郭繼文，孫云緯，陳 琳，邱克茂，胡友主

(1.廣州開發(fā)區(qū)醫(yī)院普外科，廣州 510730； 2.暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科，廣州 510632)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。目前，對乳腺癌的治療主要有手術(shù)、化療，其中化療是綜合治療乳腺癌的重要方法[1]。但是，有研究[2]顯示，部分患者會(huì)出現(xiàn)化療效果欠佳等現(xiàn)象，而多藥耐藥是導(dǎo)致化療失敗的重要原因，其中多藥耐藥基因(MDR)產(chǎn)物——DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TopoⅡ)是形成化療耐藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)，是導(dǎo)致腫瘤化療失敗以及腫瘤早期復(fù)發(fā)的主要原因。本研究通過對原發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行TopoⅡ的免疫組化分析，并觀察其與相關(guān)臨床病理特征的關(guān)系，旨在探討TopoⅡ蛋白在原發(fā)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2014年6月至2015年12月在廣州開發(fā)區(qū)醫(yī)院和暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為原發(fā)性乳腺癌患者100例，均為女性，年齡32～73(52.76±2.48)歲。按照乳腺腫瘤世界衛(wèi)生組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理組織學(xué)分型：浸潤性導(dǎo)管癌63例，浸潤性小葉癌10例，原位癌20例，黏液腺癌4例，非浸潤性癌3例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例。所有患者術(shù)前均未行新輔助化療、放療或內(nèi)分泌治療。

1.2 方法

1)取患者的乳腺癌組織標(biāo)本，用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5μm厚連續(xù)切片，DAB顯色，蘇木精-伊紅染色(HE染色)，常規(guī)脫水、封片。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測乳腺癌組織中TopoⅡ、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、p53的表達(dá)情況，所有試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司，以上具體操作根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。用PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性乳腺癌組織作陽性對照。2)分析TopoⅡ蛋白與臨床病理特征的關(guān)系及其與ER、PR、p53和預(yù)后的相關(guān)性。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

由2位高年資的病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行閱片。在光學(xué)顯微鏡(日本奧林帕斯公司，型號(hào)：BX51)的產(chǎn)品下隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，對每個(gè)高倍視野中陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比進(jìn)行計(jì)算。然后，對10個(gè)高倍視野陽性細(xì)胞的平均百分比進(jìn)行計(jì)算，以細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，若陽性細(xì)胞低于10%為陰性，反之為陽性，其中低度表達(dá)(+)為10%～29%，中度表達(dá)()為30%～49%，強(qiáng)陽性表達(dá)()為≥50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，變量間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

100例患者乳腺癌組織中TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)率為58.00%(58/100)，陰性表達(dá)率為42.00%(42/100)；ER陽性表達(dá)率為38.00%(38/100)，陰性表達(dá)率為62.00%(62/100)；PR陽性表達(dá)率為35.00%(35/100)，陰性表達(dá)率為65.00%(65/100)；p53 陽性表達(dá)率為27.00%(27/100)，陰性表達(dá)率為73.00%(73/100)。100例患者乳腺癌組織中TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)率明顯高于ER、PR、p53(P<0.05)。

年齡為≤50歲、腫瘤大小為≤2 cm、病理類型為浸潤性導(dǎo)管癌TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)率與年齡>50歲、腫瘤大小為>2 cm，病理類型為浸潤性小葉癌、原位癌、黏液腺癌、非浸潤性癌比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表1。

表1 TopoⅡ蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和ER、PR、p53表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.947、0.785、0.627、0.468，均P<0.05)。

3 討論

乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤。有研究[3]顯示，我國乳腺癌的患病率呈逐漸增加的趨勢，且在近10年患病率增加了30%，嚴(yán)重威脅女性的身心健康。因此，為降低乳腺癌患者的病死率，早期、準(zhǔn)確診斷乳腺癌以及判斷其預(yù)后具有重要的臨床意義。

