王笑燁，袁景，孫崢，梁麗

[中國(guó)醫(yī)科大學(xué)人民醫(yī)院（遼寧省人民醫(yī)院） 內(nèi)分泌科，遼寧 沈陽 110016]

研究[1]發(fā)現(xiàn)，空腹血糖受損的肥胖人群β細(xì)胞量已降至正常人的60%，而新診斷2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者的β細(xì)胞量?jī)H為正常人的30%～70%。Wnt信號(hào)通路在細(xì)胞正常增殖、復(fù)制、分化過程調(diào)控中發(fā)揮重要作用，其異常活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。其中，分泌型卷曲相關(guān)蛋白1（secreted frizzled related protein 1，SFRP1）和β-連環(huán)蛋白（β-catenin）在通路中均具有重要的作用[2]。胰升血糖素樣肽1（glucagon-like peptide 1，GLP-1）是由腸道L細(xì)胞分泌的具有多種功能的腸肽激素[3]，研究[4-5]發(fā)現(xiàn)，Wnt信號(hào)通路通過直接或與GLP-1、炎癥通路等相互作用的方式對(duì)胰島β細(xì)胞的新生、增殖及其功能發(fā)揮調(diào)控作用，且可能介導(dǎo)外周組織與β細(xì)胞的對(duì)話機(jī)制，但國(guó)內(nèi)該方面的相關(guān)研究較少。因此，本研究通過觀察接受GLP-1類似物利拉魯肽治療后新診斷T2DM患者SFRP1和β-catenin表達(dá)水平的變化，探討GLP-1對(duì)Wnt信號(hào)通路作用的可能機(jī)制，旨在為T2DM的治療提供新的思路和方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1～12月于遼寧省人民醫(yī)院內(nèi)分泌門診就診或病房住院治療的新診斷T2DM患者（T2DM組）72例作為研究對(duì)象，均符合1999年WHO關(guān)于糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中，男性34例，女性38例；年齡45～65歲，平均（51.36±3.31）歲；糖尿病病程5～12個(gè)月，平均（6.19±2.08）個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：T1DM、成人隱匿性自身免疫性糖尿病及其他特殊類型糖尿病患者；合并惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能障礙、急性感染、慢性炎癥、外傷等應(yīng)激狀態(tài)者；患者入組前已開始接受降糖治療，包括口服藥、胰島素及開始控制飲食和運(yùn)動(dòng)干預(yù)。另選取同期體檢健康者80例作為健康對(duì)照（NC）組。其中，男性35例，女性45例；年齡44～63歲，平均（51.89±3.88）歲。本研究已經(jīng)過該院倫理委員會(huì)審核，研究對(duì)象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法 T2DM組給予GLP-1類似物治療（利拉魯肽，國(guó)藥準(zhǔn)字J20160037，天津諾和諾德公司），前4周予1.2 mg 1次/d，4周后更改為1.8 mg 1次/d，共治療12周。同時(shí)給予飲食和運(yùn)動(dòng)干預(yù)治療。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定 收集患者的性別、年齡、糖尿病病程、身高、體重等一般資料。分別于入組時(shí)、治療12周及停藥12周后測(cè)量患者的血壓，計(jì)算體重指數(shù)（BMI）。空腹12 h以上于次日晨起抽取空腹靜脈血，檢測(cè)血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（Hemoglobin A1c，HbA1c）、胰島素、血脂。血糖和血脂采用日本奧林巴斯公司AU2700全自動(dòng)生化分析儀，以酶法測(cè)定；空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)ins）采用中國(guó)原子能科學(xué)研究院藥盒，以放射免疫法測(cè)定；HbA1c采用美國(guó)BIO-RAD公司生產(chǎn)的Variant Ⅱ糖化血紅蛋白分析儀，以高效液相色譜法測(cè)定。采用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估法評(píng)估胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）與胰島素β細(xì)胞功能指數(shù)（HOMA-β），即HOMA-IR=Fins×FPG/22.5，HOMA-β=（20×FIns）/（FPG-3.5）。

1.2.3 SFRP1和β-catenin水平檢測(cè) 于入組時(shí)、治療12周時(shí)及停藥12周時(shí)，分別抽取空腹靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心10 min，分離取上層血清，置于-80℃冰箱冷凍保存。采用酶聯(lián)吸附免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)SFRP1和βcatenin水平，試劑盒購自武漢艾美捷科技有限公司，均按照說明書進(jìn)行操作，批內(nèi)差異＜10%，批間差異＜15%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，同組間不同時(shí)間比較采用方差分析，兩兩比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，并對(duì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行校正。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前基線資料的比較

