李占巍　鄭杰　劉斐

【摘要】 目的 探討子宮頸鱗癌組織中波形蛋白（Vimentin）的表達(dá)及其與臨床特征之間的關(guān)系。

方法 選取12例子宮頸上皮正?；颊摺?3例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）Ⅰ級(jí)患者、21例CINⅡ～Ⅲ級(jí)患者、42例子宮頸鱗癌患者作為研究對(duì)象， 采用免疫組化法檢測(cè)其組織中Vimentin表達(dá)情況， 觀察不同組織類型的Vimentin表達(dá)差異及子宮頸鱗癌Vimentin表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 正常的子宮頸上皮細(xì)胞組織中Vimentin的表達(dá)率為0（0/12）， 均呈陰性；CINⅠ級(jí)組織中Vimentin的高、低表達(dá)率分別為0（0/14）、23.1%（3/13）；CINⅡ～Ⅲ級(jí)組織Vimentin的高、低表達(dá)率分別為0（0/21）、47.6%（10/21）；子宮頸鱗癌組織中Vimentin的高、低表達(dá)率分別為16.7%（7/42）、71.4%（30/42）；不同組織間Vimentin表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Vimentin表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床分期以及淋巴轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)關(guān)系（r=0.816、0.799， P=0.007、0.040<0.05）。結(jié)論 Vimentin表達(dá)的升高對(duì)子宮頸鱗癌的發(fā)展起重要推動(dòng)作用， 且Vimentin表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】 子宮頸鱗癌；波形蛋白表達(dá)；臨床特征；病理特征

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.12.023

子宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女生命健康的生殖系統(tǒng)惡性腫

瘤[1]。以往研究發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤狀病毒（HPV）感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)， 但具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚。已有研究表明 [2]， 在人乳頭瘤狀病毒感染的正常上皮細(xì)胞中發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition， EMT）現(xiàn)象[3]。Vimentin是一種重要的Ⅲ型中間絲纖維蛋白， 可作為組織病理學(xué)診斷中鑒別腫瘤細(xì)胞分化起源的特異性生物標(biāo)記物[4]。Vimentin的高表達(dá)意味著EMT過(guò)程的發(fā)生開(kāi)啟了腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程， 是引起腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。作者觀察了Vimentin在宮頸癌及其前期病變中的定位與表達(dá)水平， 探討Vimentin表達(dá)情況與臨床特征之間的關(guān)系， 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年6月～2017年6月遼陽(yáng)市第五人民醫(yī)院收治的12例子宮頸上皮正?；颊撸ㄐ腥訉m加雙附件切除子宮肌瘤）、13例CINⅠ級(jí)患者、21例CINⅡ～Ⅲ級(jí)

患者、42例子宮頸鱗癌患者作為研究對(duì)象， 所有患者在手術(shù)前都沒(méi)有采取任何治療措施。所有患者的診斷均經(jīng)過(guò)經(jīng)病理檢查證實(shí)。子宮頸鱗癌患者年齡31～59歲， 平均年齡48歲；CINⅠ級(jí)患者年齡31～56歲， 平均年齡47歲；CINⅡ～Ⅲ級(jí)患者年齡29～58歲， 平均年齡46歲；子宮頸上皮正?；颊吣挲g40～60歲， 平均年齡51歲。各類型患者年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 采集所有研究對(duì)象子宮頸組織制作標(biāo)本， 標(biāo)本經(jīng)常規(guī)多聚甲醛固定、連續(xù)切片、石蠟包埋。所采集的標(biāo)本經(jīng)液氮冷凍后， 轉(zhuǎn)入-70℃冰箱中保存?zhèn)溆肹5]。免疫組織化學(xué)用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物霉連結(jié)法（SP）法， 用己知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照， 磷酸鹽平衡生理鹽水（PBS）代替一抗作陰性對(duì)照。將切片進(jìn)行脫蠟至水；并置于構(gòu)椽酸鹽中， 進(jìn)行高壓修復(fù)抗原， 2 min后取出， 冷卻至室溫；采用3%濃度的過(guò)氧化氫封閉， 將內(nèi)源性的過(guò)氧化氫酶去除；滴加一抗

（50 μl）后， 在37℃下進(jìn)行孵育， 2 h后用PBS進(jìn)行沖洗， 連續(xù)沖洗3次；再滴加生物素標(biāo)記二抗（50 μl）， 在室溫下進(jìn)行孵育， 30 min后用PBS沖洗， 連續(xù)沖洗3次；再滴加二氨基聯(lián)苯胺（DAB）溶液（50 μl）， 進(jìn)行蘇木精復(fù)染；將復(fù)染后的組織進(jìn)行梯度乙醇脫水， 用二甲苯透明作為透明劑， 用中樹(shù)膠將染好的切片封存。

