鐘存荻 趙軼群

[摘要] 目的 評估火焰原子吸收光譜法檢測人體靜脈全血中銅（Cu）、鋅（Zn）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、鐵（Fe）的測量不確定度（MU），為臨床合理解釋檢驗結果提供參考依據。方法 采用室內質控獲得的中間精密度計算Cu、Zn、Ca、Mg、Fe由于測量重復性引入的MU，采用衛(wèi)生部室間質量評價結果計算由于測量偏倚引入的MU，然后計算出合成標準不確定度和擴展不確定度。結果 靜脈全血五種微量元素的相對測量不確定度（95%置信限）如下：Cu在15.52～67.61 μmol/L濃度范圍內的相對測量不確定度為17.18%～28.41%。Zn在44.12～67.89 μmol/L濃度范圍內的相對測量不確定度為18.82%～22.48%。Ca在1.05～1.49 mmol/L濃度范圍內的相對測量不確定度為12.96%～17.04%。Mg在低濃度0.47～1.32 mmol/L濃度范圍內的相對測量不確定度為18.54%～18.86%。Fe在4.68～6.38 mmol/L濃度范圍內的相對測量不確定度為18.04%～18.48%。結論 火焰原子吸收光譜法檢測靜脈全血的Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的相對不確定度較大，實驗室應加強質量改進以提高臨床診斷價值。

[關鍵詞] 微量元素；火焰原子吸收光譜法；測量不確定度；靜脈全血

[中圖分類號] R19 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）04（a）-0019-04

[Abstract] Objective To evaluate the manganese-flame atomic absorption spectrometric method in testing the measurement uncertainty of Cu， Zn， Ca， Mg， Fe in the whole blood thus providing reference for the clinical rational explanation of test results. Methods The MU introduced by measuring the repeatability of Cu， Zn， Ca， Mg， Fe was calculated by the intermediate precision obtained by the room quality control， and the MU introduced by measuring the bias was calculated according to the evaluation results of room quality in the ministry of health， and the synthesis standards uncertainty and expansion uncertainty were then calculated. Results The related measurement uncertainty of five microelements in the venous whole blood（95% confidence limit） was as follows： the relative measurement uncertainty of Cu in the 15.52 μmol/L to 67.61 μmol/L was 17.18% to 28.41%， the relative measurement uncertainty of Zn in 44.12 μmol/L to 67.89 μmol/L was 18.82% to 22.48%，and the relative measurement uncertainty of Ca in the 1.05 mmol/L to 1.49 mmol/L was 12.96% to 17.04%， and the relative measurement uncertainty of Fe in the 4.68 mmol/L to 6.38 mmol/L was 18.04% to 18.48%. Conclusion The relative uncertainty of manganese-flame atomic absorption spectrometric method in testing the measurement uncertainty of Cu， Zn， Ca， Mg， Fe in the whole blood is bigger， and the laboratory should enhance the quality improvement to improve the clinical diagnosis value.

[Key words] Microelement； Manganese-flame atomic absorption spectrometric method； Measurement uncertainty； Venous whole blood

人體生命活動和日常生活均離不開微量元素，在人體總量中微量元素約占 0.01%[1]。微量元素可分為人體必需微量元素和有害微量元素兩類。前者包括銅（Cu）、鋅（Zn）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、鐵（Fe）等，后者包括鉛、鎘、汞、砷、鋁、錫等。Cu、Zn、Ca、Mg、Fe等元素是機體正常生命活動所必須的營養(yǎng)成分，與人體的新陳代謝活動密切相關，這些元素過量或缺乏會均會不同程度地影響人體的健康。微量元素對于嬰幼兒、兒童和青少年的生長發(fā)育、智力發(fā)育及免疫功能完善等方面產生非常重要的影響[2]。因此，人體微量元素的準確檢測對于臨床及預防醫(yī)療機構醫(yī)師作出微量元素攝入過多或不足的臨床診斷，起著至關重要的作用。測量不確定度是表征被測量值分散性的一個非負參數，檢測結果的準確性與可信程度取決于不確定度的大小[3]。檢測程序的不確定度評估是醫(yī)學實驗室認可的基本要求，在醫(yī)學實驗室越來越受到重視[4]?；鹧嬖游展庾V法是測量微量元素物質濃度的常用方法之一[5]。該研究對原子吸收光譜法檢測人體靜脈全血微量微量元素的測量不確定度分析，以便對火焰原子吸收光譜法檢測微量元素的結果作出合理解釋，提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BH-5100T型原子吸收光譜儀及配套標準品和質控品；5～50 μL微量移液器。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 靜脈全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe濃度采用原子吸收光譜法進行測定，嚴格按照試劑盒說明書進行。每批次標本測定時，均采用原裝配套的標準品進行校準，制定標準曲線，同時采用配套質控品進行室內質量控制，確保在控后再測定患者標本。

1.2.2 中間精密度測定 收集2016年10—12月期間獲得的相同試劑批號室內質控結果，計算批間變異系數（CV%），其數值等于實驗室內測量重復性引入的相對MU（[μrel（RW）]）。

1.2.3 偏倚（bias） 根據2014—2016年該實驗室參加衛(wèi)生部室間質量評價的結果計算偏倚引入的相對不確定度，按以下步驟進行。

①單次PT的偏倚值（bi）和相對偏倚值（bi，rel）。bi=單次PT測得的EQA結果-該次PT相對應的EQA靶值；bi，rel=（單次PT測得的EQA結果-該次PT相對應的EQA靶值）/該次PT相對應的EQA靶值×100。

