張曉嬡 崔霞 王迪 陸崢 陳倩

沙門菌是一種重要的腸道致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中，通過(guò)糞－口途徑傳播，可引起腸胃炎癥狀，嚴(yán)重者導(dǎo)致死亡［1］。沙門菌可引起食物中毒散發(fā)甚至暴發(fā)流行，也能引起院內(nèi)交叉感染［1］。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，全球每年有約1 600萬(wàn)例沙門菌感染病例，其中60萬(wàn)例死亡［2］。對(duì)沙門菌開展耐藥性監(jiān)測(cè)，可以掌握其耐藥性現(xiàn)狀和變化趨勢(shì)，進(jìn)而為臨床用藥策略的調(diào)整提供科學(xué)依據(jù)［3－4］。沙門菌耐藥性監(jiān)測(cè)要求長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)具有穩(wěn)定性和可比較性，因此，對(duì)檢測(cè)方法和實(shí)驗(yàn)試劑的重復(fù)性、不同品牌試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性要求高，但是目前還沒有關(guān)于不同品牌的微量肉湯稀釋藥敏板重復(fù)性和一致性的報(bào)道。2016年，針對(duì)目前我國(guó)沙門菌耐藥性監(jiān)測(cè)中使用最廣泛的2種微量肉湯檢測(cè)藥敏板，進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)和比較。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株 選擇6株不同血清型的沙門菌作為測(cè)試菌株進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，質(zhì)控菌株使用大腸桿菌ATCCTM25922。所有菌株均經(jīng)過(guò)生化和血清鑒定，6株沙門菌編號(hào)和血清型分別為1阿貢納沙門菌、2山夫登保沙門菌、3腸炎沙門菌、4鼠傷寒沙門菌、5黃金海岸沙門菌、6豬霍亂沙門菌。

1.2 藥敏檢測(cè)方法 藥敏試驗(yàn)采用微量肉湯法(依據(jù)2016食源性疾病監(jiān)測(cè)工作手冊(cè))，2種微量肉湯藥敏板分別為上海星佰生物技術(shù)有限公司和美國(guó)賽默飛世爾科技公司(以下簡(jiǎn)稱Thermo)產(chǎn)品，均為革蘭陰性需氧菌藥敏檢測(cè)板，檢測(cè)藥物包括氨芐西林(ampicillin，AMP)、氨芐西林/舒巴坦(ampicillin/sulbactam，AMS)、四環(huán)素(tetracycline，TET)、氯霉素(chloramphenicol，CHL)、頭孢唑啉(cefazlin，CFZ)、甲氧芐胺嘧啶/磺胺甲噁唑(trimethoprim/sulfamethoxazole，SXT)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin，CIP)、頭孢他啶 (ceftazidime，TAZ)、亞胺培南(lmipenem，IMP)、萘啶酸(nalidixic acid，NAL)、頭孢西丁(cefoxitin，CFX)、頭孢噻肟(cefotaxime，CTX)和慶大霉素(gentamicin，GEN)，其結(jié)果與美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)2015年標(biāo)準(zhǔn)比較［5］，以大腸桿菌ATCCTM25922做為質(zhì)控菌株。

2 結(jié)果

2.1 上海星佰藥敏板MIC定量結(jié)果和藥物敏感性結(jié)果可重復(fù)性評(píng)價(jià) 質(zhì)控菌株ATCCTM25922除在TET上2次結(jié)果存在一個(gè)濃度梯度的差異外，其他抗生素2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的MIC值完全一致。質(zhì)控菌株ATCCTM25922的MIC值都在質(zhì)控范圍內(nèi)。6株菌的2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)有14個(gè)孔［14/(13×6)=17.95%］MIC值不一致，均只相差一個(gè)濃度梯度。7種抗生素出現(xiàn)了兩次實(shí)驗(yàn)MIC值不相同的現(xiàn)象。這7種抗生素是 TET、TET、CFZ、CIP、CFX、CTX、GEN，分別有 4、3、2、2、1、1、1 株菌出現(xiàn)差異。在藥物敏感性判斷上，菌株1和2的CFZ藥敏性分別出現(xiàn)不一致結(jié)果，2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別判斷為耐藥和中介;其余MIC出現(xiàn)差異的實(shí)驗(yàn)孔在藥敏判斷上沒有差異。

