郝靜梅，孫志高*，盛冉，方明，于奉生

1(西南大學(xué) 柑桔研究所，重慶，400712) 2(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715)

檸檬烯又稱苧烯，學(xué)名為1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)環(huán)己烯，分子式為C10H16，為無(wú)色至淡黃色的液體，不溶于水，溶于丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑[1-2]，是自然界除蒎烯外分布最廣的萜烯，具有抗菌、抗氧化、消炎和抗腫瘤等多種生理功能[3-5]。但是，由于檸檬烯不溶于水，且易于氧化和揮發(fā)，限制了檸檬烯在食品、藥品、保健品等行業(yè)中的使用和發(fā)展。因此，為了更好地開發(fā)利用檸檬烯，研究改進(jìn)檸檬烯溶解特性的新技術(shù)和方法極為迫切。

在20世紀(jì)60年代中期BANGHAM提出了脂質(zhì)體由磷脂膜構(gòu)成的概念,經(jīng)過(guò)進(jìn)一步發(fā)展，脂質(zhì)體現(xiàn)已在藥劑學(xué)、生物物理學(xué)、治療物理學(xué)和化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用[6]。脂質(zhì)體作為一種新型的靶向制劑，具有無(wú)毒、生物相容性好、可降解和緩釋[7]，對(duì)脂溶性物質(zhì)的包封性良好[8-9]等優(yōu)點(diǎn)。采用脂質(zhì)體技術(shù)將檸檬烯包封后可增加檸檬烯的穩(wěn)定性，并提高檸檬烯的利用率。本研究通過(guò)利用乙醇注入法制備檸檬烯脂質(zhì)體，以包封率為指標(biāo)，通過(guò)單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，篩選出檸檬烯脂質(zhì)體的最佳制備工藝，并測(cè)定了檸檬烯脂質(zhì)體的平均粒徑、粒徑分布和電位等理化指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

檸檬烯(純度≥95%)，上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司；檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.0%)，美國(guó)Sigma公司；大豆卵磷脂(>90%)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；膽固醇，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水乙醇、三氯甲烷、甲醇、Na2HPO4、NaH2PO4均為分析純，重慶川東化工有限公司；無(wú)水Na2SO4，成都科龍化工試劑廠；正己烷：色譜純，Honeywell有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子分析天平(BT224S)，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；恒溫磁力攪拌器(DF-101S)，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；恒溫水浴鍋(LKTC-B1-T)，上海雙舜實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；高速冷凍離心機(jī)(UniCen MR)，德國(guó)Herolab公司；渦旋混合器(XW-80A)，其林貝爾儀器制造有限公司；7890B/5977A氣相色譜-單四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)、G4513A自動(dòng)進(jìn)樣器，美國(guó)Agilent公司；激光粒度分析儀(ZEN 3600)，英國(guó)Malvern儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 乙醇注入法制備檸檬烯納米脂質(zhì)體

采用乙醇注入法制備檸檬烯脂質(zhì)體，稱取一定量的大豆卵磷脂、膽固醇，加入5 mL無(wú)水乙醇于50 ℃水浴充分溶解5 min，然后加入一定量的檸檬烯充分混勻，用注射器快速吸取上述脂質(zhì)乙醇溶液，并勻速注入到不斷攪拌的水化介質(zhì)0.01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer solution, PBS)中，攪拌水化20 min后過(guò)0.22 μm的微孔濾膜，即得到檸檬烯脂質(zhì)體[10, 11]。

1.3.2 GC-MS測(cè)定檸檬烯的含量

色譜條件：色譜柱為超高惰性HP-5ms毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)；程序升溫：起始溫度40 ℃，停留1 min，以15 ℃/min升至160 ℃，停留1 min，進(jìn)樣口溫度為250 ℃；載氣為高純氦氣，流速為1.2 mL/min，不分流，進(jìn)樣量為0.1 μL；用外標(biāo)法自動(dòng)進(jìn)樣器直接進(jìn)樣，分別測(cè)定不同濃度檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)液的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

質(zhì)譜條件：EI離子源；電子能量70 eV；傳輸線溫度為280 ℃；離子源溫度為230 ℃；四級(jí)桿溫度為150 ℃；質(zhì)量掃描范圍m/z為40～350。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取30 mg檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)品于25 mL容量瓶中，用色譜級(jí)正己烷定容至25 mL，即可制備成1000 μg/mL的檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后吸取1 mL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，并用色譜級(jí)正己烷定容，制得100 μg/mL的檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將其依次稀釋成50、40、30、20、10、1 μg/mL的檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)溶液。在1～100 μg/mL置信區(qū)間內(nèi)以檸檬烯濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 檸檬烯納米脂質(zhì)體包封率的測(cè)定

