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(邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001)

卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，是導致現(xiàn)階段臨床上育齡期女性病死率增加的重要因素。流行病學研究顯示，卵巢癌的發(fā)病率可達(6.1～7.1)/10萬人，特別是在具有卵巢家族性疾病的人群中，其發(fā)病率更高[1-2]。在探討卵巢癌發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn)，細胞生物學相關因子的改變，可以通過影響到卵巢上皮細胞的異常增殖、凋亡或者分化等病理生理過程，促進卵巢癌細胞核異常分裂風險的增加[1-3]。細胞核因子-kappaB(phosphorylated protein kinase B，NF-κB)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B，pAKT)等，能夠影響到乳腺癌、甲狀腺癌或者肝癌等惡性腫瘤的發(fā)生，但在卵巢癌中的研究不足。本次研究選取了82例卵巢上皮性癌標本，探討了相關指標的異常表達，并揭示了其與患者臨床病理特征間的關系，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2012年1月至2017年1月在邯鄲市中心醫(yī)院病理科收集的82例卵巢上皮性癌標本(卵巢癌組)、40例卵巢上皮良性腫瘤組織標本(良性組)、正常卵巢組織(正常組)20例。卵巢癌組，年齡36～72歲，平均55.2±10.3歲，臨床分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期22例、Ⅲ期31例、Ⅳ期9例；病理學類型：漿液性癌41例、黏液性癌41例。良性組，年齡37～71歲，平均54.0±11.3歲，其中漿液性囊腺瘤23例、黏液性囊腺瘤17例。正常組，年齡32～62歲，平均52.1±9.0歲。三組研究對象的年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2納入與排除標準

1.2.1納入標準

①卵巢上皮性癌標本、卵巢上皮良性腫瘤組織標本均經過術后病理學檢查證實；②正常卵巢組織來源于因子宮肌瘤手術的患者；③卵巢癌患者均為初發(fā)、術前未接受放化療、免疫治療；④研究方案取得本院醫(yī)學倫理委員會的批準。

1.2.2排除標準

①轉移性卵巢癌患者；②手術前具有放化療史；③患者的病理學資料、臨床資料不完整，難以進行統(tǒng)計分析。

1.3檢測方法

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入NF-κB、pAKT抗體(鼠來源，ABCUM公司)， 37℃孵育 2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體(購自abcum公司)，37℃ 孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產的顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1.4免疫組化判斷標準

免疫組化結果判定：pAKT蛋白的陽性著色表達于細胞質和細胞核，NF-κB蛋白陽性著色主要表達于細胞漿及細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達，①根據(jù)著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。總分<3分： “-”表達；為3～5分，“+”表達；為6～9分，“++”表達；>9分，“+++”表達。

1.5統(tǒng)計學方法

2結果

2.1不同卵巢組織標本中的NF-κB、pAKT蛋白表達程度比較

在卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率為53.66%、69.51%，在良性卵巢腫瘤組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率分別為12.50%、22.50%，正常卵巢組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率分別為10.00%、30.00%，卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率顯著的高于卵巢良性腫瘤組織及正常的卵巢組織(P<0.05)，見表1。

表1不同卵巢組織標本中的pAKT、NF-κB蛋白表達程度(n)

Table 1 The expressions of pAKT and NF-κB protein in different ovarian tissues(n)

2.2卵巢癌組織標本中的NF-κB、pAKT蛋白表達與患者臨床病理學特征的關系

Ⅲ期+Ⅳ期卵巢癌組織、低分化卵巢癌組織、發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率顯著的高于Ⅰ期+Ⅱ期、高+中分化、未發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織(P<0.05)；卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率與患者的年齡、病理學類型及腫瘤直徑大小無關(P>0.05)，見表2。

表2 卵巢癌pAKT蛋白、NF-κB蛋白表達程度與患者臨床病理學特征的關系[n(%)]

3討論

3.1卵巢癌發(fā)生的生物學機制背景研究

隨著病情的進展，卵巢癌可發(fā)生淋巴結轉移、血行轉移，導致了病死率的顯著上升[4]。臨床上包括化療、放療或者手術等綜合性的治療措施，治療后的患者的臨床病情緩解率仍然較低，患者的五年生存率或者近期臨床治療效果仍然無明顯的改善[5]。而通過對于卵巢癌發(fā)生過程中基因水平或者蛋白生物學水平的相關研究，可以為卵巢癌的治療提供新的思路。