2.2 Thermo藥敏板MIC定量結(jié)果和藥物敏感性定性結(jié)果可重復(fù)性評(píng)價(jià) 質(zhì)控菌株ATCCTM25922除在TET上2次結(jié)果存在一個(gè)濃度梯度的差異外，其他抗生素2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的MIC值完全一致。質(zhì)控菌株ATCCTM25922的MIC值都在質(zhì)控允許范圍內(nèi)。6株菌的2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)有4孔的［4/(13×6)=5.12%］MIC值不一致，均只相差一個(gè)濃度梯度。13種抗生素中，有3種出現(xiàn)了2次實(shí)驗(yàn)MIC不相同的現(xiàn)象。這3 種抗生素是 AMS、NAL、CFX，分別有 1、2、1株菌出現(xiàn)差異。MIC出現(xiàn)差異的實(shí)驗(yàn)孔在定性判斷上沒有差異。

2.3 兩種藥敏板檢測(cè)結(jié)果一致性評(píng)價(jià) 2種藥敏板對(duì)6株沙門菌和質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCCTM25 922分別開展2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，AMP、SXT、CIP、TAZ的2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果均一致，其余9種抗生素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在差異。質(zhì)控菌株ATCCTM25 922的AMS MIC值在2種藥敏板的2次重復(fù)結(jié)果中存在差異。6株沙門菌2種藥敏板的MIC值結(jié)果存在差異的孔有26個(gè)［26/(13×6×2)=16.67%］，其中2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均存在差異的實(shí)驗(yàn)孔有15個(gè)，一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在差異的實(shí)驗(yàn)孔有11個(gè)(表1)。

表1 2種藥敏板MIC值存在差異的抗生素

15個(gè)2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均存在差異的實(shí)驗(yàn)孔一共涉及5種抗生素:AMS(3株)、CHL(5株)、IMP(2株)、NAL(3株)、CFX(2株)。11個(gè)一次結(jié)果存在差異的實(shí)驗(yàn)孔涉及7種抗生素:AMS、TET、CFZ、NAL、CFX、CTX、GEN。氨芐西林/舒巴坦AMS、NAL 的差異結(jié)果中，上海星佰藥敏板比Thermo藥敏板均高1個(gè)梯度值;TET、CHL、IMP、CFX、CTX、GEN 的差異結(jié)果中，星佰藥敏板比Thermo藥敏板均低1個(gè)或者2個(gè)梯度值(表1)。在定性判斷上，菌株2的CHL用上海星佰藥敏板兩次實(shí)驗(yàn)均判斷為敏感，用Thermo藥敏板兩次實(shí)驗(yàn)均判斷為中介;菌株2的CFX用上海星佰藥敏板兩次實(shí)驗(yàn)均判斷為中介，用Thermo藥敏板兩次實(shí)驗(yàn)均判斷為敏感(表1)。

3 討論

3.1 國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道顯示，近年沙門菌已成為嬰幼兒細(xì)菌性腹瀉的首要病原菌［6，7］。同時(shí)，沙門菌耐藥現(xiàn)狀嚴(yán)峻，有報(bào)道顯示，腹瀉患者分離的沙門菌對(duì)氨芐西林、萘啶酸、四環(huán)素、哌拉西林三代頭孢類抗生素廣泛耐藥［3-4，8］，而且還出現(xiàn)了耐氨基糖苷類和耐碳青霉烯類抗生素的沙門菌［9，10］。所以，有必要長(zhǎng)期連續(xù)地開展沙門菌的耐藥監(jiān)測(cè)，一是為臨床檢驗(yàn)性用藥提供數(shù)據(jù)支持，其次是可以監(jiān)測(cè)耐藥菌的流行傳播現(xiàn)狀和新耐藥菌的出現(xiàn)。