游離檸檬烯含量的測(cè)定：吸取1 mL檸檬烯脂質(zhì)體于10 mL離心管中，加入5 mL正己烷，旋緊瓶蓋密封，漩渦混合15 s。然后于4 000 r/min離心20 min，分離水相和正己烷相，取上層正己烷相3 mL于10 mL離心管中，加入0.1 g已干燥的無(wú)水Na2SO4，并靜置20 min，然后于10 000 r/min離心10 min，最后用氣相色譜法測(cè)定游離的檸檬烯含量Q1。

破乳后全部檸檬烯含量的測(cè)定：吸取1 mL檸檬烯脂質(zhì)體于10 mL離心管中，加入0.5 mL甲醇和三氯甲烷的混合物(甲醇的體積分?jǐn)?shù)為50%)，旋渦混合3 min，然后再加入5 mL正己烷，旋緊瓶蓋密封。將試管于50 ℃水浴中加熱20 min，并不斷振蕩。加熱后冷卻，然后于4 000 r/min離心15 min ,分離水相和正己烷相，取上層正己烷相3 mL于10 mL離心管中，加入0.1 g已干燥的無(wú)水Na2SO4并靜置20 min，然后于10 000 r/min離心10 min，最后用氣相色譜法測(cè)定全部的檸檬烯含量Q2。

檸檬烯脂質(zhì)體的包封率(encapsulation efficiency，EE)由公式(1)計(jì)算可得：

(1)

式中：Q1表示游離檸檬烯含量；Q2表示破乳后全部檸檬烯含量。

1.3.5 乙醇注入法制備檸檬烯納米脂質(zhì)體的工藝優(yōu)化

以包封率為指標(biāo)，首先對(duì)影響檸檬烯納米脂質(zhì)體包封率的大豆卵磷脂添加量(50、100、150、200、250、300 mg)、膽固醇的添加量(0、5、10、15、20、25 mg)、檸檬烯的添加量(5、10、15、20、25、30 mg)、磁力攪拌速度(200、400、600、800、1 000、1 200 r/min)、PBS緩沖液的溫度(30、40、50、60、70、80 ℃)、PBS緩沖液的pH值(5.8、6.2、6.6、7.0、7.4、7.8)等因素進(jìn)行研究。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)SPSS 20.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性和極差分析，選取膽固醇添加量、檸檬烯添加量、PBS緩沖液的溫度3個(gè)主要影響因素，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化檸檬烯脂質(zhì)體的制備工藝，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平Table 1 The factor and levels of response surfaceoptimization experiment

1.3.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

根據(jù)優(yōu)化后的最佳工藝，重新制備檸檬烯脂質(zhì)體，對(duì)包封率進(jìn)行測(cè)定，觀察試驗(yàn)結(jié)果與模型符合情況。

1.3.7 檸檬烯脂質(zhì)體粒徑及電位的測(cè)定

以最佳條件下制備的檸檬烯脂質(zhì)體作為樣品，用馬爾文Zetasizer Nano-ZEN 3600激光粒度儀在25 ℃測(cè)定其粒徑及電位，設(shè)定的平衡時(shí)間為120 s、間隔時(shí)間為10 s，每次掃描3次，取其平均值[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1-a即為用1.3.2氣相色譜質(zhì)譜條件所得檸檬烯的氣相色譜圖。檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1-b所示，檸檬烯濃度在1～100 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性。檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=46 000X+74 860，R2=0.999 0。

圖1 檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖(a)及標(biāo)準(zhǔn)曲線(b)
Fig.1 GC chromatogram (a) and standard curve (b) of limonene standard

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 大豆卵磷脂添加量對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響

將大豆卵磷脂添加量設(shè)為50、100、150、200、250、300 mg，檸檬烯添加量為10 mg，PBS緩沖溶液溫度為50 ℃，pH為7.0，磁力攪拌器速度為800 r/min，其包封率結(jié)果如圖2-a所示。隨著大豆卵磷脂添加量的上升，其包封率呈現(xiàn)先上升后趨于平穩(wěn)的態(tài)勢(shì)。當(dāng)卵磷脂添加量較少時(shí)，不足以包封分散在體系中的檸檬烯，故包封率較低；隨著添加量的上升，分散在體系中的卵磷脂足以包封體系中的檸檬烯，并逐漸飽和，當(dāng)卵磷脂添加量過(guò)高時(shí)，體系呈乳白色，可能是有部分卵磷脂析出所致，綜合考慮選擇卵磷脂添加量為100 mg。