pAKT蛋白是蛋白激酶家族成員，其可以促進腫瘤相關蛋白信號通路pi3k/akt、P53、P16等的激活，加劇多種信號通路的交聯(lián)式激活作用，促進患者體內卵巢上皮細胞的交界性病變或者惡性病變的發(fā)生。pAKT蛋白同時能夠影響卵巢癌膜表面蛋白的糖蛋白配體的活性，降低癌細胞間的粘附能力，為卵巢上皮細胞惡性腫瘤的轉移提供條件[6]；kappaB的表達能夠顯著促進卵巢上皮細胞核的異常轉錄，增加癌細胞的持續(xù)性增殖或者異常分化的風險，特別是kappaB在結合細胞核轉錄調控基因的同時，抑制了細胞核內凋亡相關基因的表達，抑制程序性凋亡的發(fā)生[7]。回顧國內外相關已有的研究，認為異常表達的kappaB或者pAKT蛋白能夠影響到卵巢癌的化療敏感性，同時對于評估卵巢癌的遠期生存預后方面同樣具有一定的價值，但缺乏對于kappaB或者pAKT的表達與患者臨床病理特征的關系研究。

3.2 NF-κB和pAKT在卵巢癌組織中的表達及與病理學特征的關系

本次研究通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，卵巢癌病灶組織中的NF-κB、pAKT蛋白的陽性表達率明顯高于卵巢良性病變組或者正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義，提示NF-κB、pAKT蛋白的異常表達可能參與到了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中，NF-κB、pAKT蛋白的高表達可以通過影響到下列幾個方面的因素，進而促進患者的病情進展：①NF-κB的高表達，能夠影響癌細胞對于臨床正常卵巢皮質層細胞的浸潤，促進卵巢癌對于基底膜層的突破作用；②pAKT蛋白的高表達，是影響到卵巢癌增殖調控相關抗原磷酸化修飾的重要因素，蛋白水平的pAKT的上升能夠增加癌細胞通過血管轉移的風險。陶方方等于2014年探討了34例樣本量的不同病情的卵巢癌患者的資料后發(fā)現(xiàn)，在卵巢漿液腺細胞癌或者透明細胞癌中，NF-κB等的陽性表達率可平均上升25%～55%，且患者的臨床預后越差、遠期生存預后指標越低，相關癌相關蛋白的表達陽性率越高。在分析不同的臨床分期與卵巢癌患者相關分子生物學因子的表達關系過程中發(fā)現(xiàn)，Ⅲ期+Ⅳ期卵巢癌組織、低分化卵巢癌組織、發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率顯著的增加，這可能是由于[8]：①臨床分期的進展主要認為與分子生物學因子的改變對于卵巢癌細胞的變形、侵襲能力的增加有關；②細胞分化程度的下降或者淋巴結轉移風險的增加，則主要考慮與NF-κB、pAKT蛋白對于淋巴結誘導因子或者癌細胞分化凋亡調控因子a的激活作用有關。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)相關生物學因子的表達與患者卵巢癌細胞病理來源類型的關系， 提示細胞來源類型可能具有一定的遺傳保守性。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了NF-κB、pAKT蛋白的表達與患者臨床病理特征的關系，綜上所述，卵巢癌組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達率顯著的升高，并且與臨床分期、組織學分化程度及淋巴結轉移有關。

[參考文獻]

[1]朱仲毅,華克勤,丁景新. 卵巢透明細胞癌分子生物學機制研究進展[J]. 現(xiàn)代婦產科進展,2016,25(10):787-790.

[2]Luciano A M,Franciosi F,Lodde V,etal.Oocytes isolated from dairy cows with reduced ovarian reserve have a high frequency of aneuploidy and alterations in the localization of progesterone receptor membrane component 1 and aurora kinase B[J].Biol Reprod,2013,88(3):58.

[3]Li X H,Chen X J,Ou W B,etal.Knockdown of creatine kinase B inhibits ovarian cancer progression by decreasing glycolysis[J].Int J Biochem Cell Biol,2013,45(5):979-986.

[4]Goto Y, Kametani Y, Kikugawa A,etal. Defect of tropomyosin-related kinase B isotype expression in ovarian clear cell adenocarcinoma[J]. Biosci Trends,2014,8(2):93-100.

[5]史聰,王敏,朱彥麗,等. 八聚體結合轉錄因子4與蛋白激酶B1基因在卵巢漿液性腫瘤組織表達及耐藥相關性研究[J]. 中國實用婦科與產科雜志,2014,30(10):812-816.

[6]謝先順,陳艷華.細胞核因子-kappa B與卵巢癌關系的研究進展[J].廣西醫(yī)學,2015,37(11):1654-1658.

[7]吳艷青,陳麗云,張正紅,等. 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/骨形態(tài)發(fā)生蛋白-15通路與哺乳動物卵巢卵泡發(fā)育[J]. 中國醫(yī)學科學院學報,2013,35(2):224-228.

[8]張麗瀅. 分子進化理論在卵巢癌發(fā)生及多藥耐藥的研究進展[J]. 中國腫瘤生物治療雜志,2017,24(5):553-557.