李 青 郭明義 - 梁 軍ANG 袁 曉 李麗君 - 曹小彥 -

(1. 廣電計量檢測﹝湖南﹞有限公司，湖南 長沙 410205；2. 長春市食品藥品監(jiān)測中心，吉林 長春 130033)

氯噻啉(imidaclothiz)是中國農(nóng)藥技術(shù)公司自行研制開發(fā)的一種硝基亞甲基煙堿類殺蟲劑[1]，在柑橘蚜蟲、十字花科蔬菜蚜蟲、水稻飛虱、溫室白粉虱、茶樹葉蟬等病蟲防治方面有著很好的效果。目前新煙堿類殺蟲劑對蜜蜂形成急性毒害，可能會對蜜蜂種群的生存和發(fā)展帶來不可接受的影響[2]，歐盟已經(jīng)開始對部分新煙堿類殺蟲劑進行限制使用。目前對氯噻啉殘留量測定的方法有高效液相色譜法[3-6]，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-8]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9]，其研究過程的前處理大部分需要經(jīng)過固相萃取柱進行凈化，有關提取試劑的研究都只比較了幾種常規(guī)的單一提取試劑[10-12]。近年來QuEChERS[13-14]方法在農(nóng)藥中應用比較廣泛，但是其成本也相對較高。本研究擬對茶葉中氯噻啉測定的前處理進行優(yōu)化，分別采用正己烷、乙腈、丙酮3種純試劑，以及正己烷-乙腈(體積比1∶1)、乙腈-丙酮(體積比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)3種混合試劑，作為萃取溶劑對茶葉中氯噻啉進行萃取，通過對萃取時間、萃取體積及萃取回收率幾個方面進行分析，選擇一種提取效率高、雜質(zhì)干擾少的提取試劑。

1 材料與方法

1.1 儀器

超高效液相色譜儀：L-30A型，日本島津公司；

氮吹儀：UGC-24C系列，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司；

超聲儀：KQ-300DB系列，昆山市超聲儀器有限公司；

電子天平：BT125D系列，德國賽多利斯公司；

離心機：LD4-2D系列，北京京立離心機有限公司；

渦旋混合儀：Vortex Genie 2系列，上海芃奇科學儀器有限公司；

超純水儀：Ultra-pure Wster Sytem系列，湖南科爾頓水務有限公司。

1.2 試驗材料

甲醇、乙腈：色譜純，德國默克公司；

正己烷、乙酸乙酯：色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司；

丙酮：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；

磷酸：分析純，國藥集團化學試劑有限公司；

實驗室用水：18.25 MΩ超純水，超純水儀制備。

1.3 標準品與配制

氯噻啉標準物質(zhì)：純度≥95.0%，上海安譜實驗科技股份有限公司；

標準溶液的配制：取10.0 mg標準物質(zhì)于10 mL容量瓶，加乙腈溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL的標準儲備液。吸取不同體積的標準儲備液用乙腈稀釋成濃度為0.05，0.10，0.20，0.50，0.80 μg/mL的標準使用液。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent C18(5 mm×25 mm×0.45 μm)；流動相：甲醇+乙腈+0.1%磷酸溶液=10∶25∶65(體積比)；檢測波長：270 nm；柱溫：35 ℃；進樣體積：10 μL。

1.5 樣品處理

準確稱取1.00 g樣品，加入20 mL正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)混合溶劑，渦旋混合1 min，超聲提取20 min，4 000 r/min 離心5 min，準確移取10 mL上清液于比色管，在40 ℃水浴條件下氮吹干，用乙腈溶解殘留物并定容至1 mL，過0.22 μm濾膜，濾液供高效液相色譜測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 流動相選擇 分別對比甲醇+水(體積比25∶75)、乙腈+水(體積比35∶65)、甲醇+乙腈+0.1%磷酸水溶液(體積比10∶25∶65)3種流動相組合的峰型和雜質(zhì)分離效果，結(jié)果表明，在以甲醇+乙腈+0.1%磷酸水溶液(體積比10∶25∶65)作為流動相時，氯噻啉的峰型最好，在樣品測定時其雜質(zhì)的分離效果較佳，最終選擇其作為氯噻啉測定的流動相，氯噻啉標準物質(zhì)色譜圖見圖1。

2.1.2 檢測波長的選擇 通過對DAD二極管陣列檢測器所得氯噻啉標準溶液的光譜進行分析，其在270 nm處具有最大吸收波長，雜質(zhì)峰的干擾較少，比對270 nm附近多個波長下氯噻啉標準溶液峰面積(見表1)，結(jié)果表明，在270 nm波長下，氯噻啉標準溶液的峰面積最高，氯噻啉標準物質(zhì)光譜圖見圖2。