2.2.2 膽固醇添加量對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響

大豆卵磷脂添加量為100 mg，膽固醇添加量為0、5、10、15、20、25 mg，其他條件同2.2.1，包封率結(jié)果如圖2-b所示。由圖2-b可知，隨著膽固醇含量的升高，包封率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比即膜材比為10∶1時(shí)，檸檬烯脂質(zhì)體的包封率達(dá)到最大值(63.49±0.83)%。大豆卵磷脂是組成脂質(zhì)體雙分子層膜的主要成分，但僅有大豆卵磷脂制備的脂質(zhì)體具有通透性，剛性不足，加入膽固醇可增加脂質(zhì)體雙分子層的剛性，具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜流動(dòng)性和穩(wěn)定性的功能[13]。少量的膽固醇對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體的構(gòu)建具有重要作用，膽固醇可以穩(wěn)定檸檬烯脂質(zhì)體的雙分子結(jié)構(gòu)，降低其流動(dòng)性以及減少檸檬烯的泄漏[14]。但是膽固醇的添加量不宜過(guò)高，否則剛性增強(qiáng)，會(huì)形成結(jié)晶物，破壞脂質(zhì)體的雙分子層結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致檸檬烯泄漏，故包封率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)[15-16]。

2.2.3 檸檬烯添加量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響

將檸檬烯的添加量分別設(shè)為5、10、15、20、25、30 mg，膽固醇添加量為10 mg，其他條件同2.2.2，制備檸檬烯脂質(zhì)體，其包封率結(jié)果如圖2-c所示。由圖2-c可見，隨著檸檬烯添加量的增大，脂質(zhì)體的包封率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)檸檬烯的添加量為10 mg時(shí)，脂質(zhì)體包封率達(dá)到(64.23±0.87)%的最高水平，但隨著檸檬烯添加量的進(jìn)一步升高包封率呈下降趨勢(shì)。其原因?yàn)楫?dāng)溶質(zhì)分子的濃度太低時(shí)，增加了脂質(zhì)體在形成過(guò)程中對(duì)檸檬烯分子的“捕捉”難度[17-18]，導(dǎo)致包封率較低。隨著檸檬烯添加量的進(jìn)一步升高，推測(cè)由于一定量的磷脂所形成的脂質(zhì)體對(duì)檸檬烯的包封能力是有限的，當(dāng)檸檬烯含量超過(guò)脂質(zhì)膜的飽和度[19]時(shí)，其包封率也會(huì)下降，故實(shí)驗(yàn)選取檸檬烯添加量為10 mg。

2.2.4 PBS的溫度對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響

當(dāng)檸檬烯添加量為10 mg，其他條件同2.2.3，改變PBS的溫度分別為30、40、50、60、70、80 ℃，制備檸檬烯脂質(zhì)體，并測(cè)定脂質(zhì)體的包封率。由圖2-d可知，隨著PBS緩沖液的溫度升高，脂質(zhì)體的包封率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)PBS的溫度為50 ℃時(shí)，包封率最高，為(65.69±1.06)%。因?yàn)槊恳环N磷脂都有其自身的相變溫度，它也是組成磷脂的?；溣晒虘B(tài)向液態(tài)過(guò)渡時(shí)的溫度，磷脂膜的物理性質(zhì)與其水化介質(zhì)的溫度密切相關(guān)，故必須使PBS的溫度高于磷脂的相變溫度，才能使脂質(zhì)體在液晶條件下進(jìn)行，但溫度過(guò)高又會(huì)加速大豆卵磷脂的氧化及引起被包封物的氧化降解[19-20]。同時(shí)對(duì)于脂溶性物質(zhì)，檸檬烯被包埋在脂質(zhì)膜中，當(dāng)PBS溫度低于磷脂的相變溫度時(shí)，檸檬烯無(wú)法進(jìn)入到脂質(zhì)雙分子層中，導(dǎo)致包封率降低；但PBS溫度過(guò)高，又會(huì)直接導(dǎo)致檸檬烯的揮發(fā)增強(qiáng)，損失增大，且膜的通透性也增加，導(dǎo)致檸檬烯的泄漏增加，故實(shí)驗(yàn)選擇PBS溫度為50 ℃。