3.2 紙片擴(kuò)散法、自動(dòng)化商業(yè)儀器藥敏檢測(cè)法、微量肉湯稀釋法是目前廣泛用于耐藥性檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的藥敏檢測(cè)方法。紙片擴(kuò)散法檢測(cè)成本低，但是其檢測(cè)結(jié)果受到瓊脂、紙片的質(zhì)量影響較大，結(jié)果穩(wěn)定性和重復(fù)性差，準(zhǔn)確性低［11］。VITEK 2 Compact儀器藥敏檢測(cè)法操作簡(jiǎn)單，適用于臨床批量檢測(cè)，快速獲得藥敏結(jié)果，但是其配套的商業(yè)藥敏卡中的藥物濃度梯度范圍小，不利于長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)耐藥性變化狀況。與其他方法相比，微量肉湯稀釋法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確［12］。商業(yè)化的微量肉湯稀釋藥敏板實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，既能夠應(yīng)用于臨床一線檢測(cè)，又適用于監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)開展長(zhǎng)期耐藥監(jiān)測(cè)。

3.3 在本研究中，評(píng)價(jià)了2種常見的微量肉湯稀釋藥敏板。上海星佰藥敏板和Thermo藥敏板的重復(fù)性好，但在檢測(cè)和監(jiān)測(cè)中應(yīng)該考慮MIC測(cè)定結(jié)果存在一個(gè)梯度的實(shí)驗(yàn)誤差。2種藥敏板的結(jié)果可以綜合在一起分析，但需考慮MIC測(cè)定結(jié)果一個(gè)梯度的實(shí)驗(yàn)誤差。綜上所述，使用這2種藥敏板開展藥敏檢測(cè)和監(jiān)測(cè)重復(fù)性好，不同批次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以進(jìn)行綜合分析。

［1］Voetsch A C，Van Gilder T J，Angulo F，et al.Food net estimate of the burden of illness caused by nontyphoidal Salmonella infections in the United States［J］.Clin Infect Dis，2004，38(Suppl):S127 －134.

［2］Majowicz S E，Musto J，Scallan E，et al.The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis［J］.Clin Infect Dis，2010，50(6):882 －889.

［3］張曉嬡，王迪，陳倩.北京市食源性非傷寒沙門菌的分子分型和耐藥性研究［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2015，27(3):232－237.

［4］崔志剛，王愛敏，王鳴柳，等.嬰幼兒腹瀉感染的非傷寒沙門菌分子分型和耐藥情況研究［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2014，29(6):428－431.

［5］CLSI. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: seventeenth informational supplement M100-S22［S］.Wayne，PA:Clinical and Laboratory Standards Institute，2012.

［6］楊小蓉，謝曉英，任敏，等.四川省成都市433例嬰幼兒腹瀉病原微生物監(jiān)測(cè)分析［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2012，27(2):97－100.

［7］焦繼光，劉會(huì)霞.嬰幼兒腹瀉病原微生物的感染特點(diǎn)分析［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11(20):44－45.

［8］沈美萍，吳曉燕，王良平.2009－2013年浙江省平湖市沙門菌臨床感染血清型及耐藥性分析［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2014，29(7):560－563.

［9］Folster J P，Rickert R，Barzilay E J，et al.Identification of the aminoglycoside resistance determinants armA and rmtC among non-Typhi Salmonella isolates from humans in the United States［J］.Antimicrob Agents Chemother，2009，53(10):4563－4564.

［10］DayMR，MeunierD，DoumithM，et al.Carbapenemaseproducing Salmonella enterica isolates in the UK［J］.J Antimicrob Chemother，2015，70(7):2165 －2167.

［11］崔俊昌，宋秀杰.不同MH瓊脂對(duì)于替加環(huán)素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌藥敏結(jié)果的影響［J］.中國(guó)藥物應(yīng)用監(jiān)測(cè)，2012，9(1):84－86.

［12］鄒自英，雷啟麗，劉媛，等.鮑曼不動(dòng)桿菌替加環(huán)素不同藥敏檢測(cè)方法敏感性對(duì)比分析［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36(7):880－881.