙肝（OBI），核酸檢測也有著十分重要的意義。有研究表明，HBV DNA檢測可降低ELISA檢測后的殘余風(fēng)險(xiǎn)73.77%，且降低的HBV的風(fēng)險(xiǎn)中的87.9%為隱匿性風(fēng)險(xiǎn)[7]。此外，核酸檢測對于病毒的免疫靜默、病毒亞型和病毒變異也能檢出[8]。值得注意的是，核酸檢測同樣也有呈現(xiàn)假陰性結(jié)果的情況，例如病毒載量過低的乙肝攜帶者、核酸不穩(wěn)定易于降解等情況，這部分標(biāo)本通常用酶免檢測HBsAg可以檢出，所以酶免檢測與核酸檢測存在方法學(xué)的互補(bǔ)性。因此，在當(dāng)前的檢測水平下，采取酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合核酸檢測，可以更大限度地檢出HBV，降低漏檢風(fēng)險(xiǎn)，保障用血安全。

[作者簡介]

[1] 李雪梅，楊春茂，楊春晴，等.獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TPELISA檢測陽性與確證試驗(yàn)的對比研究[J].中國輸血雜志，2013，26（6）：541-543.

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（收稿日期：2018-04-10）