2.2.5 磁力攪拌速度對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體的影響

將PBS溫度設(shè)為50 ℃，其他條件同2.2.4，調(diào)整磁力攪拌器速度分別為：200、400、600、800、1 000、1 200 r/min，制備檸檬烯脂質(zhì)體，并測(cè)定檸檬烯脂質(zhì)體的包封率。由圖2-e可知，隨著攪拌速度的增加脂質(zhì)體包封率處于先上升后逐漸穩(wěn)定在一定范圍內(nèi)，當(dāng)攪拌速度在600～1 200 r/min范圍內(nèi)，脂質(zhì)體的包封率較高，其原因可能是因?yàn)榇帕嚢杵鞯乃俣瓤炻苯佑绊戵w系內(nèi)脂質(zhì)的分散及水合[21]，當(dāng)攪拌速度過(guò)慢時(shí)，PBS緩沖溶液不足以均勻分散磷脂乙醇溶液，使得包封率較低；隨著攪拌速度加快，脂質(zhì)體系分散較均勻，包封率隨之提高，但若攪拌速度過(guò)快又易產(chǎn)生較多泡沫，綜合考慮選擇磁力攪拌速度為800 r/min。

2.2.6 PBS的pH值對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響

將攪拌速度設(shè)為800 r/min，其他條件同2.2.5，依次改變PBS的pH值為5.8、6.2、6.6、7.0、7.4、7.8，制備檸檬烯脂質(zhì)體，并測(cè)定脂質(zhì)體的包封率。由圖2-f可以看出，隨著PBS的pH值增大，其脂質(zhì)體的包封率呈先上升后下降趨勢(shì)。當(dāng)PBS的pH值為7.4時(shí)，檸檬烯脂質(zhì)體的包封率最高，為(66.49±0.53)%。由于脂質(zhì)體的膜材選擇為大豆卵磷脂，其中帶有多種不同極性頭部的雜質(zhì)分子，因本身電荷的排斥和吸引而影響脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。過(guò)酸或過(guò)堿均會(huì)使脂質(zhì)體對(duì)H+或者OH-有較多的吸附而導(dǎo)致負(fù)荷過(guò)重，影響包封率[22]，故實(shí)驗(yàn)選取PBS的pH值為7.4。

圖2 不同因素對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響
Fig.2 Effect of different factors on encapsulation efficiency of limonene liposomes

2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)表2中所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合，得到以包封率為目標(biāo)函數(shù)的二次回歸方程為：Y=66.05-1.96A+3.01B+1.16C-1.49AB-0.14AC-0.90BC-5.60A2-3.02B2-3.83C2，對(duì)該模型進(jìn)行回歸方差分析，結(jié)果見表3。模型p<0.000 1，表示模型極顯著，該試驗(yàn)方法可靠；失擬項(xiàng)p=0.167 2>0.05，不顯著，說(shuō)明回歸方程與實(shí)測(cè)值擬合較好。模型相關(guān)系數(shù)R2=0.978 6，說(shuō)明該模型能較好地描述試驗(yàn)結(jié)果。因此可以用此模型來(lái)分析和預(yù)測(cè)檸檬烯脂質(zhì)體的響應(yīng)面工藝結(jié)果。由表3可知該模型中A、B、AB、A2、B2、C2達(dá)到極顯著水平，C達(dá)到顯著水平。3個(gè)因素對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響順序?yàn)闄幟氏┨砑恿?膽固醇添加量>PBS的溫度。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Box-Behnken experimental design arrangementand corresponding results

表3 響應(yīng)面二次模型的方差分析Table 3 Analysis of variance for responsesurface quadratic model

