賀 凱 王耀東 胡海燕 任碧華 袁光亞

目前，前列腺癌的早期篩查手段較為單一、篩查效果并不理想、臨床應(yīng)用還有一定不足[1]。因此，研究前列腺癌早期診斷的標(biāo)志物很有必要，目前國內(nèi)許多研究選取了血液為樣本，也有部分學(xué)者利用一些蛋白質(zhì)分析技術(shù)進(jìn)行研究，但這些研究都存在成本過高、成分復(fù)雜、難以推廣、特異性低等缺點(diǎn)[2]。因此一種新的更為高效、便捷、特異性強(qiáng)、成本較低的前列腺癌早期診斷的標(biāo)志物篩選研究方式亟待提出。前列腺液是一種大量含有前列腺和精囊的細(xì)胞、蛋白的分泌物[3-4]，取材方便，成本較低，便于臨床研究[5]，因其成分來源只有前列腺和精囊，很容易識別標(biāo)志物，而精囊的惡性腫瘤發(fā)病率非常低，可以視為腫瘤標(biāo)志物來源基本都是前列腺[6-7]。只要從前列腺液中篩選到合適的腫瘤標(biāo)志物，不僅應(yīng)用前景十分廣，還有利于臨床進(jìn)一步研究推廣。因此本研究選取了前列腺液各指標(biāo)中4種較有研究前景的蛋白質(zhì)(α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)進(jìn)行檢測，進(jìn)一步篩選出最合適的標(biāo)志物，旨在提高前列腺癌早期診斷率，為臨床提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

A組為前列腺癌患者組：2015年12月至2016年12月期間在本院治療，經(jīng)檢查明確診斷為前列腺癌的患者77例，平均年齡(51.52±2.74)歲，BMI(21.2±1.6) kg/m2。B組為同期在醫(yī)院體檢的非前列腺癌患者，平均年齡(48.26±2.14)歲，BMI(23.1±1.7) kg/m2，無過往病史且未服用影響體檢的藥物，共28例。所有入選B組的患者排除前列腺方面的隱患以及不可抗因素所引起的前列腺損害。2組患者在平均年齡、BMI上差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

前列腺癌組納入標(biāo)準(zhǔn)[8]：經(jīng)檢查確診為前列腺癌患者；無器官移植、其他惡性腫瘤、自身免疫性疾?。粺o免疫功能缺陷；HIV抗體均陰性；患者同意參與此次研究。前列腺癌組排除標(biāo)準(zhǔn)[9]：除前列腺癌外患者患有其它較為嚴(yán)重的疾病；患者患有自身免疫病或免疫失調(diào)；HIV抗體為陽性；患者不愿意配合術(shù)后隨訪；患者不同意參與此次研究。

1.3 研究方法

獲取前列腺液：通過按摩的方式分別獲取2組患者的前列腺液，約1 ml，制作為標(biāo)本存放。使用夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測標(biāo)本[10]。

A組根據(jù)病理結(jié)果分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個(gè)級別；按照骨掃描結(jié)果將A組分為骨轉(zhuǎn)移組和無骨轉(zhuǎn)移組。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

將A、B組前列腺液標(biāo)本用離心機(jī)處理后按一定順序分別置100 μl于酶標(biāo)板空白孔，標(biāo)記編號。分別在2組孔中加入50 μl酶標(biāo)記液，在36 ℃條件下進(jìn)行60 min左右的反應(yīng)。稀釋洗滌后，加入呈色劑，避光反應(yīng)15 min左右。各組均加入50 μl終止液，輕微震蕩至變色，將標(biāo)本置于標(biāo)儀上讀取OD值，并計(jì)算出各個(gè)蛋白的濃度[11]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組各蛋白平均濃度、陽性率對比

核基質(zhì)蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白的平均濃度2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，α-甲酰輔酶A消旋酶的陽性率2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其余指標(biāo)差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。可以認(rèn)為α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度。見表1。

表1 2組各蛋白平均濃度、陽性率對比

2.2 前列腺癌各組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均濃度對比

不同級別組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、Survivim蛋白平均濃度對比，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；骨轉(zhuǎn)移組與無骨轉(zhuǎn)移組之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、Survivim蛋白平均濃度對比，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。胸腺素B15在不同級別及骨轉(zhuǎn)移與否中的平均濃度均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表2。

3 討論

前列腺癌是當(dāng)前威脅中老年男性健康最大的惡性腫瘤之一。據(jù)國外報(bào)道，死亡率約為12%[12]。近年來，隨著人口的發(fā)展和社會的整體老齡化，我國前列腺癌發(fā)病率不斷提高。由于腫瘤的特點(diǎn)，早期癌性難以及時(shí)發(fā)現(xiàn)治療，導(dǎo)致了患者死亡率大大增加[13-14]。為了解決這一問題，許多學(xué)者提出了標(biāo)志物診斷想法。近年來針對基因、抗原、染色體標(biāo)記的研究層出不窮，但這些研究或多或少都存在著成本較高、取材不易、操作復(fù)雜、難以推廣等缺點(diǎn)[15-16]。因此本次研究選取了取材方便、成本較低、操作比較簡便的前列腺液作為研究材料。

表2 前列腺癌各組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均濃度對比

注：a表示與Ⅰ～Ⅱ組對比，P<0.05；b表示與Ⅱ～Ⅲ組對比，P<0.05；c表示與Ⅲ～Ⅳ組對比，P<0.05。t、P為骨轉(zhuǎn)移與否間的比較。

本研究選取了前列腺液各指標(biāo)中4種較有研究前景的蛋白質(zhì)(α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)進(jìn)行檢測，進(jìn)一步篩選出最合適的標(biāo)志物。通過A組(前列腺癌患者)和B組(前列腺正常體檢人群)各蛋白平均濃度、陽性率對比，在陽性率上，α-甲酰輔酶A消旋酶差異明顯具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；核基質(zhì)蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；可以認(rèn)為α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度。根據(jù)病理結(jié)果、骨掃描結(jié)果將A組分為Ⅰ～Ⅱ組、Ⅱ～Ⅲ組、Ⅲ～Ⅳ組、Ⅳ及以上組；骨轉(zhuǎn)移組、無骨轉(zhuǎn)移組。在各組別之間對比了4種蛋白的平均濃度，發(fā)現(xiàn)在不同級別及有無骨轉(zhuǎn)移之間平均濃度對比上，α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質(zhì)蛋白、Survivin蛋白平均濃度對比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；胸腺素β15平均濃度對比差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能是：α-甲酰輔酶A消旋酶在癌細(xì)胞過氧化物酶和線粒體中活性較強(qiáng)，而胸腺素β15與肌動細(xì)胞息息相關(guān)，能夠體現(xiàn)不同病情之間的變化。

綜上所述，α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度，胸腺素β15濃度隨著病情的分級升高或骨轉(zhuǎn)移進(jìn)程而增高，能夠一定程度上體現(xiàn)出患者病情程度。2種蛋白可結(jié)合應(yīng)用于臨床前列腺早期癌性診斷。

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