李璐，柳楠楠

侵襲性真菌病即指真菌侵入人體組織、血液，在這些部位生存、繁殖，致使器官和組織損壞或產(chǎn)生炎癥反應(yīng)的一類疾病[1]。肺侵襲性真菌病即真菌侵襲肺部，損傷了肺部功能，造成肺部出現(xiàn)病理變化[2]。患者常表現(xiàn)為咳嗽、干嘔、頭暈、失眠、無(wú)力、胸悶等癥狀。國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)以念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌為最常見(jiàn)的病原菌[3]。為探討G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷價(jià)值，本研究選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者設(shè)為觀察組，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組（非感染組），對(duì)兩組人員各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，同時(shí)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)在肺侵襲性真菌病中的診斷價(jià)值進(jìn)行觀察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者60例為觀察對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在真菌感染的高危因素；②存在臨床感染的證據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不全者；②不愿參與本項(xiàng)研究者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入侵襲性真菌肺感染者60例，男35例，女25例，年齡36～68歲，平均（54.15±5.25）歲。對(duì)照組納入病例數(shù)60例，男30例，女30例，年齡35～70歲，平均（54.18±5.41）歲，其中40例疑似侵襲性真菌感染，20例排除肺部感染，兩組患者的臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)，且所有患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)，MK3酶標(biāo)儀，T02智能恒溫儀，高速離心機(jī)，振蕩器。（1，3）-β-D葡聚糖檢測(cè)試劑盒，血清半乳甘露聚糖試劑盒。

1.3 方法 G試驗(yàn)：通過(guò)振蕩將100μL血清與0.9 ml樣品處理液混勻，加熱10 min（70℃），放置冷卻槽內(nèi)5 min，同時(shí)在主劑中加入600μL主劑溶解液進(jìn)行溶解，混勻之后放置一邊，做待用準(zhǔn)備。將100μL冷卻完畢的處理液與100μl主劑移至試管內(nèi)，將兩者混勻，插入MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后儀器自動(dòng)計(jì)算出血清中（1,3-β）-葡聚糖的含量。

GM試驗(yàn)：將100μl處理液加至300μl待測(cè)血清中，將兩者混勻，水浴3 min（100℃），然后對(duì)其進(jìn)行離心，離心10 min后取上清液，進(jìn)行備用。在每個(gè)ELISA檢測(cè)孔中添加50μl結(jié)合液和經(jīng)過(guò)處理的50μl上清液，在37℃環(huán)境下放置60 min。各孔加入350μl清洗液后，將其吸干，每孔再次加入200μL顯色液，常溫下避光放置半小時(shí)，每孔加入100μl終止液；在450 nm波長(zhǎng)下，在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料用“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的比較 肺侵襲性真菌感染組患者的血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果高于對(duì)照組（t=-7.390、-16.462、-84.653，P＜0.001），見(jiàn)表1。

表1 兩組患者BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的比較（x±s）Table 1 Comparison of BALFGM,Gtest results in two groups of patients(x±s)

2.2 不同檢測(cè)方法對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較 血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的特異性和靈敏度明顯高于單項(xiàng)檢測(cè)，見(jiàn)表2。

表2 不同檢測(cè)方法對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較Table2 Diagnostic specificity and sensitivity of different detection methods for pulmonary invasive mycosis

2.3 肺侵襲性真菌病患者血實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性 肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)單相和聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確性正相關(guān)，見(jiàn)表3。

3 討論

真菌通過(guò)感染氣管、支氣管和肺部組織等途徑，在氣道黏膜和肺部引發(fā)炎癥，進(jìn)而造成肺部組織出現(xiàn)病理性損害的現(xiàn)象，稱之為肺侵襲型真菌病[4-6]。在該疾病中較為常見(jiàn)的病原菌為念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌，常見(jiàn)于重癥監(jiān)護(hù)室的患者、器官移植者及血液系統(tǒng)腫瘤患者[7]。隨著近年來(lái)廣譜抗生素和糖皮質(zhì)激素應(yīng)用的增加，導(dǎo)致侵襲性真菌的發(fā)病率逐年增高[8-11]。傳統(tǒng)的診斷方法如針吸或病理組織活檢，由于其操作有創(chuàng)傷性、敏感度低、檢出率低等因素，給臨床早期診斷帶來(lái)了一定困難。

表3 肺侵襲性真菌病患者血實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與BALF GM、G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)準(zhǔn)確性的相關(guān)分析Table3 Correlation Analysis of blood laboratory indicators of patients with pulmonary invasive fungal disease and the accuracy of BALFGM and Gtest

肺部經(jīng)受真菌感染時(shí)，（1,3-β）-葡聚糖通過(guò)釋放作用，出現(xiàn)在體液中，常通過(guò)G試驗(yàn)進(jìn)行侵襲性真菌（念珠菌屬、曲霉屬、毛孢子菌等）感染的早期診斷，但只能提示有無(wú)真菌侵襲性感染，并不能確定為何種真菌。而且抗生素的應(yīng)用和輸注白蛋白會(huì)使患者體內(nèi)葡聚糖含量增高，造成G試驗(yàn)假陽(yáng)性率增高。GM檢測(cè)的原理為：曲霉菌的菌絲在生長(zhǎng)過(guò)程中，GM抗原從最薄弱的菌絲頂端釋放，是一類最早釋放的抗原，其釋放的多少與菌量呈正相關(guān)。GM試驗(yàn)對(duì)診斷侵襲性曲霉感染特異性高，?？稍诨颊吲R床癥狀出現(xiàn)前幾天就獲得陽(yáng)性結(jié)果，也可以作為治療效果的參考指標(biāo)之一。但是免疫功能正常的患者，白細(xì)胞會(huì)吞噬半乳甘露聚糖抗原，造成GM試驗(yàn)假陰性率增高。血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)特異性和靈敏度明顯高于單項(xiàng)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），降低了假陽(yáng)性和假陰性率，彌補(bǔ)了各自的缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中G試驗(yàn)的敏感度高于GM試驗(yàn)，GM試驗(yàn)的特異度高于G試驗(yàn)。若兩者聯(lián)合檢測(cè)均陰性，可以排除侵襲性真菌感染。若兩者聯(lián)合檢測(cè)均陽(yáng)性，則侵襲性真菌感染的可能性很大，尤其是曲霉菌感染。此外實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)WBC、NEU%和CRP三項(xiàng)指標(biāo)的水平越高，代表其遭受病原菌侵襲的可能性越大，因此肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗(yàn)單相和聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確性呈正相關(guān)。

通過(guò)以上討論分析，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)在對(duì)肺侵襲性真菌病的診斷中具有較高敏感性和特異性，可作為臨床重要的輔助診斷指標(biāo)。

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