由于乳腺癌的臨床癥狀不顯著，大部分乳腺癌患者來院就診時(shí)常處于中晚期，且只能接受化療，但有研究[4]發(fā)現(xiàn)，部分患者由于多藥耐藥導(dǎo)致化療效果欠佳，預(yù)后較差。目前，有研究[5]證明，胚胎型谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶-π、P-糖蛋白和TopoⅡ等均是導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生多藥耐藥的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，可直接影響乳腺癌患者的治療效果及預(yù)后。有研究[6]證實(shí)，TopoⅡ不僅是多藥耐藥的重要靶酶，而且是某些細(xì)胞藥物作用的靶點(diǎn)，可介導(dǎo)多種化療藥物產(chǎn)生耐藥性。另外，TopoⅡ廣泛存在于生物體細(xì)胞核內(nèi)，是控制核酸生理功能以及調(diào)節(jié)核酸空間結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化的關(guān)鍵酶。有文獻(xiàn)[7-9]報(bào)道，TopoⅡ高表達(dá)可提示瘤細(xì)胞的復(fù)制速度加快，并說明腫瘤的惡性程度高。因此，可將TopoⅡ作為正常細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞增殖的標(biāo)志物之一，對評估化療效果及預(yù)后具有十分重要的意義。本研究結(jié)果顯示，100例患者乳腺癌組織中TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)率明顯高于ER、PR、p53(P<0.05)，TopoⅡ蛋白陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和ER、PR、p53表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.947、0.785、0.627、0.468，均P<0.05)，提示TopoⅡ蛋白在原發(fā)性乳腺癌組織中可高表達(dá)，可能為評估乳腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一。馬士輝等[10]探討人表皮生長因子受體2(HER-2)、TopoⅡα以及Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TopoⅡα的擴(kuò)增或高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有顯著的相關(guān)性，并認(rèn)為，可將TopoⅡα作為評估乳腺癌預(yù)后的有效指標(biāo)之一，該觀點(diǎn)與本研究基本一致。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鞏雷，陳萍，程薇，等.熒光原位雜交(FISH)檢測乳腺癌中HER-2基因狀態(tài)與p53、Ki-67、TOPOⅡ表達(dá)的相關(guān)性[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016，24(21)：3382-3386.

[2] 楊艷，杜云翔，張闖，等.p63、P-gp、GST-π及Topo-Ⅱ在食管鱗癌組織中的表達(dá)[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2016，35(6)：927-931.

[3] Palermo G，Minniti E，Greco M L，et al.An optimized polyamine moiety boosts the potency of human type Ⅱtopoisomerase poisons as quantified by comparative analysis centered on the clinical candidate F14512[J].Chem Commun(Camb)，2015，51(76)：14310-14313.

[4] 王全志，郭艷風(fēng)，韓芳毅，等.p53與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα在膽囊腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2017，57(1)：30-34.

[5] 程苒，崔軍威，劉曉嶺，等.不同化療藥物對三陰乳腺癌亞型的作用效果研究[J].中國婦幼保健，2016，31(17)：3609-3612.

[6] 葉新青，蔣奕，劉鵬，等.乳腺癌蒽環(huán)類藥物化療療效與TOPOⅡα、HER-2的關(guān)系[J].診斷病理學(xué)雜志，2015，22(1)：38-40，44.

[7] 魏麗，鄧為民.雌激素受體β亞型在乳腺癌內(nèi)分泌治療耐藥中的作用[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué),2015.

[8] 柴其翔，王季石.調(diào)控血紅素加氧酶-1誘導(dǎo)K562A02細(xì)胞增殖、凋亡及耐藥機(jī)制研究[D].貴陽：貴陽醫(yī)學(xué)院，2015.

[9] 尹新紅，曹翠麗.HER2、VEGF、Ki67、TOPOⅡα在乳腺良惡性疾病中表達(dá)部位的比較[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2016.

[10] 馬士輝，凌飛海.乳腺癌組織中HER-2、TOPOⅡα、Ki-67的表達(dá)及臨床意義[J].哈爾濱醫(yī)藥，2016，36(5)：504-506.