T2DM 組 BMI、FPG、Fins、HbA1c、HOMA-IR、SFRP1及β-catenin與NC組比較，經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-6.426、-21.059、-16.954、-24.688、-57.261、-13.510 及 -48.714，均P=0.000），T2DM組高于NC組。兩組HOMA-β比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.560、P=0.000），T2DM組低于NC組。見表1。

2.2 T2DM組不同時(shí)間基線資料和SFRP1及β-catenin水平變化的比較

治療12周和停藥12周時(shí)BMI、FPG、HbA1c、TC、HDL-C及HOMA-IR與入組時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.307、5.567、3.173、8.800、7.991、7.694、9.044、2.978、4.338、3.498、10.002 及 10.592，P=0.000、0.000、0.004、0.000、0.000、0.000、0.000、0.006、0.000、0.002、0.000 及0.000），治療12周和停藥12周低于入組時(shí)；治療12周和停藥12周時(shí)HOMA-β與入組時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-3.968和-2.054，P=0.000和0.003），治療12周和停藥12周高于入組時(shí)。治療12周時(shí)和停藥12周時(shí)SFRP1與入組時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-9.294和-9.927，均P=0.000），治療12周時(shí)和停藥12周時(shí)高于入組時(shí)；停藥12周時(shí)SFRP1與治療12周時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.355，P=0.000），停藥12周時(shí)低于治療12周時(shí)。治療12周時(shí)和停藥12周時(shí)β-catenin與入組時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=18.468和6.956，均P=0.000），治療12周時(shí)和停藥12周時(shí)低于入組時(shí)；停藥12周時(shí)β-catenin與治療12周時(shí)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=18.129，P=0.000），停藥12周時(shí)高于治療12周時(shí)。見表2和附圖。

表1 兩組治療前基線資料的比較

表2 T2DM組不同時(shí)間基線資料和SFRP1、β-catenin水平變化的比較 （n =72，±s）

表2 T2DM組不同時(shí)間基線資料和SFRP1、β-catenin水平變化的比較 （n =72，±s）

注：1）與入組時(shí)比較，P ＜0.05；2）與治療12周比較，P ＜0.05

項(xiàng)目 入組時(shí) 治療12周 停藥12周 F值 P值BMI/（kg/m2） 25.07±1.62 23.50±1.171） 22.96±0.941） 52.212 0.000 SBP/mmHg 114.46±9.37 113.49±6.23 111.07±7.43 3.621 0.028 DBP/mmHg 74.77±12.38 71.99±9.77 73.44±11.53 1.094 0.337 FPG/（mmol/L） 7.73±1.33 6.68±1.131） 6.80±1.091） 16.851 0.000 Fins/（mmol/L） 10.92±1.21 10.14±3.24 9.62±3.58 3.732 0.026 HbA1c/% 9.33±1.32 6.63±1.301） 6.77±0.961） 114.625 0.000 TC/（mmol/L） 4.89±0.65 3.81±0.531） 3.73±0.331） 111.612 0.000 TG/（mmol/L） 1.59±0.46 1.40±0.30 1.49±0.34 4.677 0.01 LDL-C/（mmol/L） 2.90±0.72 2.61±0.74 2.69±0.60 3.398 0.035 HDL-C/（mmol/L） 1.67±0.38 1.30±0.301） 1.27±0.521） 21.238 0.000 HOMA-IR 3.82±0.22 2.85±0.491） 2.93±0.371） 147.199 0.000 HOMA-β 52.40±41.73 85.91±25.561） 67.65±30.871） 18.162 0.000 SFRP1/（ng/L） 279.90±23.39 378.88±48.091） 363.71±47.211）2） 120.633 0.000 β-catenin/（ng/L） 15.92±2.49 6.93±0.781） 11.87±2.231）2） 376.649 0.000