②檢測方法和實驗室的偏倚（RMSbias）及相對偏倚（RMSrel（bias））計算公式：

③單次PT公認值的測量重復性引入的不確定度計算公式：

室間的相對重復性；m表示參加單次PT的實驗室數量。

④多次PT公認值的測量重復性引入的不確定度計算公式： 表示PT次數。

⑤偏倚引入的相對MU計算公式：

⑥相對合成標準不確定度（ucref）的計算由中間精密度引入的相對不確定度和偏倚引入的不確定度合成。計算公式為：

⑦相對擴展不確定度評定：相對擴展不確定度等于相對合成標準不確定度×包含因子（K），計算公式：U=K×ucref。若取95%置信限，則K=2。測量不確定度通常以U表示。

2 結果

2.1 不同水平靜脈全血中Cu的測量不確定度評估結果

結果如表1所示，靜脈全血Cu在低值（15.52 μmol/L）和高值（C=67.61 μmol/L）兩個濃度水平的相對測量不確定度分別為28.41%和17.18%。

2.2 不同水平靜脈全血Zn的測量不確定度評估結果

結果見表2，靜脈全血Zn在低值（44.12 μmol/L）和高值（67.89 μmol/L）兩個濃度水平的相對測量不確定度分別為18.82%和22.48%。

2.3 不同水平靜脈全血Ca的測量不確定度評估結果

結果見表3，靜脈全血Ca在低值（1.05 mmol/L）和高值（1.49 mmol/L）兩個濃度水平的相對測量不確定度分別為17.04%和12.96%。

2.4 不同水平靜脈全血Mg的測量不確定度評估結果

結果見表4，靜脈全血Mg在低值（0.47 mmol/L）和高值（1.32 mmol/L）兩個濃度水平的相對測量不確定度分別為18.54%和18.86%。

2.5 不同水平靜脈全血Fe的測量不確定度評估結果

結果見表5，靜脈全血Fe在低值（4.68 mmol/L）和高值（6.38 mmol/L）兩個濃度水平的相對測量不確定度分別為18.04%和18.48%。

3 討論

ISO 15189醫(yī)學實驗室認可要求實驗室評定每個測量程序的測量不確定度，同時還應規(guī)定每個測量程序的不確定度性能要求[6]。測量不確定度可在中間精密度條件下通過測量質控物獲得的量值進行計算，這些條件包括了測量程序標準操作中盡可能多而合理的常規(guī)變化[7]。評定偏倚的測量不確定度，主要通過測量有證參考物質、利用室間質評等獲得[8]。該研究采用室內質量控制所得中間精密度和室間質量評價結果，綜合計算出原子吸收光譜法檢測靜脈全血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe的測量不確定度。

采用分光光度法的常規(guī)血清生化檢測項目的測量不確定度一般在10%以內，血清Ca和Mg的相對測量不確定度分別約為4.7%～7.5%，8.4%～14.5%[9]。該研究結果顯示，靜脈全血五種微量元素的測量不確定度相對較大，其中在質控品濃度水平范圍內的靜脈全血Cu的相對測量不確定度為17.18%～28.41%；質控品濃度水平范圍內靜脈全血Zn的相對測量不確定度為18.82%～22.48%；質控品濃度水平范圍內靜脈全血Ca的相對測量不確定度為12.96%～17.04%；質控品濃度范圍內靜脈全血Mg的相對測量不確定度為18.54%～18.86%。質控品濃度范圍內靜脈全血Fe的相對測量不確定度為18.04%～18.48%。靜脈全血Cu和Zn的相對測量不確定度大于Ca、Mg、Fe。Cu、Zn元素在人體含量比Ca、Mg、Fe低近3個數量級。濃度越低，越容易受到標本中高濃度物質的干擾，特別是溶血、脂血、黃疸等特殊血液標本更容易產生干擾。而全血標本較血清標本的測量不確定度更大，可能與全血中的組成成分比血清中更多、更復雜，可能含有更多的潛在的干擾物質。

實際測量過程相關聯的不確定度分量應從接收樣品啟動測量程序開始，至輸出測量結果終止。按本方法計算所得測量不確定度不確來源上主要包含了分析測量階段中各種影響組分（如操作人員、儀器、試劑、校準品、質控品、環(huán)境條件等）的變異。由于分析前、分析后等一些因素很難量化統計，該研究的測量不確定度未包括與分析前和分析后階段相關的，也未涵蓋由于人群生物學變異而產生的不確定度分量。實際的不確定度分量可能還要更高些。那么，我們如何降低靜脈全血微量元素的不確定度呢。建議從以下幾個方面入手：①與儀器和試劑生產廠家溝通，促進其改進檢測儀器和試劑的性能。若不能解決，可更換精密度更高的檢測儀器和性能。②加強校準，每批次測量均進行校準，防止因實驗條件改變引起的校準曲線的改變而影響檢驗結果。③從實驗室自身查找原因，制定適合自身實驗室的不確定度目標，逐步提高質量和能力。加強人員培訓和考核力度，特別是通過人員比對達到操作的準確性和一致性，嚴格按照操作程序文件進行操作，降低檢測人員之間產生的變異。④嚴密監(jiān)測實驗室環(huán)境條件，如溫度、濕度和水質等。保持實驗室檢測條件的一致性和穩(wěn)定性。⑤加強與其他同級別或更高級別的實驗室之間的比對，提高自身的檢測能力。

[參考文獻]

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（收稿日期：2018-01-10）