圖1 氯噻啉色譜圖Figure 1 The chronatogram of imidaclothiz

圖2 氯噻啉標準物質(zhì)光譜圖Figure 2 The spectrogram of imidaclothiz表1 氯噻啉標準溶液各波長峰面積響應值Table 1 Response value of peak area of each wavelength of imidaclothiz standard solution

波長/nm265266267268269270271272273274275峰面積4556847786490464962049869499884988749705497824926648304

2.2 萃取時間的影響

稱取等質(zhì)量的茶葉樣品多份，加入相同質(zhì)量濃度的標準溶液，用等體積的萃取劑分別超聲5，10，15，20，25，30 min，測定的回收率數(shù)據(jù)見圖3。試驗結(jié)果表明，當超聲時間超過15 min后，萃取效果會顯著提高，但超聲時間越長提取出來的雜質(zhì)越多，溶液顏色變化也非常明顯，綜合考慮萃取效果和雜質(zhì)干擾問題，最終選擇超聲20 min為最佳萃取時間。

2.3 萃取體積的影響

稱取多份茶葉空白樣品，分別加入1 mg/kg的氯噻啉標準溶液，各萃取劑分別移取5，10，15，20，25，30 mL的溶液進行提取，其回收率見表2。由表2可知，隨著萃取劑體積的增加，回收率增加較快，當萃取體積為20 mL時，各萃取劑回收率最大，當萃取體積超過20 mL后，萃取回收率變化不大且有降低的趨勢。因此，選擇20 mL作為萃取劑的萃取體積。

圖3 不同萃取時間回收率數(shù)據(jù)Figure 3 Different extraction time recovery rate data

2.4 樣品的測定

選取綠茶作為試驗樣品，按照2.3和2.4的條件進行前處理提取后對樣品空白和樣品加標測定。從圖4可以看出，各萃取劑萃取效果和雜質(zhì)干擾差異較大，其中正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)萃取劑萃取出的雜質(zhì)最少，目標物的萃取效果最為理想。

2.5 回收率和精密度

稱取一定質(zhì)量的茶葉樣品，樣品中加入不同濃度的標準溶液，配制成0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，5.0，10.0 mg/kg不同濃度加標樣品，每個質(zhì)量濃度的樣品稱取3份，分別用正己烷、乙腈、丙酮、正己烷-乙腈(體積比1∶1)、乙腈-丙酮(體積比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)進行提取，按2.1的方法測定，計算各質(zhì)量濃度加標樣品的回收率，見表3。由表3可知，各萃取劑不同濃度3份樣品的回收率相對標準偏差均低于10%；各萃取劑的回收率都在80%～110%，其中正己烷-乙酸乙酯的平均回收率最高。

圖4 樣品加標色譜圖Figure 4 Standard chromatogram of sample表2 各萃取劑不同萃取體積回收率數(shù)據(jù)Table 2 Recovery rate data of different extraction volume of each extractant

萃取劑/mL回收率/%正己烷乙腈丙酮正己烷-乙腈(體積比1︰1)乙腈-丙酮(體積比1︰1)正己烷-乙酸乙酯(體積比1︰1)543.542.146.744.941.843.61055.651.654.858.253.654.91578.681.382.380.379.277.32092.893.591.892.392.893.62591.290.389.190.590.190.73088.388.187.288.186.787.4

表3 各萃取劑不同加標濃度回收率數(shù)據(jù)Table 3 Different spiked concentration of extractant recovery data

3 結(jié)論

本試驗對比了正己烷、乙腈、丙酮、正己烷-乙腈(體積比1∶1)、乙腈-丙酮(體積比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)6種萃取劑對茶葉中氯噻啉的萃取能力。以270 nm 為波長，甲醇+乙腈+0.1%磷酸溶液為流動相對氯噻啉進行測定，通過對萃取時間、萃取體積進行比對后選擇20 mL萃取劑體積、超聲萃取20 min對茶葉中氯噻啉進行提取試驗，結(jié)果表明，6種萃取劑對氯噻啉都有較好的響應，并且雜質(zhì)干擾較少，樣品加標平均回收率分別為82.3%～100.7%，85.8%～101.1%，85.9%～95.2%，82.3%～101.3%，82.4%～100.5%，88.6%～102.3%。因此，6種萃取劑對氯噻啉都有較好的萃取能力，組合試劑萃取能力較優(yōu)，其中正己烷-乙酸乙酯(體積比1∶1)萃取能力最強，穩(wěn)定性較好。

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