附圖 T2DM組不同時(shí)間SFRP1及β-catenin水平變化的比較

3 討論

Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、運(yùn)動(dòng)及凋亡等，是細(xì)胞發(fā)育及形態(tài)形成所必需。Wnt信號(hào)通路的卷曲蛋白受體在人的胚胎以及成年胰腺的外分泌部和胰島細(xì)胞上均有表達(dá)，Wnt信號(hào)通路的各種組成成分與胰島母細(xì)胞增殖及胰島素分泌關(guān)系密切。SFRP1是Wnt信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，是Wnt信號(hào)通路的主要拮抗劑，而β-catenin作為Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑的核心元件參與通路調(diào)節(jié)，異常激活可以導(dǎo)致腫瘤、纖維增生等疾病的發(fā)生[6-7]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[8-9]發(fā)現(xiàn)，SFRP1和β-catenin與腎小管間質(zhì)纖維化具有密切關(guān)系，可能導(dǎo)致糖尿病慢性腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。在本研究中，T2DM組SFRP1和β-catenin水平高于NC組，提示糖尿病患者血清SFRP1和β-catenin水平較健康人升高，考慮可能與Wnt/β聯(lián)蛋白信號(hào)通路在胰島β細(xì)胞功能調(diào)控中的作用有關(guān)。Wnt/β聯(lián)蛋白信號(hào)通路不僅可以調(diào)控β細(xì)胞的生長(zhǎng)存活，且對(duì)調(diào)控成熟胰島β細(xì)胞的分泌功能也有重要的作用。RULIFSON等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)純化的Wnt-3a蛋白溶液通過細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白刺激小鼠原代β細(xì)胞增殖，陽性β細(xì)胞的數(shù)量增加2倍，胰島素的分泌量也明顯增加，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，SFRP1可阻斷此作用。DESSIMOZ等[11]敲除胰腺上皮細(xì)胞的β-catenin基因后，發(fā)現(xiàn)胰島細(xì)胞數(shù)量減少，胰島素分泌量減少。

陸靜爾等[12]研究發(fā)現(xiàn)，與二甲雙胍治療比較，采用GLP-1治療對(duì)于新診斷T2DM患者可以更有效的控制空腹血糖和餐后血糖，同時(shí)降低血脂、血壓，改善胰島素抵抗水平等。本研究發(fā)現(xiàn)，與入組時(shí)比較，經(jīng)過利拉魯肽治療12周后，T2DM組BMI、FPG、HbA1c、TC、HOMA-IR均較治療前降低，HOMA-β較治療前升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與以往研究[13]結(jié)果類似。規(guī)范使用GLP-1類似物利拉魯肽治療HbA1c可降低1.3%～1.5%，并能保護(hù)胰島β細(xì)胞功能，增加胰島素合成，改善血脂、降低血壓等。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，利拉魯肽治療12周時(shí)和停藥12周時(shí)SFRP1較入組時(shí)升高，β-catenin較入組時(shí)降低，提示GLP-1可調(diào)節(jié)SFRP1和β-catenin的水平。有學(xué)者[14]認(rèn)為，Wnt信號(hào)通路可能參與GLP-1對(duì)于胰島β細(xì)胞的調(diào)控作用，是Wnt/β聯(lián)蛋白通路在糖尿病領(lǐng)域受到重視的原因之一。作為β聯(lián)蛋白與TCF的核內(nèi)結(jié)合蛋白之一，TCF7L2可介導(dǎo)GLP-1在刺激β細(xì)胞增殖中的作用[15]。一項(xiàng)以鋰模擬Wnt配體活性效益的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[16]發(fā)現(xiàn)，在鋰的刺激下，活化的β聯(lián)蛋白可刺激大鼠ppI啟動(dòng)子的活性，也可以促進(jìn)原代胎小鼠腸道細(xì)胞內(nèi)源性ppI信使RNA的表達(dá)和GLP-1的產(chǎn)生。而TCF7L2與ppI啟動(dòng)子區(qū)域的G2部分的TCF結(jié)合序列在體內(nèi)存在相互作用，且CF7L2基因多態(tài)性與T2DM發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性已廣泛受到關(guān)注。另外，Wnt配體蛋白Wnt 3a可以刺激ppI啟動(dòng)子的活化和mRNA的表達(dá)，GLP-1對(duì)Wnt信號(hào)通路可能也有影響[17]。

綜上所述，GLP-1可提高新診斷T2DM患者SFRP1水平，降低β-catenin水平，其原因可能與GLP-1對(duì)Wnt信號(hào)通路的影響有關(guān)，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

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