1. 3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) Vimentin陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)， 其顆粒染色呈現(xiàn)為黃色和棕黃色。免疫組化評(píng)分采用簡(jiǎn)單的半定量方法， 通過(guò)著色程度以及陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)獲得， 其計(jì)算公式為：總評(píng)分=著色程度評(píng)分×著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分；其中總評(píng)分0分為陰性表達(dá)， 總評(píng)分1～4分為低表達(dá)， 總評(píng)分>4分為高表達(dá)。①根據(jù)細(xì)胞的陽(yáng)性著色程度（即細(xì)胞的抗原含量）評(píng)分得出：0分為陰性；1分為弱陽(yáng)性；2分為中等陽(yáng)性；3分為強(qiáng)陽(yáng)性。②在光鏡下， 任意選取4個(gè)高倍視野（×400）， 計(jì)數(shù)出200個(gè)以上的細(xì)胞， 根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)， 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0分表示沒(méi)有陽(yáng)性細(xì)胞；1分表示陽(yáng)性細(xì)胞≤10%；2分表示陽(yáng)性細(xì)胞在11%～50%；3分表示陽(yáng)性細(xì)胞在51%～80%；4分表示陽(yáng)性細(xì)胞>80%。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 子宮頸鱗癌患者臨床病理特征 子宮頸鱗癌患者中年齡<45歲24例、占57.1%， ≥45歲18例、占42.9%；臨床分期Ⅰ期22例、占52.4%， 臨床分期Ⅱ期20例、占47.6%；高、中、低分化宮頸癌病例分別為5、16與21例， 各占11.9%、38.1%與50.0%；淋巴轉(zhuǎn)移者13例、占比31.0%， 未轉(zhuǎn)移者29例、占69.0%；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）手術(shù)分期（2000年標(biāo)準(zhǔn)）：Ⅰ期22例、占52.4%， Ⅱ期20例、占47.6%。

2. 2 所有研究對(duì)象中Vimentin表達(dá)情況 正常的子宮頸上皮細(xì)胞組織中Vimentin的表達(dá)率為0（0/12）， 均呈陰性；CINⅠ級(jí)組織中Vimentin的高、低表達(dá)率分別為0（0/14）、23.1%（3/13）；CINⅡ～Ⅲ級(jí)組織Vimentin的高、低表達(dá)率分別為0（0/21）、47.6% （10/21）；子宮頸鱗癌組織中Vimentin的高、低表達(dá)率分別為16.7% （7/42）、71.4% （30/42）；不同組織間Vimentin表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 3 Vimentin表達(dá)與臨床病理特征間的關(guān)系 Vimentin表達(dá)高低與患者年齡、臨床分期等無(wú)明顯關(guān)系（P>0.05）， 與子宮頸鱗癌臨床分期以及淋巴轉(zhuǎn)移則呈明顯相關(guān)關(guān)系（r=0.816、0.799， P=0.007、0.040<0.05）。

3 討論

本研究經(jīng)比較不同分化級(jí)別宮頸組織中Vimentin的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)， 在不同宮頸組織中Vimentin的表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 由正常的宮頸上皮， 發(fā)展到CIN、子宮頸鱗癌的過(guò)程中， Vimentin表達(dá)呈逐漸升高態(tài)勢(shì)， 這提示組織中的Vimentin升高對(duì)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起到重要作用[6-10]；本研究顯示Vimentin表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床分期以及淋巴轉(zhuǎn)移則呈明顯相關(guān)關(guān)系（r=0.816、0.799， P<0.05）， 這表明Vimentin的表達(dá)， 與宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系。此外， 有研究發(fā)現(xiàn)[11， 12]， 對(duì)于宮頸癌EMT， Vimentin表達(dá)增高起到重要作用， 這為宮頸癌治療提供了新思路。

總之， Vimentin表達(dá)的升高對(duì)子宮頸鱗癌的發(fā)展起重要推動(dòng)作用， 且Vimentin表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移等有密切關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬蔚霞. 宮頸液基細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性患者宮頸癌前病變及宮頸癌符合率的臨床分析. 甘肅科技， 2013， 29（23）：145-147.

[2] 申震. E-Cadherin及Vimentin在子宮頸癌中的表達(dá)及其與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性. 安徽醫(yī)科大學(xué)， 2013.

[3] 郭孝云， 凌斌， 周穎， 等. P73 P16在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及意義探討. 安徽醫(yī)學(xué)， 2010， 31（10）：1141-1143.

[4] 孫守田， 汪巖， 許寧， 等. Vimentin在腎癌組織中的表達(dá)及臨床意義. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2011， 15（2）：251-253.

[5] 申震， 周穎， 趙衛(wèi)東， 等. Vimentin及E-Cadherin在子宮頸癌中的表達(dá)及其與上皮細(xì)胞間質(zhì)化的相關(guān)性. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 48（5）：505-508.

[6] 陳曉紅， 黃俊花， 賴宜段. 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物E-cadherin、vimentin在不同病理分期宮頸癌中的表達(dá)及意義. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2016， 37（25）：3124-3126.

[7] 劉質(zhì)斌. HPV L1殼蛋白、E-cadherin及vimentin在宮頸病變中的表達(dá)及意義. 河北醫(yī)科大學(xué)， 2014.

[8] 韓淑珍， 熊暉， 王小英， 等. 宮頸病變組織中Vimentin、P16INK4A、Smad4的定位、表達(dá)及其在EMT中的作用. 山東醫(yī)藥， 2014， 54（7）：1-4.

[9] 許忠海. URI通過(guò)調(diào)控Vimentin表達(dá)增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞遷移與侵襲能力的研究. 江蘇大學(xué)， 2017.

[10] 鄭小妹， 李偉宏， 吳丹梅， 等. 宮頸癌患者β-Catenin、Vimentin、

Ezrin及P63水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系. 腫瘤藥學(xué)， 2017， 7（4）：416-420.

[11] 張玉梅. 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）及其轉(zhuǎn)錄因子與宮頸癌進(jìn)展的相關(guān)性研究. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)（原名：甘肅中醫(yī)學(xué)院）， 2015.

[12] 肖肖. YB-1在低氧微環(huán)境誘導(dǎo)的宮頸癌EMT中的作用研究. 昆明醫(yī)科大學(xué)， 2014.

[收稿日期：2017-12-22]