注：p<0.05為顯著水平，用“*”表示；p<0.01為極顯著水平，用“**”表示。

2.4 響應(yīng)面工藝優(yōu)化分析

利用Design-Expert軟件得出兩兩因素對(duì)脂質(zhì)體包封率影響的響應(yīng)曲面圖和等高線圖，如圖3所示。圖3-a曲線的陡峭程度最大，表示檸檬烯添加量、膽固醇添加量這2個(gè)因素對(duì)包封率的影響較大，這與單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。隨著檸檬烯添加量的變化，其響應(yīng)面曲面較陡峭；隨著膽固醇添加量的變化呈弧形，弧度較大，在兩者交互作用中，檸檬烯的添加量占主導(dǎo)作用，且等高線呈現(xiàn)明顯的橢圓形，表明兩因素的交互作用明顯[23-24]。同理，由圖3-b可知,隨著水合溫度的變化，響應(yīng)面曲面較為光滑，膽固醇添加量對(duì)脂質(zhì)體包封率的影響更為顯著，在兩者的交互作用中占主導(dǎo)作用，但二者交互作用不顯著。由圖3-c可知檸檬烯添加量以及PBS緩沖液的溫度，以及二者交互作用對(duì)檸檬烯脂質(zhì)體包封率的影響。隨著檸檬烯添加量的變化，其響應(yīng)面曲面較陡峭；隨著PBS緩沖液溫度的變化，其響應(yīng)面曲面較為平緩，弧度較小。檸檬烯在兩者的交互作用占主導(dǎo)作用，二者交互作用不顯著。根據(jù)模型所預(yù)測(cè)的最優(yōu)工藝條件為：膽固醇添加量為8.75 mg，檸檬烯添加量為12.73 mg，溫度為50.91 ℃，在此條件下所制備的檸檬烯脂質(zhì)體的包封率為67.17%。

圖3 兩兩因素交互作用對(duì)檸檬烯納米脂質(zhì)體包封率影響的響應(yīng)面圖和等高線圖
Fig.3 Response surface and contour plots showing the pairwise interactive effects of different conditions on encapsulation efficiency of limonene nanolipsomes

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

為了操作便利，將最佳條件調(diào)整為：膽固醇添加量為8.8 mg，檸檬烯添加量為12.7 mg，PBS溫度為51 ℃，在此條件下進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，所得檸檬烯脂質(zhì)體的平均包封率為(67.44±0.58)%，與理論預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差為0.4%，直接反應(yīng)了脂質(zhì)體對(duì)檸檬烯的包封效果較好。

2.6 檸檬烯脂質(zhì)體外觀形態(tài)、粒徑和Zeta電位檢測(cè)

由圖4-a可知，檸檬烯脂質(zhì)體外觀呈半透明狀態(tài)，并伴有淡藍(lán)色乳光。粒徑尺寸以及分布通常作為衡量納米脂質(zhì)體穩(wěn)定性的一個(gè)重要指標(biāo)，PDI是指脂質(zhì)體粒徑的多分散性指數(shù)，PDI越小表示脂質(zhì)體直徑分散越均勻、集中，PDI數(shù)值在0～0.3之間表明體系具有均勻的分散性[25-26]。最佳工藝條件下制備的檸檬烯脂質(zhì)體的平均粒徑為(165.4±2.08)nm，平均多分散指數(shù)為(0.185±0.011)，這表明粒徑均勻性良好。響應(yīng)面工藝優(yōu)化后所制得的檸檬烯脂質(zhì)體，其Zeta電位為(-16.23±0.569)mV，見圖4-c。Zeta電位越大表示脂質(zhì)體雙分子膜表面所帶的電荷越多，聚集時(shí)所需要克服的靜電斥力就越大，較大的Zeta電位可以阻礙脂質(zhì)體溶液中的微粒發(fā)生凝聚[24, 27]。因此，綜合分析粒徑、PDI及Zeta電位，可以初步推測(cè)檸檬烯脂質(zhì)體具有較好的穩(wěn)定性。

圖4 檸檬烯納米脂質(zhì)體的外觀(a)、平均粒徑(b)及Zeta電位(c)
Fig.4 The extrinsic feature(a)、particle size(b) and zeta potential (c) of limonene nanoliposome

3 結(jié)論

脂質(zhì)體作為一種人工膜，既可包埋親水性物質(zhì)又可包埋疏水性物質(zhì)，且安全、無(wú)毒副作用，具有良好的生物相容性[28]。本研究以乙醇注入法制備檸檬烯脂質(zhì)體，并用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化得到最佳制備條件：膽固醇添加量為8.8 mg、檸檬烯添加量為12.7 mg、PBS緩沖溶液的溫度為51 ℃，所制備的檸檬烯脂質(zhì)體的包封率為(67.44±0.58)%，平均粒徑為(165.4±2.08)nm，PDI為(0.185±0.011)，平均電位為(-16.23±0.569)mV。通過(guò)制備檸檬烯脂質(zhì)體，不僅可以保護(hù)被包埋的檸檬烯，提高檸檬烯的穩(wěn)定性，減少檸檬烯的揮發(fā)和氧化，更為檸檬烯在食品添加劑、藥品、功能食品等領(lǐng)域的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供了可能性，具有重要的現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。